Диссертация (1144820), страница 30
Текст из файла (страница 30)
14, 15 и 16).Ген F5. Сравнительный анализ частот комбинаций аллелей и аллелейдля гена F5 не выявил статистически значимых отличий между группой сгестозом и контрольной группой беременных женщин (p=0,55, χ2=0,36 иp=0,55, χ2=0,36) (см. таблицу 14).Ген ITGB3. Сравнительный анализ частот комбинаций аллелей иаллелей для гена ITGB3 не выявил статистически значимых отличий междутаковым у женщин с гестозом и контрольной группой беременных (p=0,53,χ2=1,29 и p=1,00, χ2<0,01) (см. табл. 14).186Ген SERPINE1.
Сравнительный анализ частот комбинаций аллелей иаллелей для гена SERPINE1 выявил статистически значимые различиямежду группой с гестозом и контрольной группой беременных покомбинациям алллелей, но не по аллелям (p=0,01, χ2=9,53 и p=0,25, χ2=1,30,соответственно)(см.табл.14).Приизучениираспределениячастоткомбинаций аллелей по гену SERPINE1 выявлено преобладание генотипариска 5G/4G в группе женщин с гестозом по сравнению с контрольнойгруппой (p=0,003 (p’=0,05); ОШ=2,91; 95%ДИ: 1,38-6,30) (см.
табл. 17).Ген FGB. Сравнительный анализ частот комбинаций аллелей и аллелейдля гена FGB не выявил статистически значимых отличий между группой сгестозом и контролем (p=0,91, χ2=0,18 и p=1,00, χ2<0,01) (см. табл. 14).Ген F2. Сравнительный анализ распределения частот комбинацийаллелей и аллелей для гена F2 выявил статистически значимые отличиямежду таковыми у женщин с гестозом и контрольной группой беременныхженщин (p=0,04, χ2=4,05 и p=0,05, χ2=3,99) (см. таблицу 14). При этом быловыявлено преобладание протективного генотипа G/А в контрольной группеженщин по сравнению с женщинами с гестозом (p=0,022 (p’=0,154);OШ=0,11; 95%ДИ: 0,002-0,96) (см.
табл. 17).3.2.1.1.3. Анализ ассоциации изученных вариантов генов с показателямиартериального давления и концентрацией белка в моче у женщин с гестозом.Дляпроведениякорреляционногоанализакаждомугенотипуприсваивали определенное ранговое значение (см. табл. 18) и рассчитываликоэффициент корреляции.Таблица18.Ранговыезначениякомбинацииаллелейдлякорреляционного анализа.ГЕНAPOEПолиморфизм/ Номер rsРанговое значение генотипа0123rs429358,E3/E3E3/E4E2/E3E4/E445E2/EE2/E187RENAGTAGTR1AGTR2BDKRB2(BKR2)MTHFRNOS3LPLF5SERPINE1ITGB3(GP3a)F2FGBrs7412rs2368564rs699rs5186rs11091046rs1799722rs1801133rs1799983rs328rs6025rs1799768rs5918rs1799963rs1800790G/GT/TA/AC/CC/CG/AM/TA/CC/AT/CA/AM/MC/CA/AT/TC/CC/TT/TT/TT/CC/CC/CC/GG/GG/GG/AA/A4G/4G 5G/4G 5G/5GT/TT/CC/CG/GG/GG/AG/AA/AA/A-4-2--------В связи с тем, что распределение показателей АД «САД», «ДАД» и«концентрация белка в моче» у беременных женщин с гестозом и вконтрольной группе не соответствовало нормальному (p<0,0001), для анализакорреляции между комбинациями аллелей и клиническими параметрамииспользовали линейный коэффициент корреляции Спирмена (Реброва, 2002).Статистически значимых различий между показателями «САД», «ДАД»,«концентрация белка в моче» и комбинациями аллелей каждого гена убеременных женщин с гестозом выявлено не было (см.
