Отзыв официального оппонента (1145697)
Текст из файла
отзыв официального оппонента Бурова Сергея Владимировича на диссертационную работу Колобова Алексея Александровича «Получение рекомбинантного антагониста рецептора интерлейкина 36 человека и изучение его физико-химических и биологических свойств», представленную на соискание ученой степени кандидата химических наук по специальности 03.01.04 — Биохимия Актуальность темы диссертации Псориаз относится к числу наиболее распространенных хронических заболеваний кожи. По различным данным ему подвержено до 5',4 населения, и эта цифра имеет тенденцию к увеличению.
Особенную опасность представляют тяжелые формы псориаза, развитие которых может приводить к поражению суставов, соединительных тканей и обгцей интоксикации организма. При этом возможности эффективного лечения заболевания ограничены, а многие используемые препараты имеют выраженные побочные эффекты такие, как поражение печени и нейтропепия, приводящая к снижению иммунитета и высокой чувствительности к бактериалызым инфекциям. Таким образом, разработка новых лекарственных соединений, оказывающих непосредственное воздействие на кожные покровы и свободных от системных побочных эффектов, безусловно является актуальной задачей. Учитывая роль интерлейкинов (ИЛ) в патогенезе псориаза, к числу перспективных направлений следует отнести целенаправленное подавление активности ИЛ-36 в результате применения специфического антагониста рецептора (ИЛ-36РА). Разработка технологии получения фармацевтической субстанции рекомбинантного антагониста рецептора и готовой лекарственной формы на ее основе относится к числу основных задач рецензируемой работы.
Новизна проведенных исследований н полученных результатов Научная новизна работы заключается во всестороннем изучении влияния постгрансляционных модификаций на биологическую активность ИЛ-36РА, определению условий, препятствующих их образованию и разработке эффективных методов контроля чистоты конечного продукта. К числу безусловных достоинств работы относится адаптация технологии получения безметиониновых белков применительно к обьекту исследования.
что позволило добиться существенного снижения содержания непроцессированной формы белка и, соответственно, повысить биологическую активность синтезируемого препарата. Степень обоснованности и достоверности научных положений, выводов, и рекомендаций, сформулированных в диссертации Обоснованность и достоверность научных положений, выводов и рекомендаций, изложенных в диссертации, подтверждается применением современных методов научных исследований и приборного обеспечения, корректным использованием алгоритмов обработки экспериментальных данных, а также апробацией основных результатов на конференциях, в опубликованных работах н заявке на выдачу патента на изобретение. Практическая значимость полученных автором результатов.
Автором диссертационной работы проведен большой объем исследований, связанных с получением наиболее эффективного штамма-продуцента безметионинового ИЛ-36РА и масштабированием процесса его культивирования, Оп гимизированы условия культивирования штаммов в биореакторе, что позволило нарабатывать за один прием до 300 г биомассы.
Разработаны действенные методы выделения и очистки ИЛ-36РА, позволяющие получить конечный продукт с чистотой более 95',4 и содержанием бактериального липополисахарида на уровне 2-4 единицы эндотоксина на миллилитр. Проведено подробное изучение природы постгрансляционных модификаций ИЛ-36РА и разработаны чувствительныс методы определения содержания такого рода примесей.
На основании полученных результатов оптимизированы условия очистки и хранения продукта, минимизирующие возможность протекания побочных реакций. В результате проведенных исследований разработана технология хроматографической очистки ИЛ36РА, пригодная для использования в пилотном промышленном производстве н наработан высокочистый препарат в количестве, достаточном для проведения доклинических испытаний. Оценка содержания диссертации, ее завершенности Рецензируемая работа состоит из введения, трех глав, заключения и выводов, включает 5 таблиц, 58 рисунков и ! приложение. Список литературы содержит 178 наименований, Во введении сформулирована научная проблема, которой посвящена работа, обоснована ее актуальность, приведены сведения о научной новизне и практической значимости, сформулированы основные задачи исследования.
