Диссертация (1141387), страница 19
Текст из файла (страница 19)
Высвобождение ССС из ВСПЭС.6070135В результате установлено, что ССС полностью высвобождается черезминуту вместе с полным растворением плёнки, что подтверждает адекватностьтехнологии.5.2.Определение показателей качества вагинальной пленкиСогласно данным обзора литературы для стандартизации пленок могут бытьиспользованы следующие показатели качества: внешний вид, масса пленки, pH,содержание влаги и время дезинтеграции время растворения и др.5.2.1. Внешний вид: Визуальное наблюдение поверхности пленки: Гладкая,прозрачная, однородная, без воздушных включений, светло-желтого цвета;Размер пленки: квадрат 5 см х 5 см;Толщина: Измерение проводили при помощи микрометра.
Методика:Среднее значение 6 измерений в разных местах пленки (в центре и четырех углах)[27, 28]. Результаты представлены в Таблице 5.5.Таблица 5.5. – Толщина пленки 25 см2 и отклонение от средного значения(n=6, Р=95%) (t0,95, 5 = 2,571).показательТолщина пленки, мкм̅206,03SSr %4,852,36%̅ ± ∆∆5,10206,03± 5,105.2.2. Масса пленки (Однородность массы): Определение проводят всоответствии с требованиями ГФ XIII ОФС «Однородность массы дозированныхлекарственных форм». Нами было проведены трехкратные измерения для 6полученных образцов одной серии.
Результаты представлены в Таблице 5.6.Таблица 5.6. – Средняя масса пленки 25 см2 и отклонение от средней массы,(n=6, Р=95%) (t0,95, 5 = 2,571)показательВес пленки (5×5 см), г5.2.3.Определение̅0,22pH:SSr %0,0177,770ОпределениеpH∆0,02проводится̅ ± ∆0,22 ± 0,02настадиигелеобразования и определение рН водной дисперсии пленки [27]. С целью136определения изменения рН вагинальных жидкостей после дисперсии/растворенияпленки,намибылприготовленраствор,имитирующийискусственнуювагинальную жидкость – 0,001 М раствор уксусной кислоты рН=3,5 в количестве20 мл.
Результаты представлены в таблице (5.7.).Таблица 5.7. – Значение рН раствора гелеобразования и дисперсии пленки в ВЖИ(n=6, Р=95%) (t0,95, 5 = 2,571).показательSSr %Значение рН растворагелеобразования̅7,840,055Значение рН дисперсии пленкив среде раствоения4,3760,195̅ ± ∆0,699∆0,0587,84±0,064,4620,2064,376±0,205.2.4. Содержание влаги: Разница в весе связана с потерей воды.Содержание влаги рассчитывается, как разница в весе до и после полноговысушивания пленки [24, 25, 27], или с использованием аппарата определениявлажности (Аквилон АВ-50).
Результаты определения влажности представлены втаб. (5.8.).Таблица 5.8. – Изменение содержания воды % в процессе получения пленок до ипосле сушки(n=6, Р=95%) (t0,95, 5 = 2,571).показательSSr %Содержание воды до сушки%̅84,571,14Содержание воды после сушки %14,501,29̅ ± ∆1,35%∆1,2084,57±1,208,91%1,3614,50±1,365.2.5. Время дезинтеграции пленки и время растворения: С цельюопределения время дезинтеграции (потеря формы), образцы пленки поместили в20 мл 0,001 М раствора уксусной кислоты рН 3,5 на шейкер и определяли времядезинтеграции [28].
Время растворения определяется после полного растворенияпленки. Результаты анализа представлены в таблице (5.9.).137Таблица 5.9. – Время дезинтеграции и растворения вагинальных пленок(n=6, р=95%) (t0,95, 5 = 2,571).Время дезинтеграции пленки (сек)̅20,53,834Время растворения пленки (сек)64,675,391показатель5.3.Методикикачественногои̅ ± ∆∆18,702 4,03920,5±4,048,3375,68064,67±5,68SSr %количественногоопределениясапонинов стиракса в пленке:5.3.1. Определение подлинности ВСПЭСДля подтверждения присутствия ССС возможно использование ранееприменявшихся методик для околоплодников стиракса лекарственного и СЭСЛ спомощью ТСХ и УФ-спектрофотометрии.Вне зависимости от состава ВВ пленок, извлечения суммы БАВ изпрепаратов с метанолом имеют идентичные результаты.Подготовка образца пленки, для качественного определения используютодну пленку (масса одной пленки размером 5×5 см примерно равна 0,22 ± 0,02 г),содержит 25 мг (точная навеска) СЭСЛ (с количественным содержанием 7,075 мгсапонинов стиракса А, В и С ), испытуемый образец выдерживают в раствореметанола (15 мл) в течении 1 часа, после чего разрезают ножницами на мелкиекусочки.
Затем интенсивно встряхивают на вортексе в течение 5 минут.В результате исследования установлено, что пленка не растворима вметаноле, в ходе испытаний образец приобрел твердость, также зафиксированоизменение окраски – пленка приобрела белое окрашивание. Промывку пленкиметанолом повторяют 3 раза. Затем нами был отобран раствор метанола в колбе ииспаряют метанол на роторном испарителе.ТСХ – на хроматограмме в системе хлороформ-метанол-вода (6:3:1)испытуемого раствора (извлечение из ЛФ) наблюдаются зоны адсорбции науровне зон адсорбции образцов сапонинов из СЭСЛ с Rf около 0,68 (Рис.
