Диссертация (1141412), страница 9
Текст из файла (страница 9)
Заэто время из растительного материала полностью извлекается жирное масло, происходит егогидролиз на составляющие жирные кислоты с их одновременным метилированием. Затемжидкую фазу сливали с растительного сырья, к ней добавляли 1,0 мл воды очищенной.Полученные извлечения анализировали на газо-жидкостном хроматографе AgilentTechnologies 6890, в качестве детектора применяли масс–спектрометрический детектор 5973N.Условия хроматографирования: капиллярная хроматографическая колонка HB-INNOWax(30мх0,25ммх0,15мкм); использование в качестве газа-носителя – гелий, скорость подачи гелия– 0,02 мл/с, объем хроматографической пробы – 2 мкл.; скорость введения хроматографическойпробы 1,2 мл/мин в течение 12 секунд; температура нагревателя ввода пробы 250°С.Для установления жирных кислот проводили сравнение полученных результатов сзаведомыми образцами метиловых эфиров и спектров содержащихся в библиотеке массспектров Nisto5 и Willey 2007.
Вспомогательными программами для идентификации служилиAMDIS и NIST. Концентрации индивидуальных жирных кислот рассчитывали методомвнутреннего стандарта [8, 211].2.2.14 Анализ сесквитерпеновых лактоновКачественный анализПрисутствие в сырье сесквитерпеновых лактонов устанавливали в спиртовыхизвлечениях методом тонкослойной хроматографии.Для этого по 1 г травы кульбабы осенней и кульбабы шершавоволосистой, проходящейсквозь сито с диаметром частиц 1 мм, заливали 30 мл спирта этилового 90%. Экстракциюпроводили на водяной бане с обратным холодильником в течение 30 минут при температуре60°С.
Извлечения охлаждали на воздухе, фильтровали через бумажные фильтры и упаривали наводяной бане до объема 2 мл для нанесения на хроматограмму.Хроматографию вели на пластинках «Сорбфил» в системе растворителей толуол –этилацетат (93:7) с последующим проявлением ванилин-сернокислым реактивом [85].38Количественное определениеКоличественноеопределениесуммысесквитерпеновыхлактоновпроводилигравиметрическим методом по методике К. С. Рыбалко.Для этого аналитические пробы сырья около 10 г (точные навески) измельчали доразмера частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 1 мм, заливали 100 мл водыочищенной, подогретой до 80°С и настаивали в течение 30 минут.
Процесс повторяли ещечетыре раза в соотношении 1:5 в течение 1 часа.Водные извлечения фильтровали, фильтраты объединяли и обрабатывали хлороформом(в делительной воронке) в соотношении 20:1, затем еще три раза в соотношении 30:1.Полученные хлороформные извлечения объединяли, а растворитель отгоняли при пониженномдавлении. Полученный остаток обрабатывали диэтиловым эфиром в соотношении 1:1.Выпавший осадок сушили в сушильном шкафу при температуре 60°С в течение 3 часов ивзвешивали на аналитических весах с точностью до 0,0001 г.Содержание сесквитерпеновых лактонов в процентах (х) в пересчете в воздушно-сухомсырье определяли по формуле:х=где m1– масса колбы в граммах;(2 − 1 ) ∗ 100,(1)m2– масса колбы с осадком в граммах;m – масса сырья в граммах.2.2.15 Минеральный состав исследуемых видов растенийИдентификациюисодержаниеминеральныхэлементовпроводилиметодомэмиссионного спектрального анализа [96] в лаборатории спектрального анализа ФГУ«Пятигорский центр стандартизации, метрологии и сертификации».Анализируемые пробы сырья тщательно высушивали, измельчали, сжигали иподвергали озолению в муфельной печи при доступе воздуха, в течение 2 ч при температуре450 – 550°С.
Полученную таким способ золу охлаждали в эксикатореи взвешивали нааналитических весах. Анализ проводили с применением дифракционного спектрографа ДФС-81 (Россия). Количественное содержание минеральных компонентов устанавливали с помощьюспектрограмм с погрешностью, не превышающей 2% в пересчете на золу [5, 69, 71, 72, 88, 187].392.3 Методы изучения углеводов2.3.1 Выделение полисахаридовПолисахаридные комплексы из лекарственного растительного сырья кульбабы осенней икульбабышершавоволосистойводорастворимыевыделялиполисахаридныеметодомкомплексыН.К.(ВРПС),Кочетковапектиновыепофракциям:вещества(ПВ),гемицеллюлоза А и гемицеллюлоза Б (ГЦ А и ГЦ Б).Выделение водорастворимого полисахаридного комплексаВыделение ВРПС проводили из воздушно-сухого сырья кульбабы осенней и кульбабышершавоволосистой после предварительного удаления фенольных соединений (рисунок 3)[9,63].
Полученный таким образом шрот (50,0 г) экстрагировали на водяной банедвадцатикратнымобъемомгорячейводыочищеннойна протяжении2часовприпериодическом перемешивании. Экстракцию водорастворимых полисахаридных комплексовповторяли дважды, при этом количество экстрагента уменьшали до десятикратного, а времяэкстракции – до одного часа. Сырье сепарировали в центрифуге. Извлечения объединяли иконцентрировали при помощи вакуумного компрессора до 250 мл.С целью более полной очистки полученных экстрактов от фенольных соединенийприменяли полиамидный сорбент высотой 5 см. Сорбент промывали водой очищенной.Промывную жидкость объединяли с очищенными извлечениями. К полученным таким образомизвлечениям добавляли тройной объем спирта этилового 96%.
