Диссертация (1141412), страница 13
Текст из файла (страница 13)
Янтарная, лимонная, уксусная,пировиноградная кислоты и их соли применяются в качестве консервирующих агентов впериод проведения операций на сердце [149].58Исследованиеорганическихкислотпроводилиметодомгазо-жидкостнойхроматографии [глава 2, раздел 2.2.5]. Идентификацию органических кислот в водныхизвлечениях из травы кульбабы осенней и кульбабы шершавоволосистой проводили с помощьюсравнения с заведомыми образцами метиловых эфиров, а также используя библиотеку массспектров NISTO5 и WILLEY 2007 в сочетании с программами для идентификации химическихсоединений AMDIS и NIST (рисунки 5 - 6, таблица 3).Таблица 3 – Содержание органических кислот в траве кульбабы осенней и кульбабышершавоволосистой№Название органической кислоты1.2.3.4.5.6.7.8.9.Щавелевая кислотаМалоновая кислотаФумаровая кислотаЯнтарная кислотаЯблочная кислотаЛимонная кислота2-окси-3-метил-глютаровая кислотаЛевулиновая кислотаБензойная кислотаКонцентрация кислот в сырье мг/кгТрава кульбабыТрава кульбабыосеннейшершавоволосистой77,52749,99227,281992,9250,6959,37197,89562,191321,839566,531328,6117958,1074,111639,736423,703,3466,35Abundance1.15e+078.3714.63TIC: FATHA27.D24.14 27.95 31.2332.6233.7637.821.1e+071.05e+071e+0795000009000000850000023.958000000750000040.68700000013.196500000600000034.6915.115500000500000031.43450000038.7019.67400000035000003000000250000031.7310.75200000033.9113.98150000039.6939.2035.4525.88 29.6126.3036.2140.0842.5040.40100000014.7518.7815.69 19.0850000010.0015.0020.0025.0030.0035.0040.00Time-->Рисунок 5 – Схема хроматограммы хромато-масс-спектрального анализа органическихкислот кульбабы осеннейИз данных таблицы 3 видно, что в траве кульбабы осенней обнаружено 8, а в травекульбабы шершавоволоситой 9 органических кислот.Преобладающими кислотами травы кульбабы осенней являются – лимонная и яблочнаякислоты.
В траве кульбабы шершавоволосистой наибольшее содержание отмечено у лимонной,яблочной, левулиновой и малоновой кислоты.59Abundance9.104500000TIC: FT7.D24.04 28.1631.4233.9114.7313.22400000032.793500000300000010.77250000024.14200000038.46150000015.1928.9126.38100000026.095.8419.8522.2750000029.9742.6738.3232.0131.7135.2734.3241.2440.3939.8339.3915.9114.1018.9319.305.0010.0015.0020.0025.0030.0035.0040.00Time-->Рисунок 6 – Схема хроматограммы хромато-масс-спектрального анализа органическихкислот кульбабы шершавоволосистой.3.4.2 Результаты количественного определения свободных органических кислотОпределениесодержаниясвободныхорганическихкислотосуществлялифармакопейным методом, изложенным в ГФ XI [глава 2, раздел 2.2.5].В результате выявлено, что содержание в траве кульбабы осенней свободныхорганических кислот составляет 8,57±0,28%, а в траве кульбабы шершавоволосистой 6,95±0,27%.3.
5 Результаты анализа кумариновНаличие кумаринов подтверждали тонкослойной хроматографией хлороформнойфракцииспирто-водныхизвлеченийизтравыкульбабыосеннейикульбабышершавоволосистой [глава 2, раздел 2.2.7].В траве кульбабы осенней установлено наличие 3 веществ кумариновой природы,идентифицированных с достоверными образцами, как скополетин, умбеллиферон и кумарин, ав траве кульбабы шершавоволосистой обнаружены - 2 вещества, идентифицированных сдостоверными образцами как скополетин и кумарин (рисунок 7).60Рисунок 7 – Схема хроматограммыхлороформной фракции извлечений изтравы кульбабы осенней и кульбабышершавоволосистойА – спирто-водное извлечение из травыкульбабы осеннейБ – спирто-водное извлечение из травыкульбабы шершавоволосистойВ – умбеллиферонГ – скополетинД – кумаринСистемарастворителей:бензол–хлороформ (1:1)кумаринскополетинумбеллиферонАБВГД3.6 Результаты анализа фенолкарбоновых кислотФенолкарбоновые кислоты и их производные - мощные антиоксиданты, проявляющиевыраженныеантирадикальныесвойствавтестахinvitro.Хорошоизученыихиммуностимулирующая, противовирусная и противовоспалительная активности.