5.3.).138Рисунок 5.3. Хроматограмма растворов сапонинов из; а – СЭСЛ, б – раствораизвлечения из ВСПЭС с метанолом в системе хлороформ-метанол-вода (6:3:1),(УФ-свет, 245 нм/ детектор- раствор взвеси дефибринированной крови).УФ-спектрофотомерия – В качестве критериев подлинности выбраныхарактерные максимумы поглощения при длинах волн 270 ± 1 нм и 315 ± 1 нм,представленные на рисунке 5.4.Рисунок 5.4. УФ-кривые спектрального сканирования растворов сапониновстиракса лекарственного (1- из СЭСЛ; 2- из ВСПЭС; 3-из основы пленок; 4метанола).УФ-спектр поглощения раствора СЭСЛ и раствора ВСПЭС имеютмаксимумы поглощения при длине волн 270 ± 1 нм и 315 ± 1 нм. Измеренияпроводились в области от 200 до 400 нм.1395.3.2. Методика количественного определения ССС в ВСПЭСДля количественного определения ССС в пленке была разработана ивалидирована методика ЯМР1Н.
Пробоподготовка образца пленки дляколичественного определения проведена в соответствии с п. 5.3.1.Методика – После полного испарения метанола на роторном испарителе, ксодержимому колбы добавляют 1 мл DMSO-d6, встряхивают в течение 1 минуты,центрифугируют в течение 5 минут при 14000 об/мин. Раствор переносят встандартную ампулу для ЯМР d=5 мм. Регистрируют спектр ЯМР 1Н приследующих условиях: 90º импульс, смещение 5 м.д., развертка 15 м.д., 32 К точекна спектр, 32 повторения, задержка между импульсами 40 с.В результате анализа установлено, что пленка содержит 5,6 мг суммы А и Ссапонина (сигналы в области 5.70-5.8 м.д и 5.41 м.д.) и 1,2 мг В сапонина (сигналпри 5.94 м.д.), что эквивалентно 96,0% от содержания сапонинов в пленке. СпектрЯМР 1Н сапонинов стиракса из пленки представлен на рисунке 5.5.Рисунок 5.5.
Спектр ЯМР 1Н сапонинов стиракса из пленки140 Валидация методики количественного определения сапониновстиракса в пленке – ЯМР 1НДля подтверждения пригодности данной методики для количественногоопределения сапонинов стиракса в пленке, была проведена ее валидация. Проводявалидацию разработанной методики, мы экспериментально доказываем, чтометодика количественного определения сапонинов стиракса в пленке с помощьюЯМР1Н пригодна и соответствует заложенным критериям приемлемости:сходимость, точность, воспроизводимость. Приготовление испытуемых образцови определение количественного содержания ИДН в них проводили по описаннойвыше методике количественного определения. Специфичность (Specificity)Способность методики однозначно определять действующие вещества(сапонины стиракса) в присутствии других компонентов, которые могутприсутствовать в образце (пленка).Критерии приемлемости и их оценки:1- Примесные соединения:а-Должныотсутствоватьпики,которыемешаютопределениюанализируемых веществ.
Оценка критерия: На хроматограмме – ЯМР 1Н суммысапонинов стиракса нет никаких сигналов, мешающих определению сигналовсапонинов стиракса А, В, С.б- На хроматограмме образца сапонинов не должно быть пиков, которыепринадлежат растворителю и имеют такое же время удерживания. Оценкакритерия: Критерий был достигнут при использовании метанола для экстракциисапонинов из пленки, где матрица пленки не растворима в метаноле и затемиспользовании DMSO-d6 в качестве растворителя для подготовки образца дляЯМР 1Н.2- Содержание основных веществ:Интенсивность сигналов спектра ЯМР 1Н испытуемого образца, должнасоответствовать интенсивности сигналов стандартного спектра ЯМР 1Н.141Оценка критерия: На хроматограмме образца сапонинов, сигналы в области5,41-5,74 м.д. и при 5,73 м.д. соответствуют сапонинам стиракса 1(А) и 3 (С).Сигналы при 5,94 м.д.
соответствуют сапонинам стиракса 2 (В).Условия регистрации спектра ЯМР 1Н стандартного образца (Y. Yayla et al. /Fitoterapia 73 (2002) 320-326) были такими же, как и для испытуемых образцов (1НЯМР, 500 MHz и 125 MHz, DMSO-d6). Сходимость/повторяемостьКритерий сходимости характеризует прецизионность методики при еевыполнении в одних и тех же условиях и одним и тем же аналитиком в течениенебольшого промежутка времени. В течение одного дня, один лаборантисследователь проводил 5 измерений количественного содержания сапонинов впленке для одного и того же образца с помощью ЯМР-1Н.Критерии приемлемости и их оценкиОтносительное стандартное отклонение (Sr%) при оценке сходимостиполученных результатов определения содержания сапонинов стиракса в пленкедолжно быть ≤ 5 % (α=0,05).Результаты определения количественного содержания сапонинов стиракса впленке 5×5 см2, массой 0,22 ± 0,02 г.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
