Диссертация (1145887), страница 13
Текст из файла (страница 13)
6. А-б). Масса железы достоверноувеличилась по сравнению с контрольной группой в три раза и была равна 730 ±0,05 мг (n=10, p< 0,01; U-критерий Манна — Уитни).Структура молочной железы в световом микроскопе. На гистологическихпрепаратах, полученных из контрольной группы, эпителиоциты, образующиеальвеолы, имеют цилиндрическую форму, ядра располагаются в базальной частиклеток. Альвеолы отделены друг от друга прослойками соединительной ткани. В69полостинекоторыхальвеолзаметнылипидныекапли.Хорошовиднынаполненные кровеносные сосуды (Рис.6.Б -а).На гистологическом препарате ткани молочной железы опытной группыживотных видно, что альвеолы плотно прилегают друг к другу, практически невидна соединительная ткань и кровеносные сосуды. Эпителий альвеолприобретают плоскую форму. В полости альвеол определяется большоеколичество липидных капель (Рис.
6. Б -б).Рис. 6. Гистологическая структура молочной железы мышиА – общий вид долей молочной железы, Б – гистологическая структура долеймолочной железы: а – после кормления, б – после длительной отсадки детенышей.ДМ – доли молочной железы, КС – кровеносные сосуды, СА – скопление альвеол,МС – секреция молока, СТ – соединительная ткань, Эп – эпителий альвеол, ПА –полость альвеолы, Ск– секрет в полости альвеолы.70Морфометрия альвеолы молочной железы.
Высота секреторного эпителия вконтрольной группе мышей равнялась 7,1 0,4 мкм (n=50). В опытной группеэтот показатель составил 4 0,4 мкм (n=50) (p<0,01) (Рис. 7.). Диаметр альвеол вконтрольной и опытной группах также достоверно различался. Минимальныйдиаметр в контроле 55 +0,1 мкм, в опыте 720,1 мкм (p<0,01 n=50; t-критерийСтьюдента ). Максимальный диаметр в контроле 64+0,1 мкм, в опыте 90 0,1 мкм(p<0,01; t-критерий Стьюдента). Таким образом, данные морфометрическихизмерений свидетельствуют об увеличении размеров альвеол молочной железыпосле отсадки детенышей.Рис.
7. Изменения размеров альвеол молочной железы после завершениякормления и после перерыва ( 20 ч.) в кормлении детенышейБелые колонки – размеры альвеол после завершения кормления детенышей.Серые колонки – размеры альвеол молочной железы при длительном перерыве вкормлении детенышей. (***- p< 0,01)714.2 Изменение ультраструктуры эпителиальных клеток альвеолмолочной железы мыши после длительного перерыва в кормлении.При изучении снимков, полученных с помощью электронного микроскопа,видно, что на ультраструктурном уровне есть существенные изменения альвеол вопытной группе по сравнению с контрольной.Изменение конфигурации межклеточного пространства. Накоплениесекрета в полости альвеол может приводить к изменению формы межклеточногопространства, что является одним из признаков накопления секрета.В контрольной группе межклеточное пространство между эпителиоцитамипредставляет собой на электронограммах ровную линию, которая практически неизгибается на всем протяжении боковой поверхности секреторных клеток.
Впротивоположность этому, в опытной группе, мембраны, ограничивающиемежклеточное пространство, изогнуты, само межклеточное пространство неимеет строго ориентированного направления по отношению к полости альвеолы.Кроме этого, изменение боковой поверхности соседних клеток выражаетсяв изменении количества интердигитаций. В контрольной группе интердигитациймало, они располагаются, в основном, в базальной части. На боковыхповерхностях мембран наблюдается не больше одной пары.
В опытной группеколичество этих структур возрастает (Рис.8).72Рис.8. Изменение ультраструктуры эпителиальных клеток альвеол молочнойжелезы мыши после длительного перерыва в кормленииА − эпителиальная клетка после кормления, Б − эпителиальная клетка последлительной отсадки детенышей.ПА − полость альвеолы, ГК − гранулы казеина, Мв − микроворсинки, ПК −плотный контакт, МП − межклеточное пространство, Ид − интердигитации,ЯК−ядроклетки,пространствоЭпС−эндоплазматическаясеть,МаП−межальвеолярное734.3. Изучение активности миелопероксидазы в ткани молочной железымышейАктивность миелопероксидазы в ткани контрольных животных составляла52,4 о.д.е..
Прекращение выведения молока и накопление секрета в полостиальвеол не изменили активность данного фермента, составив 61,0 (p≥0,05 n= 6 и10, соответственно; U-критерий Манна – Уитни).4.4. Обсуждение полученных результатовРастяжение тканей является одним из распространённых методов поизучению механического воздействия на эпителий в различных органах(Cavanaugh et al., 2013; Carattino et al., 2013). Считается, что растяжение полыхструктур, увеличение их размеров, происходит за счет гидростатическогодавления (при накоплении жидкости) и возникающего при этом механическомвоздействии на апикальную поверхность эпителиального пласта.Накопление секрета в полости альвеолы.
