Диссертация (1141376), страница 13
Текст из файла (страница 13)
Оптимальнаяпродолжительность термической обработки при температуре 56±1 °С дляобразцов ЛП иммуноглобулина человека в ампулах по 1,0 и 1,5 мл составляет5 мин; в ампулах по 3,0 и 3,4 мл – 7 мин; во флаконах по 25,0 мл – 15 мин.87Таблица 13 – Антикомплементарнаяактивностьлекарственныхпрепаратовиммуноглобулинов человека до и после термической обработкиОбразец, подвергшийсятермической обработкеИммуноглобулин человека,ампулы по 1,0 и 1,5 млИммуноглобулин человека,ампулы по 3,0 и 3,4 млИммуноглобулин человекафлаконы по 25,0 млАнтикомплементарная активность, процент, ± Sx, n=7До термическойПосле термической обработкиобработки(продолжительность обработки)56,3±2,4 (3 мин)40,5±2,175,8±2,0 (5 мин)Определить невозможно* (7 мин)57,6±2,8 (5 мин)41,2±1,783,2±2,5 (7 мин)Определить невозможно* (10 мин)56,2±3,9 (10 мин)21,3±4,975,1±1,8 (15 мин)Определить невозможно* (20 мин)Примечание – * – максимальная степень гемолиза не превысила 50 %Такимобразом,проведенныеисследованияпозволилиобосноватьдвухкомпонентный состав СО и выбрать кандидаты в отрицательный иположительный контроли: отрицательный контроль – образец иммуноглобулиначеловекадляконтроль–внутривенного/внутримышечногообразециммуноглобулинавведения,человекадляположительныйвнутривенного/внутримышечного введения, подвергшийся термической обработке на водянойбане (температура воды 56±1 °С) в течение определенного времени [32, 33, 36].Полученные результаты позволили оформить заявку на патент РоссийскойФедерации на изобретение № 2015104120 от 09.02.2015 «Способ полученияположительного контроля стандартного образца иммуноглобулина человека дляопределения антикомплементарной активности препаратов иммуноглобулиновчеловека, и стандартный образец иммуноглобулина человека для определенияантикомплементарной активности препаратов иммуноглобулинов человека» иполучить патент № 2577703, приоритет от 09.02.2015 (Приложение Б).883.5.
Получение стандартного образца для определения антикомплементарнойактивностиС целью получения серии СО для определения АКА было закуплено 1000ампул серии П267 ЛП «Иммуноглобулин человека нормальный», раствор длявнутримышечного введения, ампулы по 1,5 мл, производства ФГУП «НПО«Микроген» Минздрава России, филиал в г. Пермь.Для получения положительного контроля 500 ампул (по 1,5 мл) термическиобработали на водяной бане при температуре воды 56±1 °С в течение 5 мин споследующим охлаждением при комнатной температуре в течение 15 мин.
Неподвергшиеся термической обработке 500 ампул (по 1,5 мл) сформировалиотрицательный контроль СО для определения АКА.ВЫВОДЫ ПО ГЛАВЕ 31. Проведенные исследования позволили обосновать оптимальные условияопределения АКА лекарственных препаратов ИГВВ, предусматривающиеиспользование эритроцитов из крови бараньей дефибринированной с цитратомнатрия,гемолитическойсывороткивсоответствующемразведении,пулированного комплемента морских свинок (in house) и желатин-солевогораствора,какальтернативуОптимизированнаяметодикажелатин-барбиталовомупослужилаосновойбуферномудляраствору.разработкиОФС«Определение антикомплементарной активности лекарственных препаратовиммуноглобулинов человека для внутривенного введения» для ГФ РФ XIII изд.2.
Определены требования к кандидату в СО для определения АКА, аименно: значения АКА отрицательного контроля должны составлять менее 50 %;положительного контроля более 50 %; содержание белка в отрицательном иположительном контролях должно быть одинаковым и составлять не менее8912,5 мг/мл; положительный и отрицательный контроли должны представлятьсобой раствор иммуноглобулина человека в идентичной форме выпуска (раствориммуноглобулина человека в ампулах от 1 до 5 мл).3. Проведенные исследования по изучения возможности использования ЛПИГВВ/ИГВМ и ЛП иммуноглобулина человека, подвергшихся нагреванию,позволили выбрать кандидата в СО для определения АКА и определитьоптимальныеусловияполучениявозможность разработкиположительногодвухкомпонентногоконтроля.СО дляОбоснованаопределенияАКА,представляющего собой: отрицательный контроль – образец иммуноглобулиначеловекадляконтроль–внутривенного/внутримышечногообразециммуноглобулинавведения,человекадляположительныйвнутривенного/внутримышечного введения, подвергшийся термической обработке на водянойбане (температура воды 56±1 °С) в течение определенного времени.4.
Получена серия СО для определения АКА, представляющая собойположительный контроль: ампулы лекарственного препарата «Иммуноглобулинчеловека нормальный», раствор для внутримышечного введения (ампула по1,5 мл), термически обработанные на водяной бане при температуре 56±1 °С втечение 5 мин с последующим охлаждением при комнатной температуре втечение 15 мин и отрицательный контроль: ампулы лекарственного препарата«Иммуноглобулин человека нормальный», раствор для внутримышечноговведения (ампула по 1,5 мл), не подвергшиеся термической обработке.90ГЛАВА 4. АТТЕСТАЦИЯ СТАНДАРТНОГО ОБРАЗЦА ДЛЯОПРЕДЕЛЕНИЯ АНТИКОМПЛЕМЕНТАРНОЙ АКТИВНОСТИ4.1.