Обзор литературы содержит подробные сведения о структуре и функциях цитокинов группы ИЛ-36 и их возможной роли в патогенезе псориаза. Анализ литературных данных позволяет автору выявить наиболее перспективные направления разработки новых лекарственных препаратов, к числу которых относится антагонист рецептора ИЛ-36. Глава Материалы и методы исследования описывает методические подходы, использованные при получении штаммов-продуцентов и их культивировании. а также протоколы обработки биомассы бактериальных клеток для последующего выделения ИЛ36РА. 11одробно рассматриваются различные варианты хроматографической очистки продукта и анализа его чистоты, включая определение содержания дезамидированной формы.
В главе Результаты и обсуждение даются необходимые пояснения, обосновывающие выбор конкретных методов очистки продукта и оптимизацию условий хранения фармацевтической субстанции. Цель работы автором выполнена полностью, основные положения диссертации и выводы сомнений не вызывшот. Замечания по диссертационной работе Несмотря на общее положительное впечатление от работы, необходимо сделать несколько замечаний; 1. К сожалению, работа содержит болыпое количество опечаток, неточностей, рассогласования времен, единственного и множественного числа и т.д. Эти погрешности„в том числе„встречаются в выводе 1 и Заключении.
Термин флокуляция везде указан как «флоккуляция»; бицинхониновая кислота называется «бицинхонициновой», вместо ссьшки на таблицу 2 приводится ссылка на таблицу 1, присутствует ссылка на цитированную литературу под номером 11, хотя нумерация в списке литературы отсутствует и т.д. 2. Автор использует большое количество терминов, которых либо не существует, либо они относятся к жаргонным выражениям, применяемым в пределах конкретной лаборатории. Таких, как «преднабитые колонки»; «негативная анионообмепная хроматография»; «сорбционная анионообменная хроматография» (стр. 42) нли «замкнутая дисульфидная связь» и «хиральный радиус бокового радикала» (стр. 71). 3. Н екоторые понятия использованы некорректно, например, «димеризация рецептора с корецептором» (стр.
14) — понятно, что в данном случае димеризацни быть не может; или «вторичные антитела» (стр. 50), которые на самом деле вторичными не являются. 4. Более существенные замечания относятся к экспериментальной части. Из описания на стр. 43 невозможно понять, почему ИЛ-36РА ведет себя по-разному в одинаковых условиях разделения. Судя по всему, причиной является неверно указанное значение рН.
Из описания аффинной хроматографии на стр. 45 можно только догадываться, что является сорбентом и каким образом на нем иммобилизованы антитела, поскольку эти данные не приводятся. Местами пропущены экспериментальные подробности или встречаются неоконченные фразы типа: «Для этого 40 мкл образца ИЛ-36РА с концентрацией 500 мкггмл в 50 мМ фосфате натрия рН 6,5 с 0,2 М сульфата аммония» (Стр. 54). Что при этом имелось ввиду? 5.
В разделе доказательства чистоты конечного продукта указаны два метода; ВЭЖХ и ОФВЭЖХ. При этом только из фармакопейной статьи можно понять, что под ВЭЖХ имеется ввиду вариант эксклюзионной или гельпроникающей хроматографии, хотя в списке сокращений приводится аббревиатура ГП-ВЭЖХ. а в экспериментаггьной части тот же метод носит название ГПХ-ВЭЖХ.
6. То, что в структуре ИЛ-361'А дезамидируется остаток Азгч в положении 139, понятно без применения какой-либо специальной программы — это известное свойство последовательности Азп-0!у. Утверждение„что потеря амидной группы может оказывать существенное влияние на пространственнукг структуру белка, представляется весьма сомнительным. А вот реакция транс-пептидации с образованием изо-аспарагиновой кислоты вполне может. Однако, этот вопрос и возможность образования такого рода соединений в работе не рассматриваготся. 7.
Характеристики
Тип файла PDF
PDF-формат наиболее широко используется для просмотра любого типа файлов на любом устройстве. В него можно сохранить документ, таблицы, презентацию, текст, чертежи, вычисления, графики и всё остальное, что можно показать на экране любого устройства. Именно его лучше всего использовать для печати.
Например, если Вам нужно распечатать чертёж из автокада, Вы сохраните чертёж на флешку, но будет ли автокад в пункте печати? А если будет, то нужная версия с нужными библиотеками? Именно для этого и нужен формат PDF - в нём точно будет показано верно вне зависимости от того, в какой программе создали PDF-файл и есть ли нужная программа для его просмотра.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
