Отзыв на автореферат 2 (1145689)

Просмтор этого файла доступен только зарегистрированным пользователям. Но у нас супер быстрая регистрация: достаточно только электронной почты!

Текст из файла

отзыв на автореферат диссертации Алексея Александровича Колобова «Получение рекомбинантного антагониста рецептора интерлейкина 36 человека и изучение его физико-химических и биологических свойств», представленную на соискание ученой степени кандидат биологических наук по специальности 03.01.04- биохимия Псориаз является достаточно широко распространенным и тяжелым заболеванием. Поэтому поиск эффективных способов лечения этого заболевания является важной и актуальной задачей. В последние годы появились данные, свидетельствующие о том, что некоторые цитокины играют важную роль в развитии псориаза и зачастую определяют тяжесть протекания этого заболевания.

В частности, было высказано предположение, что блокада рецептора интерлейкина 36 (ИЛ-36) может быть многообещающим подходом для лечения этого вида дерматоза. В этой связи тема диссертационной работы А.А. Колобова, посвященной разработке метода получения рекомбинантного антагониста рецептора ИЛ-36 и исследованию его некоторых физико-химических свойств, представляется в высшей степени актуальной и важной. На первой стадии своего исследования диссертант получил штаммы Е.со(Б содержащие плазмиду рЕТЧ136йат и способные экспрессировать в достаточно больших количествах антагонист рецептора ИЛ-ЗБ. Однако оказалось, что в этом случае до 60% получаемого белка содержат в своем составе инициаторный остаток формилметионина, и такая форма белка не обладает биологической активностью.

Па этой причине возникла необходимость коэкспрессии в клетках Е.сой дополнительного фермента, а именно метионинаминопептидазы, способной удалять инициаторный остаток формилметионина. Автор использовал три плазмиды с контролем экспрессии под действием лактозы, рамнозы и арабинозы. Вводя в клетки Е.со!( две плазмиды, кодирующих антагонист рецептора ИЛ-36 и метионинаминопептидаэу, автор сумел получить препараты антагониста рецептора интерлейкина полностью лишенных начального остатка формилметионина, Это является несомненным достижением диссертанта.

Возникает вопрос, почему в своей работе диссертант использовал две разных плазмиды, нельзя ли было получить полицистронную плазмиду, последовательность которой содержала бы информацию как о целевом белке, так и о метионинаминопептидазе. Продолжая свое исследование, А.А. Колобов сравнил эффективность экспрессии антагониста рецептора ИЛ-36 в разных штаммах Е.сой и приступил к масштабированию процесса культивирования и получения полупрепаративных количеств целевого белка. В ходе выполнения этой части работы проводилась оптимизация условий культивировании бактерий, условий и срока добавки индукторов, а также совершенствовались методы очистки от липополисахаридов. При этом подбирались наиболее эффективные и технологичные подходы для решения этих непростык задач.

Анализируя препараты очищенного белка, диссертант утановил их микрогетерогенность, выявляемую при изозлектрическом фокусировании и электрофорезе. Было высказано предположение, что зта микрогетерогенность является следствием химической модификации аминокислот, происходящей в ходе выделения или хранения препарата белка, Белок был проинкубирован при щелочных значениях рН и/или подвергнут окислению под действием перекиси водорода. Оказалось, что после инкубации при щелочных значениях рН в препарате белка накапливается модифицированная форма, имеющая более низкое значение изозлектрической точки и обладающая измененной электрофоретической подвижностью.

Автор приходит к заключению, что в ходе выделения (и/или хранения) белок подвергается дезамидированию и предсказывает, какой остаток аспарагина может подвергаться этой модификации, Мне кажется, что это заключение не является бесспорным. Было бы желательным провести массспектрометрическое определение молекулярной массы модифицированного белка и показать, что убыль его массы точно соответствует удалению аминогруппы, а не связано, например, с окислением остатков цистеина и/или метионина, которое легко происходит при щелочных значениях рН (рН 9,0), которые были использованы в ходе работы, Как бы то ни было, в ходе выполнения работы было четко показано, что инкубация белка при щелочных значениях рН может приводить к микрогетерогенности. По это причине были внесены изменения в протокол выделения белка и был понижен рН на стадиях очистки белка на О- сефарозе и при хранении конечного препарата белка.

Заключительные разделы автореферата, имеющие более биотехнологическую, чем биохимическую направленность, касаются методов очистки целевого белка от липополисахаридов и масштабирования лабораторного производства. В ходе выполнения этой части работы диссертант сумел разработать эффективные методы масштабирования лабораторного производства и привести подробное описание этапов пилотного промышленного производства.

Несомненным достоинством этой части работы является тот факт, что в ходе выполнения этой части исследования А.А. Колобов сумел предложить высокоэффективный метод получения рекомбинантнога антагониста рецептора ИЛ-36 и дал рекомендации ,.х .l Николай Борисович Гусев Член-корреспондент РАН, доктор биологических наук по специальности 03.01.04 биохимия профессор кафедры биохимии биологического факультета Федерального Государственного бюджетного образовател образования «Московский государственный университет им о профессионального Ленинские Горы дом 1 корп.

12, Москва, 119234 Телефоны:7-495-939-2747;8-495-939-27-76, Факс 8.495-939-43-09 е-птаК: Я'боьетшпта~Ои; е1оггзгпа~!.Ыо,газо,п~ е Я, ЗА'ЗпРЯЮ ' —;--":"' ':югуузк т,.ззг бгхдагкч~схвго ф . Вы«23 БВГУ по хранению и возможному использованию полученного препарата в медицинской практике. Завершая анализ диссертационной работы А.А. Колобова, можно заключить, что она посвящена интересной и актуальной проблеме, выполнена на высоком научном уровне и содержит оригинальные данные. Важно отметить, что помимо теоретического интереса, данное исследование представляется очень важным и с практической точки зрения. Можно надеяться, что результаты, полученные при выполнении этого исследования, будут со временем использоваться в медицинской практике.

Судя по автореферату диссертационная работа Алексей Александровича Колобова «Получение рекомбинантного антагниста рецептора интерлейкина 36 человека и изучение его физико-химических и биологических свойствя соответствует требованиям, предъявляемым к кандидатским диссертациям, выдвигаемым "Положением о присуждении ученых степеней" (утверждено Постановлением Правительства РФ от 24.09.2013 г. Кз 842 с изменениями Постановления Правительства РФ от 21.04.2016 г.

КВ335, в ред. Постановления Правительства РФ от 02.08.2016 г. К9748), а ее автор заслуживает присвоения ученой степени кандидата биологических наук по специальности 03.01.04- биохимия. .

Характеристики

Тип файла PDF

PDF-формат наиболее широко используется для просмотра любого типа файлов на любом устройстве. В него можно сохранить документ, таблицы, презентацию, текст, чертежи, вычисления, графики и всё остальное, что можно показать на экране любого устройства. Именно его лучше всего использовать для печати.

Например, если Вам нужно распечатать чертёж из автокада, Вы сохраните чертёж на флешку, но будет ли автокад в пункте печати? А если будет, то нужная версия с нужными библиотеками? Именно для этого и нужен формат PDF - в нём точно будет показано верно вне зависимости от того, в какой программе создали PDF-файл и есть ли нужная программа для его просмотра.

Список файлов диссертации