Диссертация (1141412), страница 11
Текст из файла (страница 11)
Расчетпоказателя антиоксидантной активности, которому соответствует концентрация биологическиактивных веществ восстанавливающего характера в пересчете на кверцетин, рутин и цинарозид(мг/мл) проводили по формуле:Cк × Vк × Vo,(8)Vх × mгде В – концентрация биологически активных веществ восстанавливающего характераB=спиртового извлечения из травы кульбабы осенней и кульбабы шершавоволосистой,израсходованного на титрование 1 мл раствора калия перманганата 0,05 Н, мг/г;Cк – концентрация кверцетина (рутина или цинарозида) в растворе, израсходованном натитрование 1 мл раствора калия перманганата 0,05 Н, мг/мл;Vк – объем раствора кверцетина (рутина или цинарозида), израсходованный натитрование 1 мл раствора калия перманганата 0,05 Н, мл;Vо – объем исследуемого раствора, мл;Vх – объем раствора исследуемого объекта, израсходованный на титрование 1 млраствора калия перманганата 0,05 Н, мл;m – масса навески исследуемого объекта, г.2.6.3 Изучение отхаркивающего действияДля исследования отхаркивающей активности использовали модель изучения моторнойфункции мерцательного эпителия пищевода лягушки [20,32, 99, 141].Оценку отхаркивающего действия проводили при помощи следующего теста.
Лягушкуфиксировали в положении лежа на спине на корковой пластинке. На кончик языка пипеткойнаносили водные извлечения, полученные в соотношениимассы сырье и объема водыочищенной 1:10 и растворы ВРПС 1% из травы кульбабы осенней и кульбабышершавоволосистой в количестве 0,1 мл. Для регистрации движения ресничек использовалишелковую нить длинной 1,5 см, которую попрошествии 30 секунд после нанесенияисследуемых препаратов помещали у основания языка. При помощи секундомера замечали48время, в течение которого происходило заглатывание нити. Отмечали время, необходимое наперемещение нитки на 1 см без препарата (контроль) и после нанесения исследуемогофитопрепарата. Принимая во внимание значительное варьирование первоначальных скоростейдвижения мерцательного эпителия у различных животных, нами предложен расчеткоэффициента ускорения (КУ) движения ресничек мерцательного эпителия пищевода лягушки,какотношенияскорости,полученнойпосленанесенияисследуемыхпрепаратов,кпервоначальной.
Уменьшение данного показателя свидетельствует о повышении двигательнойактивности мерцательного эпителия [20]. В качестве препарата сравнения использовали«Мукалтин» (препарат из травы алтея лекарственного), вводимый в идентичных условиях.2.6.4 Изучение противовоспалительной активностиИзучение противовоспалительного действия настоев и ВРПС травы кульбабы осенней икульбабы шершавоволосистой проводили согласно рекомендуемым методам исследованияпротивовоспалительныхпрепаратов.Оценкапротивовоспалительнойактивностифитопрепаратов давалась с учетом их влияния на различные фазы воспалительного процесса[79, 84, 151, 157].Влияние на процессы экссудацииАнтиэкссудативную активность изучали при создании модели острого воспалительногоотека, вызванного субплантарным введением в заднюю лапу мыши (под подошвенныйапоневроз) 0,05 мл 2,5% водного раствора формалина [20, 29, 82 , 151, 157].Опыт проводили на двух группах мышей мужского пола массой 18,0-20,0 г.
Первойгруппе за 120 минут до введения формалина, а затем через 300 и 1080 минут после неговнутрижелудочно вводили настои и водные растворы ВРПС из травы кульбабы осенней икульбабы шершавоволосистой. Настои готовили в соотношении масса сырья : объем водыочищенной 1:10 и вводили в дозе 1 г/кг массы тела (в пересчете на абсолютно сухое сырье) вобъеме 0,2 мл на 20 г массы животного. ВРПС вводили в дозе 100 мг/кг массы тела видентичном настоям объеме.
Мышам второй группы в те же сроки вводили воду очищенную(контрольная группа). Для генерации воспалительного процесса в заднюю лапу мыши (подподошвенный апоневроз) вводили 0,05 мл раствора формалина 2,5%. Спустя сутки послевведения формалина мышей умертвляли и отрезали воспаленные и невоспаленные задние лапки49на уровне тазобедренного сустава. О выраженности воспалительного отека судили по разнице вмассе между воспаленными и невоспаленными лапками. Противовоспалительную активностьисследуемых фитокомплексов оценивали по степени выраженности отека лапы, созданнымвведением формалина у контрольных животных в контрольной и анализируемой группе.
Вкачестве препарата сравнения использовали ацетилсалициловую кислоту, которую вводилипри идентичных условиях в дозе 300 мг/кг массы животного.Влияние на пролиферациюАнтипролиферативнуюактивностьнастоев иводорастворимыхполисахаридныхкомплексов выделенных из травы кульбабы осенней и кульбабы шершавоволосистой изучалипри помощи модели "ватной гранулемы" на беспородных белых крысах массой 180-220 г [24].Для этого крыс вводили в состояние наркоза с помощью эфира медицинского, тщательновыстригали шерсть в области спины и в асептических условиях проводили разрез кожи иподкожной клетчатки длиной 1 см.
После чего в созданное отверстие вводили пинцет, припомощи которого в подкожной клетчатке формировали полость, в которую имплантировалипредварительно простерилизованный ватный шарик массой 25 мг. Раневую поверхностьзакрывали 2 швами.В течение недели прооперированным крысам через зонд вводили исследуемыефитокомплексы – настои в соотношении масса сырья : объем воды очищенной 1:10 в дозе 1 г/кгмассы тела (в пересчете на абсолютно сухое сырье) объемом 1 мл и водорастворимыеполисахаридные комплексы в дозе 100 мг/кг массы животного. По прошествии 7 днейимплантированные ватные шарики с образовавшейся вокруг него грануляционной тканьюизвлекали и высушивали до постоянной массы в сушильном шкафу при t 55-60°С. Массугрануляционно-фиброзной ткани вычисляли по разнице между массами высушенной гранулы иимплантированного ватного шарика. В качестве препарата сравнения применяли индометацин вдозе 6 мг/кг.
