Диссертация (1145791), страница 13
Текст из файла (страница 13)
(А, Б, В - окраска гематоксилиномКараччи с эритрозином; Г, Д - окраска железным гематоксилином по Гейденгайну). (А) Стадия 3пар сомитов. Парасагиттальный срез. Плавное увеличение толщины ЖСС в переднезаднемнаправлении. (Б) Стадия 3 пар сомитов. Парасагиттальный срез. Задняя область зародыша скупферовским пузырьком.
(В) Стадия 5 пар сомитов. Парасагиттальный срез. ЖСС утолщен вдорсальной области, особенно под пресомитной мезодермой. (Г) Стадия 9 пар сомитов.Поперечный срез через осевые структуры. Относительно тонкий ЖСС. (Д) Стадия 18 парсомитов. Поперечный срез через вытянутую часть ЖМ, купферовский пузырек и хвостовуюпочку. В задней области ЖМ ЖСС утолщен, контакта с купферовским пузырьком нет. кп –купферовский пузырек, нк – нейральный киль, с – сомит; пж - пластинка желтка; пм –пресомитная мезодерма, х – хорда, я - ядро ЖСС.
Масштаб: А, Б, Г, Д = 20 µm, В = 50 µm.51Характеристики ЖСС, которые будут сохраняться в продолжение последующих стадийпериода сегментации, периода фарингулы и начала личиночного периода, окончательноустанавливаются при образовании вытянутой части ЖМ на стадии 14 пар сомитов (Рисунок 12А).Наибольшую толщину ЖСС имеет вентрокаудально в шаровидной части ЖМ и вентрально в еговытянутой части, наименьшую - спереди и дорсально (особенно дорсо-медиально).
ЖССнесколько утолщается в каудальном и в латеральном направлениях. Увеличенные области ЖССнаиболее богаты ядрами. Ядра в дорсомедиальной части немногочисленные и, по-видимому,очень плоские (на срезах выглядят длинными), располагаются они чаще поодиночке, иногдапарами или небольшими группами. В тонкой передней области ЖСС ядра немногочисленны.Морфология передней области ЖСС не меняется с развитием Кювьеровых протоков и началомкровообращения.В период вылупления выраженность различий по толщине ЖСС вдоль переднезадней идорсо-вентральной осей несколько ниже, чем на предыдущих стадиях.
Так, в передней области,частично граничащей с сердцем, ЖСС несколько утолщается, хотя по-прежнему остаетсятонким. В вентральной области можно видеть ряды из ядер или пар ядер ЖСС. Мы наблюдалиряды из 6-8 ядер, которые могут прилежать друг к другу или находиться на небольшомрасстоянии друг от друга (Рисунок 12Б).Рисунок12.-ЖССданио-рериовпериодысегментации и вылупления. (А - окраска железнымгематоксилиномпоГейденгайну,Б-окраскагематоксилином Майера с эритрозином). (А) Стадия14 пар сомитов. Парасагиттальный срез. ЖСС тонок вдорсальной области и утолщен в вентральной икаудальной. (Б) 60 часов после оплодотворения.Поперечный срез.
Ряд ядер в вентральной области.Отделение округлых фрагментов от пластинок желтка.гм – головной мозг, с – сомит; пж - пластинка желтка,я - ядро ЖСС. Масштаб: А = 100 µm, Б = 10 µm.52При интернализации желтка от желточных пластинок отделяются округлые фрагменты, атакже продолговатые, расположенные между округлыми. Крупные фрагменты, в свою очередь,подразделяются на более мелкие (Рисунок 12Б). При окрашивании железным гематоксилиномпластинки желтка обычно принимают черный цвет, но некоторые из них становятся светлокоричневыми. При окрашивании гематоксилин-эозином желток интенсивно красится эозином,но часть пластинок приобретает серый оттенок или окрашивается очень слабо (Рисунок 13А,13Б).В ходе личиночного периода, на 4-5 сут.
п/о, у разных индивидов даже из одной партииикры утилизация желтка осуществляется с разной скоростью (Kondakova, Efremov, 2014a). Унекоторых из них на пятые и шестые сутки после оплодотворения ЖМ наполнен желтком, тогдакак у других запасы желтка исчерпаны, и происходит дегенерация ЖСС. ЖСС отделен от кишкитонким слоем соединительной ткани. С ЖСС контактируют крупные пигментные клетки. Нарисунках 13 и 14 представлены парафиновые и полутонкие срезы ЖСС личинок.Происходит активная интернализация желточных пластинок, и цитоплазма ЖССокружает крупные фрагменты желтка. ЖСС личинок утолщается, в особенности в дорсальной ипередней области, которая прилежит к печени и сердцу.