Водорастворимые полисахаридывыпадали в осадки, которые промывали спиртом этиловым 96%, высушивали и взвешивали.Выделение пектиновых веществПектиновые вещества выделяли из шрота сырья исследуемых видов растений родакульбаба после сепарации ВРПС (рисунок 3). Для извлечения ПВ применяли растворы кислотыщавелевой 0,5% и аммония оксалата 0,5%, взятые в равных долях. Сырье заливали 1000 млэкстракционной смеси и помещали на водяную баню, нагретую до 80-85°С, на 150 минут.Экстракцию повторяли еще два раза, уменьшая объем экстрагента до 500 мл.
Полученныеизвлечения концентрировали под вакуумом, очищали и прибавляли пятикратный объем спиртаэтилового 96%. Осажденные ПВ отделяли от жидкой фазы фильтрованием, промывали спиртомэтиловым 96%, высушивали на воздухе и взвешивали [28, 63].40Шрот травы кульбабы, послеэкстракции полифенольныхсоединений спиртом этиловым 96%ЭкстрагентКонцентрированиеГорячая водаСмесь растворов кислотыщавелевой и аммонияоксалата (1:1) 0,5%Водное извлечениеВодный концентратОсаждение 3объемамиспирта этилового 96%Водорастворимыйполисахаридныйкомплексводный растворнатрия гидроксида 10%ЩелочноеизвлечениеКислое извлечениеКислый концентратОсадок нафильтрефильтратОсаждение 5объемами спиртаэтилового 96%ПектиновыевеществаОсаждение2 объемамикислоты уксуснойОсаждение 2объемами спиртаэтилового 96%Гемицеллюлоза АГемицеллюлоза БРисунок 3 – Схема выделения полисахаридных комплексов из травы растений рода кульбаба41Выделение гемицеллюлозы А и БГемицеллюлозу А и гемицеллюлозу Б выделяли из шрота сырья исследуемых видоврастений рода кульбаба после сепарации ПВ (рисунок 3).
К оставшемуся сырью добавляли 250мл водного раствора натрия гидроксида 10% и оставляли при комнатной температуре на 12часов. Экстракты пропускали через сложенную вчетверо марлю. К процеженным извлечениямдобавляли двойной объем кислоты уксусной. Выпавшие осадки отделяли фильтрованием. Нафильтрах в виде осадков концентрировалась гемицеллюлоза А. К оставшимся фильтратамприбавляли двойной объем спирта этилового 96%. Выпавшие осадки гемицеллюлозы Ботфильтровывали, промывали спиртом этиловым 96%, высушивали и взвешивали [27, 63].2.3.2 Изучение полисахаридовКислотный гидролизДля определения моносахаридного состава различных полисахаридных фракцийпроводили гидролиз кислотой серной.
Выбор данной минеральной кислоты обусловлен тем, чтоона не вызывает значительных разрушений сахаристой структуры [9, 171, 181].Навески полисахаридных комплексов массой около 50 мг помещали в ампулы объемом 5см3, вносили 2,5 мл кислоты серной 2 н. Ампулы запаивали и помещали в сушильный шкаф,разогретый до 100-105°С. Продолжительность гидролиза варьировалась в зависимости отисследуемой фракции, 6 часов для ВРПС, 20-24 часов для ПВ и 48 часов для ГЦ А и ГЦ Б.После выдерживания отведенного времени ампулы вскрывали, а их содержимое переливали вхимические стаканчики.
Ампулы обмывали 5 мл воды очищенной, промывную жидкостьобъединяли с гидролизатом.В полученный раствор вносили бария карбонат при перемешивании до значения рНравного 7. Определение водородного показателя проводили по универсальному индикатору.Растворы фильтровали через бумажные фильтры, которые промывали водой очищенной дообъема фильтрата равного 10 мл. К полученным фильтратам прибавляли спирт этиловый 96% вразличных соотношениях: для осаждения ВРПС, ГЦ А и ГЦ Б – трехкратных, а для ПВ –пятикратных.Осажденные растворы тщательно перемешивали, выпавшие осадки отфильтровываличерез 1-2 часа.
Фильтраты концентрировали на кипящей водяной бане до конечного объемаоколо 0,5 мл (раствор А). Осадки бариевых солей уроновых кислот отделяли от фильтра,42растворяли в 2,5 мл воды очищенной. Очищали при помощи катионита КУ-2 (Н+) до значенияводородного показателя (pH) 3 – 4, фиксируемого при помощи универсального индикатора.Растворы фильтровали через бумажные фильтры и концентрировали до конечногообъема около 0,5 мл (раствор Б).Хроматографический анализДля изучения углеводного состава использовали хроматографию на бумаге FN-1. Дляхроматографического изучения нейтральных сахаров анализировали растворы А методомнисходящей хроматографии с использованием хроматографической системы н-бутанол –пиридин – вода очищенная (6:4:3).
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
