Главная » Просмотр файлов » Диссертация

Диссертация (1141374), страница 9

Файл №1141374 Диссертация (Разработка способа получения субстанции антимикробного действия на основе ройлеанонов из корней шалфея лекарственного) 9 страницаДиссертация (1141374) страница 92019-05-31СтудИзба
Просмтор этого файла доступен только зарегистрированным пользователям. Но у нас супер быстрая регистрация: достаточно только электронной почты!

Текст из файла (страница 9)

Его образование можно объяснить разрывом связей С5С6 (Рисунок 23) и последующим отрывом цикла А (разрыв связей С9-С10).Хотя в последнем случае (связи С9-С10) распад осуществляется не по β-связипо отношению к кратной связи, как это преимущественно имеет место прираспаде непредельных соединений. Возможно, здесь решающую роль играетприоритетность распада с разрывом связей в месте разветвления [2].Рисунок 23. Фрагмент е.Для четкой фиксации пика молекулярного иона, имеющего часто оченьслабую интенсивность, информативна химическая ионизация ионами натрияв электронном спрее. В масс-спектрах горминона, таксохинона и 7ацетоксигорминона наблюдаются пики квазимолекулярных ионов с m/z355,355 и 397 (М+ + 23).

Последние устойчивы вследствие уменьшения энергии58возбуждения, вследствие чего дают пики с очень высокой интенсивностью(Рисунок 24).Рисунок 24. Спектр горминона методом ВЭЖХ-МС (электроспрей).3.2. Пентациклические тритерпеноидыКлекарственномупредставляющемусобойпрепаратурастительногомногокомпонентнуюсмесь,происхождения,предъявляютсятребования по возможности полнее охарактеризовать химическую природувсех компонентов. Основным действующим веществом в разработаннойнами субстанции антимикробного действия Ройлевин является горминон, вкачествеминорныхкомпонентов–7-оскоройлеанон,таксохинониройлеанон.

Содержание горминона в препарате порядка 50%, остальные 50%составляют вещества неройлеаноновой природы.ТехнологияполученияРойлевинавключаетпреобразование7-ацетоксигорминонав более активный горминон в дополнение к нативному59горминону под действием щелочи с последующим подкислением. При этом всостав препарата переходят вещества кислого характера неройлеаноновойприроды. Последние, согласно результатам проведенных нами исследований,представляют собой пентациклические тритерпеноиды.3.2.1. Выделение тритерпеноидов методом колоночной хроматографииСпиртовой экстракт измельченных корней шалфея лекарственноготрехлетнеговозраста,собранныхврайонестаницыВасюринскаяКраснодарского края, полученный трехкратной экстракцией сырья 1:5 96 оэтанолом,упаренныйдо5-6%исходногообъема,разбавлялидистиллированной водой 1:2, полностью отгоняли спирт, разбавлялидополнительно водой (60-70% кубового остатка) и дважды экстрагировалихлороформом.

Соотношение объемов органической и водной фаз ~1:4.Хлороформный экстракт обрабатывали 1% водным раствором гидроксиданатрия 1:3 два раза и 1:5 два раза. Щелочные извлечения подкисляли 5%соляной кислотой, осадок промывали до нейтральной реакции и высушивалипри60оС.содержаниемПолученныйсуммыуказаннымройлеаноновспособом45,6%вобразецРойлевинаколичестве170смгхроматографировали на колонке с силикагелем 40/100µ (15,0 г, h=10,5 см,d=1,5 см), предварительно смешав его с 0,75 г того же силикагеля.Элюирование проводили петролейным эфиром (1 фр.) и смесью петролейныйэфир-хлороформ 3:1 (2 фр.), 1:1 (3-5 фр.), 1:3 (6-17 фр.), хлороформом (18-25фр.), смесью хлороформ-метанол с увеличением градиента последнего от 0,5до 3% (перепад 0,5%, 31-55 фр.). Объем фракций по 10-12 мл.

Из 17-18фракции выделена смесь веществ VII и VIII (2,7 мг). Из 31 фракции (1%-ныйметанол) выделено веществоX (2,5 мг), из 32-33 фракций (1%-ный метанол) –веществоIX (4,5 мг).Вещество XI было выделено из другого опыта. Препарат Ройлевина вколичестве 0,6 г смешали с 3,0 г силикагеля 40/100µ поместили на колонку с60тем же силикагелем (42,0 г, h=15,6 см, d=2,5 см). Элюент – гексан-хлороформс увеличением градиента последнего от 50% до 90% (фракции 1-80, объем45-50 мл) и хлороформ-метанол с увеличением градиента последнего от 0,5%до 3,5% (фракции 81-134, объем 30 мл).