В передней области ЖСС можно видетьскопление ядер, в т.ч. гигантских (Рисунки 13А, 14Б, 14Г). На личиночных стадиях средняя длинаядер ЖСС 12,51±0,35 μm. Максимальная зафиксированная длина ядер ЖСС - 24,21 μm. Длинаядер клеток кишечного эпителия - 6,59±0,08 μm. Цитоплазма ЖСС содержит большое количествожелточных включений, и выглядит ячеистой. Уменьшается объем желтка, увеличивается зонализиса желтка (базальная, обращенная к желтку область ЖСС, содержащая наибольшееколичество желточных включений).
На вентральной стороне зона лизиса желтка шире, чем вдругих областях ЖСС. В дорсомедиальной области ЖСС тоньше, чем в других участках, с нимконтактируют крупные пластинки желтка (Рисунки 13Б, 13В, 14А).Когда запасы желтка в вытянутой части ЖМ исчерпываются, внутренние поверхностиЖСС смыкаются. На этой стадии желточный комплекс располагается в полости теламедиально, или смещен латерально.После исчезновения массы желтка ЖСС выглядит плоским (Рисунок 13Г, 13Д). На этойстадии ЖСС может содержать некоторое количество желточных включений, или почти лишенжелтка.
Описанное выше расположение ядер сохраняется до конца существования ЖСС(Рисунок 13Г).53Рисунок 13. – ЖСС данио-рерио в личиночном периоде. (А, Б, В, Г - окраска железнымгематоксилином по Гейденгайну, Д - окраска гематоксилином Караччи с эритрозином). (А)Парасагиттальный срез. Передняя область ЖСС с полиморфными ядрами.
(Б) Поперечный срезЖСС на уровне пищевода. (В) Поперечный срез той же личинки, что на 13 Б в более заднейобласти. Утолщенный ЖСС с многочисленными желточными включениями во времяинтенсивного усвоения желтка. Какие-либо особенности участка ЖСС в контакте с меланофоромне просматриваются. (Г) Парасагиттальный срез остатка ЖСС. Группа ядер сложной формы иостаточная цитоплазма (Д) Сагиттальный срез. Плоский ЖСС с передней группой ядер иостаточными желточными включениями.
жв – желточное включение, к - кишка; м – меланофор;пж - пластинка желтка; пч – печень; я - ядро ЖСС. Масштаб: А, Г = 10 µm, Б, В = 20 µm, Д = 50µm.54Рисунок 14. - Структура ЖСС данио-рерио в возрасте 4-6 сут. п/о. Поперечные полутонкие срезы.Окраска метиленовым синим и толуидиновым синим. (А) ЖСС личинки (4 сут. п/о). Вдорсолатеральй области ядро сложной формы. (Б) ЖСС личинки (5 сут.
п/о) Смещеннаялатерально передняя область ЖСС со скоплением ядер. (В) Передняя область ЖСС личинки (6сут. п/о) с многочисленными полиморфными ядрами. ж – желток; к - кишка; мп – мышцыплавника, п – покровы, пч – печень, эпр - шероховатый эндоплазматический ретикулюм, я - ядроЖСС.
Масштаб: А = 20 µm, Б, В = 10 µmКогда ЖСС претерпевает дегенерацию, под кишкой, рядом с остатком ЖСС можно видетькомпактные скопления клеток, имеющих крупные эозинофильные вакуоли (фагоциты). Унекоторых личинок ядра в остатке ЖСС пикнотические (Рисунки 15А, Б), тогда как у других ядраостаются морфологически не изменёнными (Рисунок 15 В). Остаток ЖСС и предполагаемыефагоциты заключены между слоями соединительной ткани (Ефремов, Кондакова, 2011;Кондакова, 2012; Kondakova, Efremov, 2014a).55Рисунок 15. – Дегенерация ЖСС данио-рерио.
(А, Б - окраска гематоксилином Караччи сэритрозином, В - окраска гематоксилином Майера с эритрозином). Парасагиттальные срезы. (А,Б) Расположенные под кишкой остаток ЖСС с пикнотическими ядрами и крупные клетки сэозинофильными вакуолями (предположительно, фагоциты) позади него. Не-пикнотическиеядра не отмечены. (В) Остаток ЖСС с не-пикнотическими ядрами и фагоциты. к - кишка; пя –пикнотические ядра ЖСС, ф – фагоцит, я – ядро. Масштаб: А, Б = 50 µm, В = 20 µmНами была охарактеризована ультраструктура ЖСС личинки в ходе периодовэндогенного и смешанного питания, начиная с момента вылупления – 3 сут.