табл. 19). Дляконтрольной группы беременных была установлена корреляция: междупоказателем «ДАД» и комбинациями аллелей по гену BDKRB2 (ρ= -0,23;95%ДИ: -0,405 - -0,030; p=0,02), между показателем «концентрация белка вмоче» и комбинациями аллелей по гену MTHFR (ρ= 0,23; 95%ДИ: 0,0300,405; p=0,02) (см. табл. 20).188Таблица 19. Корреляционная связь между показателями «САД», «ДАД», «концентрация белка в моче» икомбинациями аллелей для генов APOE, REN, AGT, AGTR1, AGTR2, BDKRB2, MTHFR, NOS3, LPL, F5, ITGB3,SERPINE1, F2, FGB у беременных с гестозом.ГЕНAPOERENAGTAGTR1AGTR2BDKRB2(BKR2)MTHFRNOS3LPLF5SERPINE1ITGB3(GP3a)F2FGBПолиморфизм/ Номер rsСистолическоедавление(САД), мм.рт.ст.коэффициенткорреляцииp-value NДиастолическоедавление Белок, г/л.(ДАД), мм.рт.ст.коэффициенткоэффициенткорреляцииp-value Nкорреляцииp-valueNrs429358,rs7412rs2368564rs699rs5186rs110910460,09-0,07-0,06-0,040,100,480,380,480,600,2261145145145145-0,060,050,04-0,060,090,660,550,670,470,3161145145145145-0,120,01-0,04-0,02-0,020,350,890,610,800,7861139139139139rs1799722rs1801133rs1799983rs328rs6025rs1799768-0,04-0,010,27-0,06-0,07-0,040,670,860,040,630,400,621451455959146146-0,070,140,24-0,060,000,110,410,090,060,640,960,1914514559591461460,020,010,13-0,19-0,050,040,840,920,320,140,570,621391395959140140rs5918rs1799963rs18007900,070,10-0,100,380,240,231461461460,050,13-0,080,590,120,32146146146-0,060,04-0,030,490,640,72140140140189Таблица 20.
Корреляционная связь между показателями «САД», «ДАД», «концентрация белка в моче» икомбинациями аллелей для генов APOE, REN, AGT, AGTR1, AGTR2, BDKRB2, MTHFR, NOS3, LPL, F5, ITGB3,SERPINE1, F2, FGB у беременных контрольной группы.ГЕНПолиморфизм/ Номер rsСистолическоедавление(САД), мм.рт.ст.коэффициенткорреляцииp-value Nrs429358,APOErs7412RENrs2368564AGTrs699AGTR1rs5186AGTR2rs11091046BDKRB2(BKR2)rs1799722MTHFRrs1801133NOS3rs1799983LPLrs328F5rs6025SERPINE1 rs1799768ITGB3(GP3a)rs5918F2rs1799963FGBrs1800790*- статистически значимые отличияДиастолическоедавление Белок, г/л.(ДАД), мм.рт.ст.коэффициенткоэффициенткорреляцииp-value Nкорреляцииp-valueN0,07-0,14-0,060,09-0,050,460,150,570,350,649999999999-0,08-0,17-0,04-0,01-0,030,460,090,660,910,7699999999990,040,050,05-0,050,050,720,590,610,620,619999999999-0,190,04-0,090,04-0,020,020,060,670,400,670,810,8399999999101101-0,23-0,06-0,030,09-0,15-0,01*0,020,530,790,370,120,90999999991011010,050,23-0,13-0,08-0,02-0,060,59*0,020,190,410,810,5699999999101101-0,12-0,030,020,210,800,83101101101-0,09-0,040,000,360,690,961011011010,16-0,04-0,140,100,670,15101101101190Таким образом, сравнительный анализ частот комбинаций аллелейбольшинства генов, каждый из которых ранее был идентифицирован какпотенциальный ген-кандидат гестоза, не выявил наличие достовернойассоциации с гестозом.
Исключения составляют только гены AGTR2,MTHFR, SERPINE1 и F2. У беременных с гестозом проведенный анализтакже не позволил выявить корреляционной зависимости между такимиважными клиническими маркерами как АД и концентрация белка в моче.По всей видимости, исследование вклада единичных генов в риск МФЗявляется важным, но не достаточным основанием для понимания механизмаразвития этих заболеваний, учитывая их комплексный характер, и требуетоценкиматематическоймоделиМФЗ,основаннойнакомплексномисследовании генетического полиморфизма.3.2.1.1.4.