Установление значений аттестуемой характеристики стандартногообразца и ее неопределенности (погрешности)Аттестация СО – исследование, имеющее целью определение значенийметрологических характеристик в соответствии с программой или методикойаттестации, с последующим включением полученных результатов в Паспорт на СО.ОсновнымипараметрамиСОявляютсяаттестуемаяхарактеристика,однородность, стабильность и срок годности.В настоящее время наличие СО является одним из необходимых условийэффективнойдеятельностиметрологическихслужб,включаяоценкукомпетентности лабораторий, межлабораторных сравнительных испытаний и др.[15].
СО широко используют в метрологической практике как носителиаттестованных значений состава и свойств исследуемых веществ [5, 16, 57, 65].Для аттестации СО для определения АКА необходимо было провестиисследования по следующим направлениям:– провести исследования с целью установления аттестуемой характеристикив соответствии с методикой и программой аттестации СО [55];– изучить стабильность и определить срок годности СО;– разработать нормативно-техническую документацию, а именно паспорт,инструкцию по применению и макеты первичной упаковки СО.В соответствии с ГОСТ 8.315-97 [6, 13] установление значений аттестуемойхарактеристики СО для определения АКА проводили в одной лаборатории сиспользованием СО иммуноглобулина человека BRP серия 1 и методикиизмерений, метрологические характеристики которой были определены в рамкахвнутрилабораторнойвалидации.программой и методикой аттестации.Аттестацию проводилив соответствии с91СО иммуноглобулина человека BRP серия 1 имеет аттестованные значенияАКА отрицательного контроля в диапазоне от 10 до 40 %, положительногоконтроля в диапазоне от 60 до 100 %.Положительный и отрицательный контроли подтверждают достоверностьполученных результатов в различных диапазонах значений АКА.Аттестуемой характеристикой СО для определения АКА являются значенияАКА (в процентах), которые должны составлять для отрицательного контроляменее 50 %; для положительного контроля более 50 %.
Антикомплементарнуюактивность определяют в реакции связывания комплемента.При аттестации СО для определения АКА оценивали кандидата в СО порезультатам,полученнымводнойлаборатории,сиспользованиемСОиммуноглобулина человека BRP серия 1. Исследования провели три аналитика,получили 27 независимых результатов в условиях промежуточной прецизионности(Таблица 14).Средние значения АКА для отрицательного контроля СО составили 41,5 %; дляположительногоконтроля–78,2 %. Стандартное отклонение(Sx)значенийотрицательного контроля составило 1,8 %, положительного контроля – 2,3 %.Оценка неопределенностиОтносительное стандартное отклонение результатов испытаний АКА,характеризующее стандартную неопределенность от способа установленияаттестованного значения составило 4,34 % для отрицательного контроля и 2,94 %для положительного контроля.Расширенную неопределенность аттестованного значения (∆Х) АКАотрицательного и положительного контролей со степенью достоверности 95 %вычисляли по формуле (19):∆ =±2Sx,Расширеннаянеопределенностьаттестованного(19)значенияАКАотрицательного контроля составила 3,6 %, положительного контроля – 4,6 %(степень достоверности 95 %).Аналитик 3Аналитик 2Аналитик 1АналитикТаблица 14 – Результаты определения антикомплементарной активности стандартного образцаДата проведенияисследованияАнтикомплементарная активность стандартного образцаиммуноглобулина человека BRP, процентОтрицательный контрольПоложительный контроль17.06.201423,184,118.06.201413,880,419.06.201420,184,017.06.201415,586,218.06.201420,786,719.06.201416,584,617.06.201418,977,518.06.201423,388,419.06.201414,477,4Антикомплементарная активность стандартного образца, процентОтрицательный контрольХ39,442,944,542,942,944,541,041,843,240,638,742,438,638,640,742,941,544,341,442,538,742,340,740,942,839,741,3х ± Sx42,3±2,643,4±0,942,6±1,642,0±1,140,6±1,939,3±1,240,9±2,142,9±1,440,9±2,041,3±0,941,3±1,641,1±1,3Положительный контрольх76,574,177,873,474,079,477,474,477,279,481,480,481,080,478,878,980,579,680,178,480,579,976,779,578,775,976,9х ± Sx76,1±1,975,6±3,376,0±2,176,3±1,780,4±1,080,1±1,180,0±0,979,7±0,879,7±1,178,7±1,777,2±1,478,5±1,7Такимобразом,порезультатампроведенныхисследованийполучилиаттестованные значения АКА СО для отрицательного контроля, находящиеся внутриинтервала от 37,9 до 45,1 %; для положительного контроля, находящиеся внутриинтервала от 73,6 до 82,8 % со степенью достоверности – 95 %.Дополнительно проведены исследования по определению содержаниябелка, получены значения равные 102±1,8 мг/мл (степень достоверности 95 %).4.2.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