Вещества VII, VIII, X, IX, XI быливыделены из 50-53 (25% хлороформа), 73-83 (100% хлороформ), 87-94 (05,1%метанол), 113-114 (3% метанол) фракций соответственно.Доочистку веществ IX, X, XI проводили рехроматографией на том жесиликагеле, на колонке d=1 см,h=4 см с массой сорбента 3,0-3,3 г (массанеочищенного вещества из фракций 73-83, 87-94, 113-114 порядка 30-40 мг,смешанного с 0,3-0,35 г силикагеля). Элюент хлороформ и хлороформметанол с увеличением градиента метанола от 0,5 до 2%.

Перепад 0,5%.Олеаноловая и урсоловая кислоты из фракций 50-53 не разделялись.3.2.2. Идентификация пентациклических тритерпеноидов.Установление строения нового веществаСмесь веществ VII и VIII на основании данных 1Н ЯМР спектрасостоит из олеаноловой и урсоловой кислот с преобладанием последней.Характеристическими для VII и VIII являются сигналы протона при С-18: дляолеаноловой кислоты дублет дублетов 2,85 м.д. (β-амириновый цикл), дляурсоловой – дублет 2,2 м.д. (производные α-амирина) (Рисунок 25) [55].Кроме того, присутствие в смеси урсоловой кислоты подтверждаетсяналичием двух дублетов 0,85 и 0,94 м.д.

в области сигналов метильныхгрупп.Сигналы олефинового протона и Н-3 для обеих кислот совпадают: 5,25и 3,25 м.д. соответственно. Также полностью совпадают зоны адсорбции VIIи VIII на ТСХ, так что различить их можно только с помощью 1Н ЯМРспектроскопии, как описано выше.61Рисунок 25. 1Н ЯМР спектры: А) олеаноловой кислоты (CDCl3); В) урсоловойкислоты (CDCl3-CD3OD); С) смеси олеаноловой и урсоловой кислот (CDCl3,О-ТМС, 200 МГц).Принадлежность соединений IХ и Х к пентациклическим тритерпенамследует из данных их масс-спектров. В спектре IХ присутствуют пики m/z488 (М+), 472 (10,1%), 470 (3,9%), 442 (7,2%), 426 (4,6%), 368 (8,9%), 316(35,6%), 285 (19,1%), 271 (33,1%), 264 (15,3%), 248 (100%), 223 (26,4%), 219(34,9%), 203 (65,3%), 187 (34,3%).

Пики m/z 264, 248 и 223 связаны с ретро-62диеновым распадом (РДР) молекулы по связям С-9, С-11 и С-8, С-14 цикла Спри наличии Δ12 [5,6,66]. Массовое число пика 264 (циклы D,E)свидетельствует о присутствии в этой частимолекулы трех атомовкислорода, а m/z 223 (циклы А,В) указывает на наличие в этом фрагментемолекулы двух кислородных функций. Одна из кислородных функций (D,E)– карбоксильная группа, по биогенетическим соображениям расположенапри С-17. Ее наличие обусловливает в масс-спектре пики m/z 442 (М-НСОН),m/z 426 (m/z 472-HCOOH, m/z 470-CO2), m/z 219 (m/z 264-COOH), m/z 203(m/z 248-COOH). Положение третьей кислородной функции, ОН-группы, вцикле Е при С-19 однозначно следует из данных 1Н ЯМР спектра.

Сигнал Н18 при 2,5 м.д. представляет собой синглет, что связано с наличием двухзаместителей при С-19 (СН3- и ОН- группы). Из этих же данных дляструктуры IХ осуществляется выбор между производными олеанана и урсанав пользу последнего.

Сигнал метильной группы при С-20 (0,94 м.д., J=6,5 Гц)в виде дублета также согласуется с этим выводом.Две гидроксильные группынаходятся в цикле А, что следует из данных масс-спектра. Разрыв связей С-9,С-10 и С-5, С-6 и отщепление цикла А с m/z 156 дает пики m/z 332 (M + C9H16O2) и 316 (m/z 472-C9H16O2).

