Диссертация (1145717), страница 2
Текст из файла (страница 2)
Исследование влияния феромона 2,5-ДМП и хемосигналовсамок-одиночек, а также сочетанного действия этих хемосигналов на активациюобонятельных луковиц самцов мышей линии BALB/c .......................................................................1083.10. Эксперимент 11.
Исследование роли обонятельного эпителия вцитогенетических эффектах феромона 2,5-ДМП и хемосигналов самок-одиночек настабильность хромосомного аппарата клеток костного мозга самцов мышей линииСВА .................................................................................................................................................................1113.11. Эксперимент 12.
Исследование влияния хемосигналов самок-одиночек начастоту спонтанных нарушений митоза в клетках костного мозга самцов линииСВА .................................................................................................................................................................1123.12. Эксперимент 13. Исследование влияния хемосигналов самок-одиночек начастоту радиоиндуцированных нарушений митоза в клетках костного мозга самцовлинии СВА .....................................................................................................................................................113ГЛАВА 4. ОБСУЖДЕНИЕ ...........................................................................................................................116ЗАКЛЮЧЕНИЕ ...............................................................................................................................................140ВЫВОДЫ .........................................................................................................................................................140СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ .............................................................................................................................1444СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ2,5-ДМП – 2,5-диметилпиразинАКТГ – адренокортикотропный гормонВНО – вомероназальный органГГ – ганглий ГрюнбергаГГН – ось «гипоталамус-гипофиз-надпочечники»Г-КСФ – гранулоцит-колониестимулирующий факторГОЛ – главная обонятельная луковицаГР – глюкокортикоидные рецепторыГСК – гематопоэтические стволовые клеткиДМП – 2,5-диметилпиразинДНР – двунитевые разрывыДОЛ – дополнительная обонятельная луковицаИФА – иммуноферментный анализКМ – костный мозгЛГ – лютеинизирующий гормонМЕ – международные единицы активностиМК – моча котовМР – меланокортикоидные рецепторыНМ – нарушения митозаНП – носовая полостьОЭ – обонятельный эпителийПВЯ – паравентрикулярное ядро гипоталамусаПл-Пц – полиинозиновая-полицитидиловая кислотаТМТ – 2,5-дигидро-2,4,5-триметилтиазолУФ – ультрафиолетфМРТ – функциональная магнитно-резонансная томографияХА – хромосомные аберрацииХСО – хемосигналы самок-одиночекЦНС – центральная нервная система53BP1 (p53 binding protein) – белок, связывающий p538-оксо-dG – 8-оксо-2'-дезоксигуанозинAkt (RAC serine/threonine-protein kinase) – RAC-серин/треонин протеинкиназаANOVA (analysis of variance) – дисперсионный анализ5APAF1 (apoptotic protease activating factor 1) – фактор активации протеаз апоптоза 1ARRB1 (arrestin beta 1) – β-аррестин-1ATM (аtaxia telangiectasia mutated) – серин/треониновая протеинкиназа, продукт гена«атаксия-телеангиэктазия мутированная»ATR (ataxia telangiectasia and Rad3-related protein) – атаксия-телеангиэктазия и Rad3родственный белокBax (bcl-2-like protein 4) – bcl-2 подобный белок 4Bcl-2 (B-cell lymphoma 2) – белок B-клеточной лимфомы 2BER (base excision repair) – эксцизионная репарация основанийBIR (break-induced replication) – индуцированная разрывом репликацияBOLD (blood oxygen level dependent) – изменение уровня оксигенации тканиCamKII – кальций-зависимая протеинкиназа IICdc6 (cell division cycle 6) – белок контроля за клеточным делением 6Cdt1 (сhromatin Licensing and DNA Replication Factor 1) – фактор лицензирования ирепликации ДНК 1Chk1 (сheckpoint kinase 1) – чекпойнт-киназа 1CldU (5-Chloro-2′-deoxyuridine) – 5-хлор-2′-дезоксиуридинCO-FISH (chromosome orientation