Установленовыраженное желчегонное действие феруловой, кофейной, хлорогеновой кислот и, особенно,1,4-дикофеилхинной кислоты. Кофейная, феруловая, хлорогеновая, кумаровая и другиепроизводные кофеилхинных кислот оказывают гипоазотемический эффект, усиливаютфильтрацию в почечных канальцах, стимулируют образование печеночных ферментов,обладают антимикробным и антибластомным действием [60, 182].Хроматографический анализИзучение фенолкарбоновых кислот проводили хроматографически [глава 2, раздел2.2.8].
В траве кульбабы осенней установили наличие двух пятен, имеющих голубуюфлюоресценцию и одного, имеющую темную флуоресценцию, отнесенных к производнымфенолкарбоновых кислот. С достоверными образцами идентифицированы хлорогеновая,кофейная и галловая кислоты (рисунок 8). В траве кульбабы шершавоволосистой установилиналичие пяти пятен, имеющих голубую и темную флюоресценцию, отнесенных нами кпроизводным фенолкарбоновых кислот. Три из них идентифицированы с достовернымиобразцами как хлорогеновая, кофейная и галловая кислоты, а два имеют Rf 0,60 и Rf 0,80 вхроматографической системе: кислота уксусная 5% (рисунок 8).61Rf 0,80Rf 0,60хлорогеновая к-тагалловая к-такофейная к-таАБВГ ДРисунок8–Схемахроматограммыэтилацетатной фракции извлечений из травыкульбабыосеннейикульбабышершавоволосистойА – спирто-водное извлечение из травыкульбабы осеннейБ – спирто-водное извлечение из травыкульбабы шершавоволосистойВ – хлорогеновая кислотаГ – кофейная кислотаД – галловая кислотаСистема растворителей: кислота уксусная 5%Изучение фенолкарбоновых кислот методом ГЖХИсследованиефенолкарбоновыхкислотпроводилиметодомгазо-жидкостнойхроматографии [глава 2, раздел 2.2.8].Из данных таблицы 4 видно, что в траве кульбабы осенней обнаружено 7, а в травекульбабы шершавоволоситой 8 фенолкарбоновых кислот.Таблица 4 – Содержание фенолкарбоновых кислот в траве кульбабы осенней и кульбабышершавоволосистой№1.2.3.4.5.6.7.8.Название фенолкарбоновойкислотыВанилиновая кислотаГентизиновая кислотап-кумаровая кислотап-оксибензойная кислотаСалициловая кислотаФенилуксусная кислотаФеруловая кислотаСиреневая кислотаКонцентрация кислот в сырье мг/кгТрава кульбабыТрава кульбабыосеннейшершавоволосистой45,0970,7815,0284,5738,02456,54165,90111,353,8411,556,8826,0125,74603,99103,32В траве кульбабы осенней наибольшее содержание отмечено для п-оксибензойной,ванилиновой и п-кумаровой кислоты.В траве кульбабы шершавоволосистой превалируютферуловая, п-кумаровая, п-оксибензойная и сиреневая кислоты.
Все фенолкарбоновые кислоты,представленные в таблице 4, установлены в исследуемых видах впервые.623.7 Результаты анализа флавоноидовФлавоноиды являются одним из классов растительных полифенолов, обладающихшироким спектром биологического действия и придающих окраску растениям [145].Биологическое действие флавоноидов объясняют регуляцией окислительно-восстановительныхпроцессов, стабилизацией клеточных мембран, модуляцией активности ферментов ирецепторов [224].На сегодня определен спектр действия этих соединений в организме человека:капилляроукрепляющее,противоязвенное,спазмолитическое,противовоспалительное,гипохолестеринемическое,антибактериальное,противовирусное,антигистаминное,анксиолитическое, антиаритмическое, антитоксическое, геропротекторное, антиагрегантное,антигипертензивное,антиканцерогенное,иммуномодулирующее,нефропротекторное,гепатопротекторное,эстрогеноподобное[223,232].антигрибковое,Установленныесвойства флавоноидов открывают широкие возможности их использования в качестве лекарственных средств, не оказывающих серьезных побочных эффектов в отличие от синтетическиханалогов [101, 116].Содержание флавоноидов в траве кульбабы осенней и кульбабы шершавоволосистойподтверждали проведением качественных реакций [глава 2, раздел 2.2.9].