Наличие системы протоков, вкоторых также может депонироваться секрет, требовало подтверждениянакопления секрета в полости альвеол молочной железы. Визуальный осмотрмолочной железы свидетельствовал о нахождении молока в железистой тканижелезы. Световая микроскопия подтвердила увеличение количества липидныхкапель в полости альвеолы. Объективным критерием накопления секрета вполости альвеол является увеличение количества гранул казеина (Грачев и др.1976).Электронно-микроскопическийанализультраструктурыальвеолымолочной железы подтверждает, что после прекращения кормления детенышейсамкой в ее полости увеличивается количество гранул казеина.Прямым подтверждением увеличения количества секрета в полостиальвеолы является также изменение ее размеров и высоты секреторных клеток.Увеличение максимального и минимального диаметра альвеол указывает на то,что произошло растяжение этой структуры.
Необходимо учитывать, чтосекреторныйэпителийокруженмиоэпителиальнымиклетками,которыесоединяются между собой отростками и создают внешнюю сеть вокруг эпителия(Hellmen, Isaksson, 1997). Эти клетки обладают механочувствительностью,74поэтому растяжение миоэпителия вызывает повышение их тонуса (Толкунов,Марков. 1997). Следовательно, для растяжения альвеол необходимо, чтобы секретв полости альвеолы создавал давление, которое окажется достаточным длярастяжения соединительной ткани и напряжения миоэпителиальных клеток.Уменьшениевысотысекреторногоэпителия,изменениеконфигурациимежклеточного пространства подтверждают, что на апикальную поверхностьвоздействует давление секрета, вызывающее механическое растяжение альвеолы(Рис.9.).Рис.9. Схема растяжения альвеолы молочной железы мыши по меренакопления секретаСтрелки показывают направление механического давления на эпителиальныеклетки.75Дляизучениявкладаклаудиноввмежклеточноевзаимодействиенеобходимо, чтобы растяжение альвеолы не приводило к разрушению плотныхконтактов.
Поэтому важным элементом разработки метода растяжения альвеолпри накоплении секрета являлся контроль за состоянием плотных контактов.Электронно-микроскопические исследования подтвердили, что плотные контактысохранили свою целостность, то есть они обеспечили плотное прилеганиеапикальных участков мембран соседних клеток. При сверхрастяжении альвеолмолочной железы происходит нарушение плотных контактов и белковые гранулымогут быть обнаружены в межклеточном пространстве (Грачев и др., 1976). Впроведенных экспериментах не наблюдали гранул казеина за пределами полостиальвеолы.Нарушение структурной целостности альвеол может приводить к развитиювоспалительной реакции (Kobayashi et al., 2013). Используя активностьмиелопероксидазы,какмаркераместноговоспалительногопроцесса,установлено, что перерыв в кормлении детенышей не приводит к развитиювоспалительных процессов в ткани молочной железы.
Накопление секрета вполости альвеолы в течение двадцати часов является адекватной моделью дляизучения механического воздействия секрета на эпителий молочной железымыши.76ГЛАВА 5. ВЛИЯНИЕ ДЛИТЕЛЬНОГО ПЕРЕРЫВА В КОРМЛЕНИИДЕТЕНЫШЕЙ НА УРОВЕНЬ, ЛОКАЛИЗАЦИЮ КЛАУДИНОВ И ДЛИНУПЛОТНЫХ КОНТАКТОВ В МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЕ МЫШИ5.1. Изменение уровня белков плотных контактов в молочной железемыши при перерыве в кормлении детенышейПри накоплении секрета в полости альвеолы молочной железы методомВестерн-блота был определен тот же спектр клаудинов, что и в контрольныхусловиях, а именно, клаудин-1, -2, -3, -4, -5, -7, -8, -15, и -16.
Из других белковплотных контактов был определен белок окклюдин (Рис. 10).По данным денситометрии, при накоплении секрета и увеличении давленияв полости альвеолы молочной железы, уровень окклюдина остается безизменения. Среди клаудинов наблюдали разнонаправленное изменение уровнябелков.
Накопление секрета в молочной железе не изменило уровень клаудина-4, 5, -7, -8 и -15. Однако при длительном перерыве в кормлении детенышей самкойувеличилась более чем в три раза экспрессия клаудина-1 и -3 по сравнению сконтролем. В то же время было показано снижение в несколько раз клаудина-2 и 16 (n=4-7, р<0,01; U-критерий Манна-Уитни) (Рис. 11).5.2. Изучение локализации белков плотных контактов в молочнойжелезе мыши при перерыве в кормлении детенышейЛокализация белков плотных контактов была определена методомиммуногистохимии с последующим анализом изображений на сканирующемлазерном микроскопе.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
