Диссертация (1141376), страница 14
Текст из файла (страница 14)
Изучение стабильности стандартного образца и установление срокагодностиВцеляхобеспеченияоднородностиСОпроизвелизакупкусертифицированной серии ЛП «Иммуноглобулин человека нормальный», раствордля внутримышечного введения, т. е., произведенного в результате одноготехнологическогоциклаегопроизводителем,поэтомудополнительныхисследований однородности не проводили.Стабильность СО является одной из их важнейших характеристик. Всоответствии с рекомендациями ВОЗ для оценки стабильности используютускоренныйсравнительнотестнатермостабильность,короткогоиспытанияприпозволяющийпоповышенныхрезультатамтемпературахпрогнозировать активность и срок годности образца при температуре егохранения.При исследовании стабильности методом ускоренного старения определяютзависимость изменения активности СО от времени при трех различныхповышенных температурах [57].
При этом первую из повышенных температурвыбирают экспериментально таким образом, чтобы в течение периода измерениянаблюдалось статистически значимое падение активности. Однако, способполучения СО для определения АКА предполагает термическую обработкуобразцов иммуноглобулина человека (при 56 °С в течение 5 мин), т.е. при94повышении температуры наблюдается повышение значений АКА, следовательно,метод ускоренного старения при изучении стабильности исследуемого СО неприменим.Выбран метод исследования стабильности – естественное старение.С целью изучения стабильности и установления срока годности СО дляопределения АКА было сформировано 450 комплектов одной серии СО,представленные 450 ампулами (по 1,5 мл) отрицательного контроля и450 ампулами (по 1,5 мл) положительного контроля.Для изучения стабильности образцы полученного СО для определения АКАхранили при температуре 5±3 °С и определяли контролируемые параметры(антикомплементарная активность, содержание белка, описание) в моментзакладки на хранение, далее ежемесячно в течение первых 3 мес., далее синтервалом в 3 мес.
до 21 мес.Представленные в Таблице 15 данные позволяют сделать вывод о том, чтоСО для определения АКА стабилен в течение 18 мес. при хранении притемпературе5±3 °С.Дляустановленияокончательногосрокагодностинаблюдения продолжаются.Для подтверждения возможности использования вскрытых ампул СО дляопределения АКА в течение не более 14 суток были проведены исследования поизучению стабильности аттестуемой характеристики, содержанию белка иописанию, которые позволили сделать вывод о том, что СО стабилен послевскрытия ампул в течение указанного периода при температуре 5±3 °С(Таблица 16).В качестве дополнительного подтверждения стабильности свойств СО впроцессе хранения проведено изучение молекулярно-массового распределениямолекулиммуноглобулинаметодомВЭЖХ.Порезультатамизучениямолекулярно-массового распределения молекул иммуноглобулина содержаниеполимеров и агрегатов в отрицательном контроле варьировало от 0,04 до 0,64 %, вположительном контроле – от 0,36 до 1,21 %, что не оказывало влияния на АКА(Таблица 17).Таблица 15 – Изучение стабильности стандартного образца для определения антикомплементарной активностиНаименованиеСрок хранения, мес.аттестуемойхарактеристики,0123691215182179,0±0,376,0±2,080,0±1,078,2±1,878,9±3,478,6±1,180,0±1,479,4±2,176,9±2,271,9±3,041,0±1,043,0±2,041,0±2,040,2±1,639,3±2,741,6±2,739,1±2,743,1±1,639,2±3,439,6±2,0101,0±1,0101,0±0,7102,0±1,3103,0±0,5103,0±0,6102,0±0,8100,0±0,9102,0±0,8101,0±0,4102,0±2,0единица измеренияАКА положительногоконтроля СО, процент,±SxАКА отрицательногоконтроль СО, процент,±SxСодержание белка*,мг/мл, ±SxОписаниеПрозрачная бесцветная жидкостьПримечание – * – среднее значение (х ± Sx) содержания белка в положительном и отрицательном контролях.96Таблица 16 – Изучение стабильности стандартного образца для определения антикомплементарной активности втечение 14 суток после вскрытия ампулСредние значения аттестуемой характеристики на … суткиНаименование аттестуемой характеристики,единица измерениянаблюдениях ± Sx1236789101314АКА положительного контроля СО, процент79,876,980,578,278,984,477,481,479,680,979,8±2,2АКА отрицательного контроля СО, процент41,242,141,138,839,340,738,639,540,240,740,2±1,1102,0н/ин/ин/и102,0н/ин/ин/ин/и103,0102,0±0,6102,0н/ин/ин/и103,0н/ин/ин/ин/и101,0102,0±1,0Содержание белка в положительномконтроле СО, мг/млСодержание белка в отрицательномконтроле СО, мг/млОписаниеПримечание – н/и – не исследовалось.Прозрачная бесцветная жидкостьПрозрачная бесцветнаяжидкость97Таблица 17 – Изучение молекулярно-массового распределения молекул иммуноглобулина в стандартном образце дляопределения антикомплементарной активностиНаименование определяемого компонентаРезультаты определения на … мес.