Одна ОН-группа находится при С-3.Вицинальное расположение к ОН-группе при С-3 второй ОН-группы следуетиз наличия кросс-пика 3,92 м.д./3,30 м.д. в спектре COSY между сигналамиН-2иН-3.Вопросовзаимномпространственномрасположениигидроксильных групп в молекуле Х решали путем сопоставления слитературнымирасположениюданными[81,90,116,117].функциональныхгруппвРассмотренномускелетеурсанавышеотвечаютэускафиковая (2α,3α) и торментоловая (2α,3β) кислоты. Параметры сигналаметильных групп и Н-2, и Н-3 в 1Н ЯМР спектрах позволяют сделать выбор впользу конкретного стереоизомера: вещество IХ отвечает структуреэускафиковой кислоты С30Н48О5 (Таблица 7).63Таблица 7Химические сдвиги (м.д.) и мультиплетность сигналов дляэускафиковой, торментоловой кислот и вещества XIПоложение Торментоловаяпротонов2Эускафиковая кислотакислота [116,117]3,64[117](ддд); 3,9310,0Гц;11,0Гц; 11,3Гц;3,0Гц3,1Гц32,92 (д)3,33 (д)231,02 (с)0,99 (с)Вещество XI[81](ддд);3,93 (ддд); 12,0Гц;3,5Гц; -3,0 Гц; 2,8Гц3,32 (д)3,29 (д)1,00 (с)0,87 (с)240,81 (с)0,87 (с)0,87 (с)0,99 (с)250,96 (с)0,99 (с)1,00 (с)260,80 (с)0,80 (с)0,82 (с)0,80 (с)271,30 (с)1,35 (с)1,33 (с)1,35 (с)291,20 (с)1,19 (с)1,20 (с)1,20 (с)301,01 (д)0,93 (д)0,92 (д)0,93 (д)Вещество Х так же, как и IХ, по данным 1Н ЯМР и масс-спектровпринадлежиткпентациклическимтритерпенамурсановоготипа.Действительно, масс-спектр Х содержит те же основные пики, что и вспектре вещества IХ: М+ 472 (1,6%), m/z 316 (M+ - С9Н16О2), m/z 248 (D,E),m/z 223 (A,B) – РДР, m/z 203 (m/z 248 -СООН).

Отсутствие пика m/z 264 всочетании с сигналом Н-18 в виде дублета в 1Н ЯМР спектре (2,2 м.д.) и егосмещение в сильное поле по сравнению с 1Н ЯМР спектром IХ (2,52 м.д.)указывает на отсутствие ОН- группы при С-19. Пик m/z 223 в масс спектре Хи сигналы протонов в 1Н ЯМР спектре 3,93 м.д., ддд, J1=12 Гц, J2=J3=2,85 Гц(Н-2)и 3,31 м.д., д, частично перекрывающийся с сигналом растворителя (Н-643) подтверждают наличие ОН-групп при С-2 и С-3. Таким образом Хявляется19-дезоксиэускафиковой кислотой С30Н48О4.Рисунок26.СтруктурныеформулыIX-эускафиковойиX-19-дезоксиэускафиковой кислот.Характер фрагментации молекул эускафиковой кислоты (IX) поддействием электронного удара представлен на Схеме 1.Схема 1.

Распад эускафиковой кислоты под действием электронного удара.65Аналогичнопротекаетифрагментация19-дезоксиэускафиковойкислоты.Принадлежность вещества ХI к пентациклическим тритерпенамследует из данных масс-спектра. В масс-спектре наблюдаются следующиехарактеристические пики: m/z 486, m/z 442, m/z 248 (100%), m/z 223, m/z 219,m/z 203. Характер ретродиенового распада свидетельствует о наличиидвойной связи ∆12[66]. Пик m/z 248 характерен для иона, включающегоциклы D.E, карбоксильную группу, отщепление которой дает пик m/z 203.Пик m/z 248 образуется не из молекулярного иона, а после отщепления изпоследнего двух ОН-групп.

Наличие в масс-спектре пика иона m/z 223,включающего циклы А и В, свидетельствует о расположении двухкислородных функций в этом фрагменте. Слабоинтенсивный пик m/z 486обусловлен ионом, образующимся в результате потери молекулярным иономН2О. Наличие пиков m/z 442 и m/z 219 связано с конкурирующим распадомиона m/z 486 (m/z 486 – CO2) и последующим ретродиеновым распадом собразованием ионов m/z 219 (циклы D, E) и 223 (циклы А,В). Дальнейшаяинформация о структуре вещества ХI следует из данных 1Н ЯМР спектра.Принадлежность вещества ХI к производным β-амирина следует изпараметров сигнала Н-18: дублет дублетов 2,84 м.д., J1=13,6 Гц, J2=4,5 Гц,что свидетельствует об отсутствии заместителя при С-19 и присоединенииобеих СН3-групп к С-20.

