Диссертация (1141374), страница 14
Текст из файла (страница 14)
Анализтаблицыпоказывает,чтоантимикробнаяактивностьвотношениизолотистого стафилококка для Ройлевина в 2 раза ниже, чем у горминона(31,2 и 15,6 мкг/мл соответственно), в 2 раза выше, чем у ацетоксигорминона(62,5 мкг/мл) и равна активности 7-оксогорминона (31,2 мкг/мл).
АктивностиРойлевина, равной 31,2 мкг/мл, отвечают образцы с содержанием горминонаот 57,24 до 36,4 %. На основании этих данных установлена нижняя нормасодержания горминона в Ройлевине 35%.105Таблица 21Сравнительная антимикробная активность препарата Ройлевин из корней шалфея лекарственного ииндивидуальных ройлеанонов№/Название образцаОписание Растворимость№112237-ацетоксиройлеанонСветло-желтыйкристаллическийпорошокСветло-желтыйкристаллическийпорошокОранжевыйкристаллическийпорошокТемно-красныйкристаллическийпорошокАморфный порошокжелтого цвета7-гидроксиройлеанон(горминон)34567Таксохинон(стереоизомергорминона)7-оскоройлеанонРойлевин оп.
33Ройлевин оп. 34Ройлевин оп. 35Аморфный порошокжелтого цветаАморфный порошокжелтого цвета4Содержание ройStaphyloлеанонов,-coccus%aureus209 P56В спирте, вИндивид.хлороформевеществоВ спирте, вИндивид.хлороформевеществоВ спирте, вИндивид.хлороформевеществоВ спирте, вИндивид.хлороформевеществоВ хлороформе,спирте, 70%спиртеВ хлороформе,спирте, 70%спиртеВ хлороформе,спирте, 70%спирте50,9Антимикробная активность, мкг/млEscherichiacoli25922ProteusvulgarisATCCPseudoCandidaMicromonasalbicansNC sporumaeruginosa TC 885-653 canis 3/84ATCC 9027891011762,5н/а 1000500н/а 1000100050015,6н/а 10001000н/а 10001000500*15,6част.7,831,2---------62,531,21000100010001000500част.
12554,631,21000100010001000500част. 25047,6731,21000100010001000250част. 125106Продолжение Таблицы 21182Ройлевин оп. 3734Аморфный порошокжелтого цветаВ хлороформе,спирте, 70%спиртеВ хлороформе,спирте, 70%спиртеВ хлороформе,спирте, 70%спиртеВ хлороформе,спирте, 70%спиртеВ хлороформе,спирте, 70%спиртеВ хлороформе,спирте, 70%спиртеВ хлороформе,спирте, 70%спиртеВ хлороформе,спирте, 70%спирте9Ройлевин оп. 39Аморфный порошокжелтого цвета10Ройлевин оп. 42Аморфный порошокжелтого цвета11Ройлевин оп. 43Аморфный порошокжелтого цвета12131415Ройлевин оп. 44-5Ройлевин оп.