наблюдения0236912151821– положительный контроль99,6499,5099,5498,9798,9498,8499,2598,2098,62– отрицательный контроль99,9699,8699,8999,7299,6199,6799,7898,7499,55– положительный контроль0,360,500,461,031,061,160,751,201,21– отрицательный контроль0,040,140,110,280,390,330,220,640,33– положительный контроль–––––––0,600,17– отрицательный контроль–––––––0,620,12Мономеры и димеры, процентПолимеры и агрегаты, процентФрагменты, процентКомплект СО для определения АКА состоит из двух ампул из прозрачногонейтрального стекла, содержащих раствор иммуноглобулина человека, имеющихмаркировку на внешней поверхности.Разработана нормативно-техническая документация на СО: паспорт,инструкция по применению, макеты первичной упаковки (Приложение В) ипроект Методических рекомендаций по изготовлению и контролю стандартногообразцаиммуноглобулиначеловека(антикомплементарнаяактивность)(Приложение Г).ВЫВОДЫ ПО ГЛАВЕ 41.
Стандартный образец для определения АКА аттестован (со степеньюдостоверности 95 %) со значениями АКА отрицательного контроля в интервале от 37,9до 45,1 %; положительного контроля в интервале от 73,6 до 82,8 % и содержаниембелка в интервале от 100,2 до 103,8 мг/мл2. По результатам изучения стабильности СО для определения АКАустановлен срок годности равный 18 мес.
Кроме того, показана возможность егоиспользования согласно инструкции по применению в течение 14 суток послевскрытия ампул.3. Разработананормативно-техническаядокументациянаСОдляопределения АКА (паспорт, инструкция по применению и макеты первичнойупаковки).99ЗАКЛЮЧЕНИЕВ результате выполненного исследования проведен научный анализсовременного состояния проблемы стандартизации ЛП иммуноглобулиновчеловека по АКА. Показана необходимость использования СО при определенииАКА для повышения безопасности иммуноглобулинотерапии.Обоснованы оптимальные условия определения АКА лекарственныхпрепаратов ИГВВ, предусматривающие использование эритроцитов из кровибараньей дефибринированной с цитратом натрия, гемолитической сыворотки всоответствующем разведении, пулированного комплемента морских свинок (inhouse) и желатин-солевого раствора, как альтернатива желатин-барбиталовомубуферному раствору.