fluorescence in situ hybridization) – флуоресцентнаягибридизация in situ с учетом ориентации хромосомCOX-2 (cyclooxygenase-2) – циклооксигеназа-2CYP11B1 (11-beta-hydroxylase) – 11-β-гидроксилазаDbp11 (DNA-binding protein 11) – ДНК-связывающий белок 11DDR (DNA damage response) – ответ на повреждения ДНКDNMT3A (DNA(cytosine-5)-methyltransferase 3A) – ДНК (цитозин-5)-метилтрансфераза 3ADSBR (double-strand break repair (DNA)) – путь репарации двунитевых разрывов ДНКEDTA (ethylenediaminetetraacetic acid) - этилендиаминтетрауксусная кислотаESP (exocrine gland-secreting peptide) – пептид, секретируемый экзокринными железамиG-белок (guanine nucleotide-binding protein) – гетеротримерный гуанин-связывающийбелокHSP (heat shock proteins) – белки теплового шокаIdU (5-Iodo-2'-deoxyuridine) – 5-йод-2'-дезоксиуридинIFNAR (interferon-α/β receptor) – рецептор α/β-интерферонаIL (interleukin) – интерлейкинiNOS (inducible nitric oxide synthase) - индуцируемая синтаза оксида азотаLINE (long interspersed nuclear elements) – длинные диспергированные повторы6LSD (least significant difference) – метод группирования выборок с наименее значимойразницейLTRs (long terminal repeats) – длинные концевые повторыM±SE (medium±standard error) – среднее со стандартной ошибкойMCM (minichromosome maintenance protein complex) – геликазный комплекс поддержанияминихромосомMНС (major histocompatibility complex) – главный комплекс гистосовместимостиMRN (Mre11, Rad50, and Nbs1 proteins) – белковый комплекс, состоящий из Mre11, Rad50и Nbs1NER (nucleotide excision repair) – эксцизионная репарация нуклеотидовNF-kB (nuclear factor kappa-light-chain-enhancer of activated B cells) – ядерный фактор«каппа-би»NHEJ (non homologous end joining) – негомологичное воссоединение концовPBS (phosphate buffered saline) – фосфатно-солевой буферPI3K (phosphoinositide 3-kinase) – фосфоинозитид-3-киназаPKA (protein kinase A) – протеинкиназа АPol (polymerase) – полимеразаRPA (replication protein A) – репликативный белок АSca-1 (Stem cells antigen-1) – антиген стволовых клеток 1SDSA (synthesis-dependent strand annealing) – путь синтез-зависимого отжига цепейSGK1 (serum and glucocorticoid-regulated kinase 1) – зависящая от сыворотки иглюкокортикоидов киназа 1SINE (short interspersed nuclear elements) – короткие диспергированные повторыSPF (specific pathogen free) – свободный от специфических патогеновSSA (single strand annealing) – путь отжига одиночной цепиTET2 (Tet methylcytosine dioxygenase 2) – tet-метилцитозин диоксигеназа 2TGF-β (transforming growth factor beta) – трансформирующий ростовой фактор бетаTh (T helper) – Т-хелперTLS (translesion synthesis) – синтез через повреждениеTNF (tumor necrosis factor) – фактор некроза опухолейTNRs (trinucleotide repeats) – тринуклеотидные повторыTRP2 (tyrosinase-related protein 2) –тирозиназа-связанный белок 2V1R и V2R (vomeronasal receptor 1 and 2) – вомероназальные рецепторы 1 и 2 типаγ-H2AX (phosphorylated H2A histone family, member X) – фосфорилированный гистонH2AX7ВВЕДЕНИЕАктуальность и степень разработанности темы исследованияСтабильность генома соматических клеток является необходимым фактором дляподдержаниягомеостазамногоклеточныхорганизмов.Дестабилизациягеномасоматических клеток приводит к значительному числу патологий у высших животных, вчисло которых входят многие формы рака (Cha, Yim, 2013; Jaiswal et al., 2014),атеросклероз (Gray et al., 2015), нейродегенеративные заболевания (Madabhushi et al.,2014), являющихся главными причинами смертности человека (Kirkwood, 1996).
Крометого, дестабилизация генома является одним из важнейших молекулярных механизмовстарения (Lopez-Otin et al., 2013; Moskalev et al., 2013). Особенно критическую рольдестабилизация генома играет в тканях, клетки которых постоянно делятся. К такимтканям относится, в том числе и костный мозг, клетки которого дают начало целому рядуобновляющихся клеток иммунной и кроветворной систем.Существует ряд данных, показывающих, что сам организм может регулироватьстабильность генома клеток, например, индуцируя повреждения ДНК в случае развитиястресс-реакции (Gidron et al., 2006; Malvandi et al., 2010; Hara et al., 2011).