45Ройлевин оп. 46Ройлевин оп. 47Аморфный порошокжелтого цветаАморфный порошокжелтого цветаАморфный порошокжелтого цветаАморфный порошокжелтого цвета553,66631,255,8731,256,4931,257,2431,237,7537,7837,8336,462,5част.31,231,231,231,271000част.5001000част.5001000част.5001000част.5001000част.5001000част.5001000част.5001000част.50081000910111000част. 500100010001000част. 500100025010001000част. 500100025010001000част. 500100050050010001000500част. 250част. 250250част. 12510005001000250част. 12510005001000500част. 25010005001000250част. 125*-антимикробная активность изучена только на данный штамм патогенного микроорганизма в связи с ограниченнымколичеством индивидуального вещества107Полученные значения коэффициента вариации не превышают 2 %,различия между результатами сотрудников статистически незначимы (Fфакт.<F табл.), что позволяет считать внутрилабораторную воспроизводимостьрезультатов приемлемой.Полученные экспериментальные данные позволяют положительнооценить методику количественного определения 7-гидроксиройлеанона(горминона) в Ройлевине, сусбтанции антимикробного действия из корнейшалфея лекарственного по полученным значениям параметров:˗ Контроль специфичности (совпадение максимумов поглощения придлине волны 273±2 нм);˗ Контроль линейности методики (коэффициент корреляции 0,9994);˗ Контроль правильности методики (диапазон процента восстановления –от 98,30 % до 101,7 %);˗ Контроль внутрилабораторной прецизионности методики:Сходимость методики (коэффициент вариации 1,31 %);Воспроизводимость методики(коэффициенты вариации внутрилабораторнойвоспроизводимости не превышают 2 %).Методикуколичественногоможносчитатьопределенияпригоднойдля7-гидроксиройлеанонадостоверногоприполученииРойлевина, субстанции антимикробного действия из корней шалфеялекарственного.Содержание горминона в Ройлевине устанавливается не ниже 35%.5.2.2.
Разработка методик количественного определения 7гидроксиройлеанона (горминона) в постадийном контроле приполучении Ройлевина108При сопоставлении максимума поглощения в УФ-спектрах СОгорминона и спиртового экстракта корней шалфея лекарственного отмеченоих различие: λmaxгорминона 273 нм (в этаноле), λmaxспиртового экстрактакорней шалфея 278 нм, отсюда следует, что непосредственное измерениеоптической плотности спиртового экстракта корней дает искаженныерезультаты. Необходимо было определить причину различия в поглощенииРойлевина и стандарта в УФ области. В ходе хроматографирования суммыэкстрактивных веществ (экстрагент хлороформ 100%) из корней шалфея(3,36 г) на колонке с силикагелем 40/100µ (93 г, h=32 см,d=2 см) элюентхлороформ 100% получено вещество с температурой плавления 68-70 оС,белого цвета, имеющего максимум поглощения при 278-279 нм. Этовещество, как следует из данных 1Н ЯМР спектра (Рисунок 39), является посвоей природе паразамещенным фенолом с длинной неразветвленнойалифатической цепью.Рисунок 39.1Н ЯМР спектр паразамещенного фенола с длиннойалифатической цепью.Подобные соединения описаны в работе [67].
В роде Plectranthus, какизвестно, содержатся ройлеаноны. В нашем случае в корнях шалфеялекарственного парафенолы с длинной алкильной цепью также являются109спутниками ройлеанонов. Параметры 1Н ЯМР спектра выделенного намивещества в ароматической области 6,77 и 7,04 м.д., система АА’ВВ’,вработе[67]6,75 и 7,03 м.д.
соответственно. λmaxв УФ области 279 нм.Окончательноеустановлениеструктурыэтоговеществанепроводилось, т.к. причина различия в УФ-спектрах Ройлевина, горминона испиртовогоэкстрактакорнейустановлена.Крометого,входетехнологического процесса получения Ройлевина, это соединение остается влипидной фракции, которая отбрасывается.Следовательно, стратегия анализа содержания горминона в сырье,шроте и в ходе постадийного контроля технологического процесса должнабыть близкой к технологии получения Ройлевина.5.2.2.1. Разработка методики определения горминона в сырье и шротеАналитическуюпробусырьяизмельчаютдоразмерачастицпроходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 0,5 мм.
Около 1 г (точнаянавеска)измельченногосырьяпомещаютвплоскодоннуюколбувместимостью 200 мл со шлифом, приливают 100 мл спирта этилового 96%.Колбу с содержимым взвешивают (с погрешностью ± 0,01 г), помещают накипящую водяную баню с обратным холодильником, экстракцию ведут втечение 60 мин с момента закипания растворителя. После этого колбуохлаждают до комнатной температуры и взвешивают, массу доводят допервоначального объема этим же растворителем.Полученноеизвлечениефильтруютчерезскладчатыйобеззоленныйфильтрбелая лента (раствор А). К раствору А прибавляют 100мл очищенной воды и упаривают на роторном испарителе до объема 50-60мл. Далее раствор подкисляют 4 мл 5% кислоты хлористоводородной,переносят в плоскодонную колбу объемом 300 мл и добавляют 100 млхлороформа. Помещают колбу на качалку на 30 минут.
