Диссертация (1141412), страница 6
Текст из файла (страница 6)
Определение противоопухолевой активности проводили в сравнении с хеленалином –сескитерпеновым лактоном арники с установленным противоопухолевым эффектом.Сесквитерпеновые лактоны 14-гидрогипокретенолид и 14- гидроксигипокретенолид - β D - глюкопиранозид - 4', 14'' - гидроксигипокретеноат, выделенные из вегетативных игенеративных органов, оказывают цитотоксическое действие в отношении эпидермальнойкарциномы, рака молочной железы, рака яичников, меланомы и липосаркомы. Наиболееактивным цитотоксическим соединением в отношении эпидермальной карциномы, ракамолочной железы, рака яичников и меланомы является 14-гидроксигипокретенолид - β - D глюкопиранозид - 4', 14'' - гидроксигипокретеноат, в то время как препарат сравнения хеленалин в меньшей концентрации, чем другие сесквитерпены, ингибировал развитиелипосаркомы.
Наименьшее противоопухолевое действие в отношении всех раковых линийоказывал 14-гидрогипокретенолид [205].ВЫВОДЫ1. Согласно литературным данным кульбаба шершавоволосистая и кульбаба осенняяшироко распространены в Европейской части России, в Причерноморье и на Кавказе.КоэффициентвстречаемостикульбабышершавоволосистойвобластяхЦентрального24Черноземья составляет 21-40%, кульбабы осенней 81-100%, что свидетельствует о достаточнойсырьевой базе данных видов сырья.2. В химическом отношении рассматриваемые виды изучены не достаточно. Влитературепредставленысесквитерпеновыхлактонов,сведенияофлавоноидов,качественномифенолкарбоновыхколичественномкислотсоставесодержащихсявразличных органах кульбабы шершавоволосистой и кульбабы осенней.
Однако до настоящеговремени не выявлены основные классы биологически активных веществ, отсутствуют методикистандартизации сырья.3. Кульбаба шершавоволосистая и кульбаба осенняя не находят применения в научноймедицине. В тоже время анализ данных о применении растений в народной медицинепоказывает,чтопротивокашлевогоисследованияониииспользуютсяседативногоуказываютнавкачествесредства.желчегонного,Проведенныепротивовоспалительныеиранееобезболивающего,фармакологическиецитотоксическиесвойствасесквитерпеновых лактонов, выделенных из кульбабы шершавоволоситой, что указывает нанеобходимость проведения фармакологических исследований.4.
Из данных литературы также видно, что не изучены морфологические имикродиагностические признаки, что обуславливает проведениеморфолого-анатомическихисследований.Все вышесказанное свидетельствует об актуальности фармакогностического изучениякульбабы шершавоволоситой и кульбабы осенней.25ГЛАВА 2 ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ2.1 Объекты исследованияОбъектами исследований нами были выбраны трава кульбабы осенней и кульбабышершавоволосистой. Заготовку сырья проводили в течение 2012 – 2015 годов на территорииКурской, Белгородской и Воронежской областей в период массового цветения растений.Упаковку и хранение сырья проводили согласно требованиям, изложенным вГосударственной фармакопеи XI издания [51, 52].В качестве предметов фармакологического изучения выступали настои травы кульбабыосенней и кульбабы шершавоволосистой, приготовленные в соотношении 1:10, в соответствиис требованиями ГФ XI [52], а также водорастворимые полисахаридные комплексы выделенныеиз травы кульбабы осенней и кульбабы шершавоволосистой.2.2 Методы исследования биологически активных веществВходефитохимическогоисследованиякульбабыосеннейикульбабышершавоволосистой было проведено изучение биологически активных веществ различнойприроды.
Среди них: минеральные элементы, азотсодержащие, тритерпеновые и фенольныесоединения, органические кислоты, углеводные производные, каротиноиды, сесквитерпеновыелактоны.Их изучение проводили в водных, водно-спиртовых и гексановых извлечениях.2.2.1 Приготовление водных извлечений для качественного анализаПо 5,0 г измельченного сырья кульбабы осенней и кульбабы шершавоволосистойпомещали в колбу со шлифом, прибавляли десятикратный объем воды очищенной,присоединяли обратный холодильник, экстракцию проводили на кипящей водяной бане напротяжении 60 минут.