Оптимизированная методика послужила основой дляразработки общей фармакопейной статьи «Определение антикомплементарнойактивностилекарственныхвнутривенноговведения».препаратовиммуноглобулиновРазработаннаяОФСчеловекаутвержденадляприказомМинистерства здравоохранения РФ от 21 ноября 2014 г. № 768 и опубликована вГФ РФ XIII издания на основании приказа Министерства здравоохранения РФ от29 октября 2015 г. № 771, предусматривающем ее введение в действие с 1 января2016 г.Определены требования к кандидату в СО для определения АКА, а именно:значения АКА отрицательного контроля должны составлять менее 50 %;положительного контроля более 50 %; содержание белка в отрицательном иположительном контролях должно быть одинаковым и составлять не менее12,5 мг/мл; положительный и отрицательный контроли должны представлятьсобой раствор иммуноглобулина человека в идентичной форме выпуска (раствориммуноглобулина человека в ампулах от 1 до 5 мл).В результате изучения антикомплементарных свойств лекарственныхпрепаратовИГВВиИГВМ,атакжеЛПиммуноглобулиначеловека,подвергшихся нагреванию, выбран кандидат в СО для определения АКА иопределеныоптимальныеусловияполученияположительногоконтроля.Обоснована возможность разработки двухкомпонентного СО для определения100АКА, представляющего собой: отрицательный контроль – образец ИГВВ/ИГВМ,положительный контроль – образец ИГВВ/ИГВМ, подвергшийся термическойобработке на водяной бане (температура воды 56±1 °С) в течение определенноговремени.РазработанотечественныйСОиммуноглобулиначеловека(антикомплементарная активность) – ОСО 42-28-430, предназначенный дляиспользования в фармакопейной методике определения АКА лекарственныхпрепаратов ИГВВ.
Получена серия СО для определения АКА и проведена ееаттестация в соответствии с программой аттестации. По результатам аттестациизначения антикомплементарной активности СО для отрицательного контроля находятсявнутри интервала от 37,9 до 45,1 %; для положительного контроля находятся внутриинтервала от 73,6 до 82,8 % со степенью достоверности 95 %. Содержание белкасоставило 102±1,8 мг/мл со степенью достоверности 95 %.
Установленный срокгодности аттестованного СО на основании исследования стабильности составил 18 мес.Вскрытые ампулы СО подлежат использованию в течение не более 14 суток.Разработананормативно-техническаядокументация:паспорт,инструкцияпоприменению и макет первичной упаковки СО в соответствии с ГОСТ 8.694-2010.Практические рекомендации.Использование в методике ОФС.1.8.2.0007.15 разработанного СО дляопределения АКА производителями ЛП ИГВВ и учреждениями, проводящимиэкспертизу и контроль качества лекарственных средств, позволит получатьдостоверные значения АКА, необходимые для прогноза их клиническогоприменения.
СО для определения АКА может быть применен для аттестации СОпредприятия.Рекомендации и перспективы дальнейшей разработки темы.Дальнейшая стандартизация методов контроля качества отечественных ЛПИГВВвведенияподругимпоказателямспецифическойбезопасностипредставляет значительный научный и практический интерес, что позволитобеспечить выпуск отечественных ЛП ИГВВ, соответствующих международнымстандартам качества.101ОБЩИЕ ВЫВОДЫ1.
Научный анализ современного состояния проблемы стандартизации ЛПиммуноглобулинов человека по АКА выявил необходимость оптимизации истандартизации методики определения АКА, используемой при производстве иконтроле качества отечественных ЛП ИГВВ.2. Стандартизована методика определения АКА применением СО воптимальных условиях, предусматривающих использование эритроцитов изкрови бараньей дефибринированной с цитратом натрия, гемолитическойсыворотки в соответствующем разведении, пулированного комплемента морскихсвинок (in house) и желатин-солевого раствора, как альтернативу желатинбарбиталовомубуферномуОФС.1.8.2.0007.15раствору.«ОпределениеМетодикареализованаантикомплементарнойввидеактивностилекарственных препаратов иммуноглобулинов человека для внутривенноговведения» ГФ РФ XIII издания.
Фармакопейная статья «Иммуноглобулинчеловеканормальныйдлявнутривенноговведения»(ФС.3.3.2.0008.15)предусматривает определение АКА по разработанной ОФС.1.8.2.0007.15.3. Определены требования к кандидату в СО для определения АКА:значения АКА отрицательного контроля должны составлять менее 50 %;положительного контроля более 50 %; содержание белка в отрицательном иположительном контролях должно быть одинаковым и составлять не менее12,5 мг/мл; положительный и отрицательный контроли должны представлятьсобой раствор иммуноглобулина человека в идентичной форме выпуска (раствориммуноглобулина человека в ампулах от 1 до 5 мл).4. ОбоснованвыборкандидатавСОиспособполученияегоположительного контроля.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