Полученную смесьпереносят в делительную воронку объемом 250 мл, взбалтывают 5-6 раз и110оставляют до полного разделения слоев. Хлороформное извлечениепомещают в плоскодонную колбу объемом 300 мл, к нему прибавляют 75 мл1% раствора натрия гидроксида, смесь помещают на качалку на 30 минут.Затем смесь переносят в делительную воронку объемом 250 мл, взбалтывают5-6 раз и оставляют до полного разделения слоев, после этого хлороформноеизвлечение отбрасывают, щелочной раствор переносят в химический стаканиоставляютпериодическиподтягойдоперемешивая.полногоудаленияИзвлечениепаровподкисляетсяхлороформа,5%кислотойхлористоводородной до значения рН=2 (13 мл) и оставляют на 10 минут дополучения хлопьевидного осадка.Полученный осадок отфильтровывают наворонке через обеззоленный бумажный фильтр (белая лента) диаметром11см,промывают40млдистиллированнойводы.Промытыйосадокподсушивают, обрабатывают 40 мл 96% спиртом, собирая раствор в мернуюколбу вместимостью 50 мл, доводят объем до метки этим же спиртом(раствор Б).
В мерную колбу вместимостью 25 мл помещают 5 мл раствора Би доводят до метки спиртом этиловым 96% (раствор В).Оптическую плотность раствора В измеряют на спектрофотометре вкювете с толщиной слоя 10 мм при длине волны 273 нм. В качестве растворасравнения используют спирт этиловый 96%.Содержание горминона в процентах в пересчете на абсолютно сухоесырье рассчитывают по формуле:XD 100 50 25 100m 5 A11см% (100 W ) где,D – оптическая плотность испытуемого раствора;1%А1см- удельный показатель поглощения горминона равный 395;m – масса сырья, взятого для анализа, г;W – потеря в массе при высушивании, %.1115.2.2.2.
Разработка методики анализа 1го и 2го спиртового экстрактасырьяК 10 мл раствора спиртового извлечения прибавляют 100 млдистиллированной воды и упаривают на роторном испарителе до объема 5060 мл. Далее раствор подкисляют 4 мл 5% кислоты хлористоводородной,переносят в плоскодонную колбу объемом 300 мл и добавляют 100 млхлороформа. Помещают колбу на качалку на 30 минут. Полученную смесьпереносят в делительную воронку объемом 250 мл, взбалтывают 5-6 раз иоставляют до полного разделения слоев. Хлороформное извлечениепомещают в плоскодонную колбу объемом 300 мл, к нему прибавляют 75 мл1% раствора натрия гидроксида, смесь помещают на качалку на 30 минут.Затем смесь переносят в делительную воронку объемом 250 мл ивзбалтывают 5-6 раз, оставляют до полного разделения слоев, после этогохлороформное извлечение отбрасывают, щелочной раствор переносят вхимический стакан и оставляют под тягой до полного удаления паровхлороформа периодически перемешивая.
Извлечение подкисляют 13 мл 5%кислоты хлористоводородной до значения рН=2 и оставляют на 10 минут дополучения хлопьевидного осадка. Полученный осадок отфильтровывают наворонке через обеззоленный бумажный фильтр (белая лента) диаметром 11см, промывают 40 мл дистиллированной воды. Промытый осадок нафильтреподсушивают, обрабатывают 40 мл 96% спиртом, собирая раствор вмерную колбу вместимостью 50 мл. Объем доводят до метки этим жеспиртом (раствор Б).Оптическую плотность раствора Б измеряют на спектрофотометре вкювете с толщиной слоя 10 мм при длине волны 273 нм.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