Контрольная группа получала воду очищенную. Воду очищенную и индометацинвводили в идентичных с фитокомплексами условиями.Влияние на проницаемость капилляровСосудоукрепляющее действие настоев в дозе 1 г/кг (в пересчете на абсолютно сухое сырье)и водорастворимых полисахаридных комплексов в дозе 100 мг/кг выделенных из травыкульбабы осенней и кульбабы шершавоволосистой изучали на модели местной воспалительнойреакции вызванной ксилолом у кроликов-альбиносов массой от 2,0 до 2,5 кг [20].У кроликов предварительно выстригали участок шерсти на коже живота длинной 13 ишириной 8 см. Исследуемые фитокомплексы вводили внутримышечно за час до введениятрипановой сини, позволяющей идентифицировать сосудистую проницамость. Трипановую50синь вводили в краевую вену уха в виде раствора 1%, приготовленного на изотоническомрастворе из расчета 2 мл на 1 кг массы животного.
Продолжительное время нахождениятрипановой сини в крови создает возможность изучить процессы сосудистой проницаемости попрошествие нескольких часов после ее введения.Оценку проницаемости капилляров вели по времени фиксации на коже живота кроликовсине-окрашенных пятен и определения их диаметра. По разнице во времени появления пятен иих диаметра до и после введения фитокомплексов судили о их сосудоукрепляющей активности.2.6.5 Определение антибактериальной активностиИзучение антимикробного действия фитокомплексов из травы кульбабы осенней икульбабы шершавоволосистой проводили на базе кафедры микробиологии, вирусологии ииммунологии КГМУ.На антибактериальную активность в отношении стандартного набора индикаторныхштаммов микроорганизмов были исследованы настои, полученные в соотношении масса сырья:объем воды очищенной - 1:10 из травы кульбабы осенней и кульбабы шершавоволосистой.Антибактериальное действие фитокомплексов из исследуемых растений устанавливаливнесением их на питательную среду с последующим посевом микробов на поверхность агара[82, 131, 140, 173].
Для этого из исследуемых фитокомплексов готовили различные разведения встерильном расплавленном и остуженном до 50°С питательном агаре. Содержимое послеперемешивания заливали в стерильные чашки Петри и оставляли при комнатной температуре.После застывания агара чашки делили на сектора. Каждый сектор засевали штриховым методомвзвесью суточных культур, содержащей 100 млн. микробных тел в 1 мл в количестве однойбактериологической петли.
Контролем являлись посевы тех же бактерий на питательные среды,не содержащие испытуемых фитокомплексов.Посевы инкубировали в термостате при температуре +37°С. Результаты экспериментаучитывали через 24 часа и 48 часов (для грибов рода Candida).
При этом регистрировалиинтенсивность роста колоний микроорганизмов (сильный рост, слабый рост) или егоотсутствие.512.7 Статистическая обработка полученных результатовСтатистическую обработку полученных данных по химическим и фармакологическимэкспериментам проводили по методике указанной вГФ XI издания и монографии«Математическая статистика в экспериментальной и клинической фармакологии» [51, 179].Обработку данных осуществляли с помощью программы Microsoft Excel 2010 и Statistica 6.0.Результаты представляли в виде среднего арифметического и ошибки среднего.
Принормальном распределении независимых переменных проверку гипотезы о равенствевыборочных средних выполняли с использованием t-критерия Стьюдента. Обработкурезультатов проводили также используя непараметрический порядковый критерий длямножественных выборок Крускала-Уоллиса и критерий Ньюмена-Кейлса. При уровнезначимости p<0,05 выявленные различия считались статистически значимыми.52ГЛАВА 3 РЕЗУЛЬТАТЫ ИЗУЧЕНИЯ КАЧЕСТВЕННОГО И КОЛИЧЕСТВЕННОГОСОДЕРЖАНИЯ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ КУЛЬБАБЫ ОСЕННЕЙ ИКУЛЬБАБЫ ШЕРШАВОВОЛОСИСТОЙСведения,представленныевобзорелитературы,демонстрируютразнообразиехимического состава изучаемых видов. Так, ранее из них были выделены: фенольныесоединения, тритерпены, гваянолидовые сесквитерпены, витамины, жирное масло.
Данныевиды изучались, в основном, зарубежными авторами. В это же время сырье, из флорыРоссийской Федерации, практически не изучено. В связи с этим, целесообразным являетсяизучение химического состава кульбабы осенней и кульбабы шершавоволосистой, которыешироко распространенны в областях Центральной России.На начальном этапе нами было проведено изучение химического состава кульбабыосенней и кульбабы шершавоволосистой, направленное на выявление различных классовприродных соединений, представленных в растительном сырье [глава 2, раздел 2.2].Результатом исследований явилось установление наличия углеводов, карбоновых, в том числеорганических,фенолкарбоновых,ижирныхкислот,каротиноидов,азотсодержащих,тритерпеновых и фенольных соединений (дубильных веществ, кумаринов, флавоноидов),минеральных элементов, сескитерпеновых лактонов.3.1 Результаты анализа углеводных производных3.1.1 Результаты анализа свободных сахаровСвободные сахара качественно определяли реакцией Бертрана (по образованию среактивом Фелинга кирпично-красного осадка меди оксида) и бумажной хроматографией[глава 2, раздел 2.2.2].
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