Полученные извлечения отфильтровывали, оставшееся сырье повторно26заливали десятикратным объемом воды очищенной и проводили экстракцию еще дважды притех же условиях. Полученные извлечения объединяли и концентрировали до конечного объема25 мл при помощи вакуумного компрессора. В концентрированных извлечениях определялиуглеводы, танины, азотсодержащие и тритерпеновые соединения, органические кислоты.2.2.2 Анализ углеводовСвободные сахараСодержание свободных сахаров устанавливали с помощью реакции Бертрана повыпадению кирпично-красных осадков оксида меди (I) после нагревания равных объемовводных извлечений кульбабы осенней и кульбабы шершавоволосистой с реактивом Фелинга[92] и методом бумажной хроматографии в следующих хроматографических системах: нбутанол – пиридин – вода очищенная (6:4:3) и н-бутанол – кислота уксусная – вода очищенная(2:7:1) [28]. На хроматограммы параллельно наносили установленные образцы моносахаридов.Хроматограммы просушивали на воздухе в течение одного часа.
В качестве проявителяприменялирастворанилингидрофталата.Обработанныехроматограммыпомещаливсушильный шкаф, разогретый до 100°С, на 15-20 минут [28].Связанные сахараПрисутствие связанных сахаров устанавливали качественными реакциями с жидкостьюФелинга и раствором α-нафтола 20% [92].Дляопределенияполисахаридовкконцентрированномуводномуизвлечениюприбавляли трехкратный объем спирта этилового 96%, при этом при наличии полисахаридоввыпадает рыхлый осадок. Полученные осадки отделяли, промывали спиртом этиловым 96%,ацетоном и высушивали. Водные растворы осадков использовали для проведения реакции сжидкостью Фелинга и раствором меди сульфата [92].2.2.3 Анализ азотсодержащих соединенийКачественное обнаружение азотистых основанийОпределениеазотистыхоснованийвтравекульбабыосеннейикульбабышершавоволосистой проводили в водных извлечениях с помощью качественных реакций со27следующими реактивами:с кислотой фосфорновольфрамовой 3%;с реактивом Манделина (раствор аммония ванадата в кислоте сернойконцентрированной);с раствором кислоты хлористоводородной и бриллиантовым зеленым [136].Присутствие азотистых оснований устанавливали при помощи качественных реакций иметодом бумажной хроматографии водных извлечений в хроматографической системе нбутанол – кислота уксусная – вода очищенная (4:1:2) [92].Количественное определение азотистых основанийИзучениеколичественногосодержанияазотистыхоснованийпроводилисиспользованием модифицированной методики Г.А.
Луковниковой и А.И. Есютиной. Методикаоснована на образовании окрашенных растворов азотистых соединений с солью Рейнеке ипоследующим фотоэлектроколориметрическом определении их оптической плотности [34,113].По 3,0 г измельченного сырья кульбабы осенней и кульбабы шершавоволосистойвносили в круглодонные колбы объемом 200 мл со шлифом, прибавляли десятикратный объемводы очищенной.Колбы взвешивали, присоединяликобратным холодильникам иэкстрагировали в течение 2 часов на кипящей водяной бане.
По прошествии 2 часов колбыснимали с бани, вытирали досуха и взвешивали. Массы колб доводили с помощью пипеткиводой очищенной до первоначальных. Извлечения отфильтровали горячими через бумажныефильтры. В полученных таким образом извлечениях определяли количественное содержаниехолина и суммы азотистых оснований.С целью количественного определения холина по 10 мл отфильтрованных извлеченийвносили в колбы объемом 50 мл, в которые по каплям добавлялираствор кислотыхлористоводородной 15% до значения водородного показателя равного 3 (рН), кислотностьсредыоценивалиприпомощиуниверсальногоиндикатора.Растворыохлаждаливхолодильнике до 0°С, после чего в них добавляли по 15 мл раствора соли Рейнеке и помещаликолбы в холодильник на 18 часов.
Выпавшие за время охлаждения осадки отфильтровываличерез стеклянные фильтры №4, промывали н-бутанолом малыми порциями по 3-5 мл несколькораз. После промывания осадки, находящиеся на фильтре растворяли в ацетоне, полученныерастворы доводили последним до объема 10 мл. В ацетоновых растворах сразу же определялиоптическую плотность с помощью фотоэлектроколориметра КФК-2 при аналитической длиневолны 400±10 нм, в кювете с толщиной слоя жидкости, равной 1 см. Раствором сравненияслужил ацетон.С целью установления количественного содержания суммы азотистых оснований по 1028мл отфильтрованных извлечений вносили в колбы объемом 50 мл, добавляли по 15 мл 0,1 нраствора калия перманганата и нагревали на кипящей водяной бане в течение 10 минут, чтобысодержащиеся в извлечениях азотистые основания окислились до холина.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