Математические модели риска гестоза.Были аппробированы три математические модели: (подхода): оценка«балловкомбинацииаллелей»,методмножественногосниженияразмерности («оценка» риска по анализу взаимодействия генов (см. п. 1.4.6.2)и обобщённая линейная модель (моделирование болезни путем учета всехфакторов риска) (см. п. 1.4.6.3).3.2.1.1.4.1. Метод подсчета баллов» («балльный» подход).Гипертония разной степени является частым и очень грознымсимптомом, зачастую требующая немедленного прерывания беременностипри гестозе.
На 1-ом этапе для оценки вклада нескольких полиморфныхгенов в патогенез гипертонии при гестозе с помощью разработанного намиметода подсчета баллов (Глотов и др., 2007) были проанализированныеполиморфные сайты генов ренин-ангиотензиновой система и функциональноблизкого ей кинин-брадикининовый каскад (см. рис. 17). Ферменты данныхкаскадов связаны многочисленными химическими реакциями, что позволяетоценить всю систему в целом.191АНГИОТЕНЗИНОГЕНРЕНИНКИНИНАНГИОТЕНЗИН IАНГИОТЕНЗИНПРЕВРАЩАЮЩИЙ ФЕРМЕНТАНГИОТЕНЗИН IIРЕЦЕПТОР 1 КАНГИОТЕНЗИНУ IIБРАДИКИНИНРЕЦЕПТОР 2 КАНГИОТЕНЗИНУ IIРЕЦЕПТОР 2 КБРАДИКИНИНУРисунок 17. Ренин-ангиотензиновая и кинин-брадикининовая системы.Апробированы два подхода.
В первом - гомозиготам по аллели,«несвязанной с повышенным уровнем АД» присваивали 0 баллов,гетерозиготам – 1 балл, гомозиготам по аллели, «связанной с повышеннымуровнем АД» – 2 (согласно п. 1.5.1.2 и 1.5.2.1). Затем для каждого пациента(индивида) суммировали баллы всех исследованных комбинации аллелей(подсчеты проводили по всем изученным генам данного каскада (REN (83G>A), AGT (M235T), AGTR1 (1166A>C), AGTR2 (3123C>A), BDKRB2 (58T>C), включенных в «Кардиочип»). После чего, в каждой группеопределяли среднюю величину баллов и сравнивали суммы баллов междугруппами.В другом варианте при подсчете баллов учитывали только комбинацииаллелей, «связанные с повышенным уровнем АД», то есть численноезначение (один балл) присваивали только гомозиготам по аллели, «связаннойс повышенным уровнем АД», остальным комбинациям присваивали 0баллов.
Как и в 1-м варианте, баллы каждого индивидуума суммировали,192определяли среднюю величину для всей группы, сравнивали суммы балловмежду группами больных и здоровых.Статистическиаллелей»изначимых«суммыотличийнеблагоприятных«суммыбаллов»балловпокомбинацийгенамренин-ангиотензиновой и кинин-брадикининовой систем между пациентами сгестозом (N=145) и контрольной группой беременных женщин (N=100)выявлено не было (p=0,34 и p=0,81 для обоих данных подходовсоответственно) (см.
рис. 18).Рисунок 18. Окно результатов анализа «суммы баллов комбинацииаллелей» у женщин с гестозом по сравнению с контрольной группой (впрограмме STATISTICA 12.0).3.2.1.1.4.2. Метод MDR.Дляанализавзаимодействиягеноввформированиипредрасположенности к гестозу были взяты следующие гены: APOE, REN,AGT, AGTR1, AGTR2, BDKRB2, MTHFR, NOS3, LPL.
Параметры ихвзаимодействия приведены в табл. 21 и на рис. 19.Лучшей двухлокусной моделью (см. табл. 21) оказалась комбинацияAPOE (E2/E3/E4) x AGTR2 (C/A) со средней степенью воспроизводимостью193CVC=5/10,стестируемойсбалансированнойточностью0,81,специфичностью 0,68 и чувствительностью 0,93 и χ2=94,63 (р<0,0001).Анализ таблиц сопряженности, включающих комбинации всех возможныхвариантов 2-х локусной модели, позволил установить одно сочетаниеповышенного и четыре комбинации пониженного риска развития гестоза(табл. 22). Наиболее значимой оказалась комбинация пониженного риска:APOE (E3/E3) x AGTR2 (C/A) (p=5,30*10-8, OR=0,18, 95%ДИ: 0,085-0,350).АБРисунок 19. Диаграмма моделей взаимодействий генов при гестозе.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