Это важно всвете того, что организмы в течение жизни часто подвергаются стрессирующимвоздействиям, которые могут быть как физической, так и психо-социальной природы(Ulrich-Lai, Herman, 2009). Удобной моделью для изучения психо-социальных стрессорову грызунов является использование социально-значимых хемосигналов. Хемосигналымогут индуцировать у мышей различные поведенческие и физиологические реакции, втом числе и реакцию стресса (Kavaliers et al., 2001; Sotnikov et al., 2011; Voznessenskaya,Malanina, 2013).
При этом хемосигналы остаются полностью неинвазивным воздействием,что приближает их к ситуации человека, где большая часть стрессоров являетсянеинвазивными психо-социальными факторами (Cohen, 1980).Одним из самых изученных хемосигналов мышей является 2,5-диметилпиразин (2,5ДМП), который выделяется самками мышей в стрессорных условиях переуплотненногосодержания (Novotny et al., 1986) и вызывает ряд физиологических эффектов, угнетающихрепродуктивную функцию и изменяющих многие показатели иммунной системы умышей-реципиентов (Jemiolo, Novotny, 1993, 1994; Даев, 2007). Ранее полученные внашей лаборатории данные говорят о том, что 2,5-ДМП может дестабилизировать геномсоматических и половых клеток мышей (Даев, Дукельская, 2003; Даев и др., 2008).
Приэтом конкретные механизмы генотоксического действия 2,5-ДМП остаются неясными, икроме того, неизвестно, опосредованы ли эффекты 2,5-ДМП развитием стресс-реакции.8Также не изучено, как генотоксические эффекты 2,5-ДМП соотносятся с эффектамидругих классических стрессоров.Известно, что физиологическое влияние хемосигналов может быть заблокированопредоставлением других хемосигналов (Drickamer, 1982, 1988: Jemiolo et al., 1989).
Приэтом остается неясным, могут ли генотоксические (мутагенные) эффекты, вызванныепредоставлением запахов (2,5-ДМП), также быть нейтрализованы воздействием другиххемосигналов. Это особенно интересно в свете изученности большого количествафармакологических антимутагенов (Maisin et al., 1977) и одновременного отсутствиякакой бы то ни было научной информации об антимутагенной роли психо-социальныхвоздействий.Важно учитывать, что любой организменный ответ на психо-социальный факторобусловлен специфической активацией нервной системы, которая, например, можетактивировать развитие стресс-реакции в ответ на одни воздействия и блокировать стресс вслучае других воздействий.Таким образом, целью данной работы было изучение роли ольфакторных психосоциальных факторов в индукции различных состояний нервной системы,приводящих к изменению стабильности генома клеток костного мозга мышей.Для достижения поставленной цели были сформулированы следующие задачи:1) Изучить стабильность генома в клетках костного мозга самцов мышей разныхлиний (СВА, С3Н, BALB/c) при однократных воздействиях 2,5-диметилпиразина (2,5ДМП) и классических стрессоров (хемосигналов мочи хищника, иммобилизации).2) Выявить нейрональный и эндокринный ответы на предоставление хемосигналастрессированных самок – 2,5-ДМП и хемосигналов самок-одиночек (ХСО), несодержащих 2,5-ДМП, у самцов линий СВА и BALB/c.3) Изучить роль глюкокортикоидов и катехоламинов в индукции нарушений митозав клетках костного мозга самцов линии СВА при воздействии 2,5-ДМП и иммобилизации,посредством воздействия фармакологическими блокаторами стресс-гормонов.4) Исследовать возможность предотвращения генотоксического эффекта 2,5-ДМП наклетки костного мозга самцов линии СВА при предоставлении другого ольфакторногостимула – ХСО.5) Оценить роль обонятельного эпителияносовой полости в модуляциистабильности генома клеток костного мозга самцов линии СВА при действии 2,5-ДМП иХСО.6) Изучить влияние ХСО на частоту спонтанных и радиоиндуцированныхнарушений митоза в клетках костного мозга самцов линии СВА.9Научная новизнаВ данной работе было впервые показано, что предоставление 2,5-ДМП активируетгормональную ось гипоталамус-гипофиз-надпочечники, и тем самым индуцирует стрессреакцию у самцов мышей.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