Характеристики

Список файлов диссертации

Разработка способа получения субстанции антимикробного действия на основе ройлеанонов из корней шалфея лекарственного
Свежие статьи
Популярно сейчас
Как Вы думаете, сколько людей до Вас делали точно такое же задание? 99% студентов выполняют точно такие же задания, как и их предшественники год назад. Найдите нужный учебный материал на СтудИзбе!
Ответы на популярные вопросы
Да! Наши авторы собирают и выкладывают те работы, которые сдаются в Вашем учебном заведении ежегодно и уже проверены преподавателями.
Да! У нас любой человек может выложить любую учебную работу и зарабатывать на её продажах! Но каждый учебный материал публикуется только после тщательной проверки администрацией.
Вернём деньги! А если быть более точными, то автору даётся немного времени на исправление, а если не исправит или выйдет время, то вернём деньги в полном объёме!
Да! На равне с готовыми студенческими работами у нас продаются услуги. Цены на услуги видны сразу, то есть Вам нужно только указать параметры и сразу можно оплачивать.
Отзывы студентов
Ставлю 10/10
Все нравится, очень удобный сайт, помогает в учебе. Кроме этого, можно заработать самому, выставляя готовые учебные материалы на продажу здесь. Рейтинги и отзывы на преподавателей очень помогают сориентироваться в начале нового семестра. Спасибо за такую функцию. Ставлю максимальную оценку.
Лучшая платформа для успешной сдачи сессии
Познакомился со СтудИзбой благодаря своему другу, очень нравится интерфейс, количество доступных файлов, цена, в общем, все прекрасно. Даже сам продаю какие-то свои работы.
Студизба ван лав ❤
Очень офигенный сайт для студентов. Много полезных учебных материалов. Пользуюсь студизбой с октября 2021 года. Серьёзных нареканий нет. Хотелось бы, что бы ввели подписочную модель и сделали материалы дешевле 300 рублей в рамках подписки бесплатными.
Отличный сайт
Лично меня всё устраивает - и покупка, и продажа; и цены, и возможность предпросмотра куска файла, и обилие бесплатных файлов (в подборках по авторам, читай, ВУЗам и факультетам). Есть определённые баги, но всё решаемо, да и администраторы реагируют в течение суток.
Маленький отзыв о большом помощнике!
Студизба спасает в те моменты, когда сроки горят, а работ накопилось достаточно. Довольно удобный сайт с простой навигацией и огромным количеством материалов.
Студ. Изба как крупнейший сборник работ для студентов
Тут дофига бывает всего полезного. Печально, что бывают предметы по которым даже одного бесплатного решения нет, но это скорее вопрос к студентам. В остальном всё здорово.
Спасательный островок
Если уже не успеваешь разобраться или застрял на каком-то задание поможет тебе быстро и недорого решить твою проблему.
Всё и так отлично
Всё очень удобно. Особенно круто, что есть система бонусов и можно выводить остатки денег. Очень много качественных бесплатных файлов.
Отзыв о системе "Студизба"
Отличная платформа для распространения работ, востребованных студентами. Хорошо налаженная и качественная работа сайта, огромная база заданий и аудитория.
Отличный помощник
Отличный сайт с кучей полезных файлов, позволяющий найти много методичек / учебников / отзывов о вузах и преподователях.
Отлично помогает студентам в любой момент для решения трудных и незамедлительных задач
Хотелось бы больше конкретной информации о преподавателях. А так в принципе хороший сайт, всегда им пользуюсь и ни разу не было желания прекратить. Хороший сайт для помощи студентам, удобный и приятный интерфейс. Из недостатков можно выделить только отсутствия небольшого количества файлов.
Спасибо за шикарный сайт
Великолепный сайт на котором студент за не большие деньги может найти помощь с дз, проектами курсовыми, лабораторными, а также узнать отзывы на преподавателей и бесплатно скачать пособия.
Популярные преподаватели
Добавляйте материалы
и зарабатывайте!
Продажи идут автоматически
6547
Авторов
на СтудИзбе
300
Средний доход
с одного платного файла
Обучение Подробнее