В ходе проведенияцианидиновой пробы наблюдали образование красно-вишневого окрашивания, с растворомалюминия хлорида - желто-зеленого, а с раствором железа окисного - зеленого, с растворомнатрия гидроокиси 10% - желто-коричневого окрашивания и выпадение осадка. Перечисленныереакции свидетельствуют о наличии флавоноидов в изучаемых видах сырья; кирпично-красныйосадок с жидкостью Фелинга доказывает наличие флавоноидных гликозидов, а переход окраскив слой органического растворителя при проведении цианидиновой реакции по Бриантусвидетельствует о присутствии и агликонов флавоноидов.Хроматографический анализ исследуемых видов [глава 2, раздел 2.2.9] выявил в травекульбабы осенней наличие трех, а в траве кульбабы шершавоволосистой – двух веществ,отнесенных к флавоноидным соединениям (рисунок 9).
С достоверными образцами былиидентифицированы в траве кульбабы осенней цинарозид, лютеолин и апигенин, а в травекульбабы шершавоволосистой - цинарозид и лютеолин.63Рисунок 9 – Схема хроматограммыизвлечений из травы кульбабы осенней икульбабы шершавоволосистойцинарозидапигенинлютеолинАБВГА – спирто-водное извлечение из травыкульбабы осеннейБ – спирто-водное извлечение из травыкульбабы шершавоволосистойВ – лютеолинГ – цинарозидД – апигенинСистема растворителей: кислота уксусная30%Д3.8 Результаты исследования методом ВЭЖХ фенольных соединенийАнализ фенольных соединений травы кульбабы осенней и кульбабы шершавоволосистойпроводилинавысокоэффективномжидкостномхроматографеAgilent12003DLCSystemTechnologies (США), который укомплектован проточным вакуумным дегазаторомG1322A, четырех канальным насосом градиента низкого давления G13111A, автосамплером(автоматическиминжектором)G1329A,термостатическойколонкойG1316A,диодноматречным G1315С и рефрактометрическим G1362A детекторами, с последующейобработкой результатов исследования с помощью программы Мультихром для MSWindows[глава 2, раздел 2.2.10].Таким образом, в траве кульбабы осенней было обнаружено 14, а в траве кульбабышершавоволосистой15веществ,отнесенныхкфенольным.Фенольныесоединенияпредставлены в основном кумаринами, флавоноидами, фенолкарбоновыми кислотами ипроизводными дубильных веществ.Было установлено, что из веществ кумариновой и флавоноидной природы в травекульбабы осенней и кульбабы шершавоволосистой идентифицировано по 2 соединения,производные фенолкарбоновых кислот представлены 6 соединениями у кульбабы осенней и 7соединениями у кульбабы шершавоволосистой, а производные дубильных веществ – 4соединениями (таблица 5, рисунки 10 - 12).64Таблица 5 – Результаты исследования фенольных веществ травы кульбабы осенней икульбабы шершавоволосистой методом ВЭЖХНаименование РСОГалловая кислотаГаллокатехинЭпигаллокатехинЛютеолинКумаринЭпикатехинЭлаговая кислотаКофейная кислотаЭпикатехингаллатРозмариновая кислотаСкополетинХлорогеновая кислотаФеруловая кислотаАпигенинп-кумаровая кислотаВремя удерживания, минАБ7,2497,47414,68314,77315,61015,69917,63217,43319,35919,39822,33822,38624,21427,47127,47129,13329,12133,56733,56737,55337,55339,30139,81342,15742,35044,60644,61445,22845,768Количество, %АБ0,1280,0220,9800,5821,4690,5690,2070,2260,1430,1640,6690,3430,0730,0100,0100,1380,0590,0130,0130,0310,0312,4412,5830,0030,0610,0170,0640,0040,042Примечание: А - сырье кульбабы осенней, Б - сырье кульбабы шершавоволосистойИз данных таблицы 5 видно, что преобладающим веществом среди кумаринов являетсякумарин, среди флавоноидов – лютеолин, среди дубильных веществ – эпигаллокатехин, а средифенолкарбоновых кислот – хлорогеновая кислота.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