п/о (Рисунки 16-19).На всех исследованных стадиях организация ЖСС имеет следующие особенности. В различныхучастках ЖСС вдоль дорсо-вентральной оси показаны вариации ультраструктуры. Различаютсяколичество желточных включений в цитоплазме, длина и густота расположения микроворсинок56апикальной поверхности. Шероховатый эндоплазматический ретикулюм и митохондриипредставленыповсеместновцитоплазмеЖСС,однакопоследниеконцентрируютсяпреимущественно в апикальной области (Рисунки 16, 17, 18). Длинные плоские цистерны шЭПРориентированы параллельно поверхности желтка (Рисунок 16 А). Ядра и митохондрии окруженышЭПР (Рисунки 16 А, 19 Е).У личинок в возрасте 3 сут.
п/о до начала интенсивной утилизации желтка желточныевключения относительно немногочисленные, преимущественно круглые или эллиптические.Зона лизиса желтка не выражена. Дорсальная область ЖСС тоньше других его участков исодержитминимальноеколичествовключений.ВлатеральнойобластиЖСС,неконтактирующей с кровеносными сосудами, микроворсинки расположены относительно редко ижелточные включения немногочисленны (Рисунок 16 А). В области кювьеровых протоков можновидеть относительно густые и длинные микроворсинки ЖСС (Рисунок 16 Б). Для вентральнойобласти ЖСС характерно большее количество желточных включений, микроворсинкирасположены относительно густо (Кондакова и др., 2015, 2016бг; Kondakova et al., 2015, 2016).Рисунок 16.
- Ультраструктура ЖСС данио-рерио в возрасте 3сут. п/о. Поперечные срезы. (А) Латеральная область ЖСС внеконтакта с кровеносными сосудами. Микроворсинки короткиеи редко расположены. (Б) ЖСС в области кювьерова протока.Микроворсинки длиннее и густо расположены, чем напредыдущем изображении. ТЭМ. жв - желточное включение;кк - клетка крови; мх - митохондрия; мв - микроворсинки; пж пластинка желтка; эпр - шероховатый эндоплазматическийретикулюм, я - ядро ЖСС.57Цитозоль ЖСС более электроноплотный, чем цитозоль соседних клеток.
Ядра ЖССразнообразны по размеру и форме, они могут быть гигантскими, лопастными (Рисунки 16Б, 17,18Б).Рисунок 17. - Ультраструктура ЖСС личинок даниорерио. Поперечные срезы. ТЭМ. (А) 4 сут. п/о.Митохондрии различной формы и шЭПР распределеныпо всей толщине ЖСС. Лопастное ядро. (Б) 5 сут. п/о.ЖССвовремяактивногоусвоенияжелтка.Микроворсинки длиннее, ЖСС содержит большежелточных включений, чем у личинок более раннеговозраста. Ядро сложной формы.
жв - желточноевключение; мв - микроворсинки; мх - митохондрия; пж пластинка желтка; эп – экзоцитозный пузырек; эпр шероховатый эндоплазматический ретикулюм; я - ядроЖСС.В личиночный период в ЖСС возрастает количество гомогенных и гетерогенныхвключений – это желточные включения на различных стадиях их переработки. Удлиняютсямикроворсинки (Рисунок 17Б).Для ЖСС данио-рерио характерна эллиптическая форма митохондрий, встречаются такжевытянутые, изогнутые, грушевидные, гантелеобразные митохондрии (Рисунки 17А, 18Б).
Вдорсальной и дорсолатеральной областях митохондрии могут быть ориентированы какперпендикулярно, так и параллельно поверхности ЖСС, тогда как в латеральных областях ЖССони преимущественно располагаются параллельно поверхности (Рисунок 18). Размерымитохондрий варьируют.В апикальной области ЖСС можно наблюдать экзоцитозные пузырьки (Рисунок 17Б).Микроворсинки на апикальной поверхности ЖСС контактируют с клетками соединительнойткани, отделяющей ЖСС от органов пищеварительной системы и от клеток покровов, а также спигментными клетками (Рисунок 18 А).
В дорсолатеральных областях ЖСС микроворсинкирасположены наиболее густо (Рисунок 18 Б).58Рисунок 18. - Ультраструктура ЖСС личинок данио-рерио.Поперечные срезы. ТЭМ. (А) 4 сут. п/о. Контакт ЖСС ипокровов. (Б) 4 сут. п/о. Дорсолатеральная область.Длинные микроворсинки, митохондрии различной формы,лопастное ядро.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
