Диссертация (1141374)
Текст из файла
Федеральное государственное бюджетное научное учреждение«Всероссийский научно-исследовательский институт лекарственных иароматических растений»На правах рукописиБУЛУШЕВА МАРИЯ КОНСТАНТИНОВНАРАЗРАБОТКА СПОСОБА ПОЛУЧЕНИЯ СУБСТАНЦИИАНТИМИКРОБНОГО ДЕЙСТВИЯ НА ОСНОВЕ РОЙЛЕАНОНОВ ИЗКОРНЕЙ ШАЛФЕЯ ЛЕКАРСТВЕННОГО14.04.02 – Фармацевтическая химия, фармакогнозияДиссертацияна соискание ученой степеникандидата фармацевтических наукНаучный руководитель кандидат химических наукСавина Аэллита АлексеевнаМосква – 20172ОГЛАВЛЕНИЕВВЕДЕНИЕ……………………………………………………………………….5Часть I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫГлава I.
СОВРЕМЕННОЕ СОСТОЯНИЕ ФАРМАКОГНОСТИЧЕСКОГО,ФИТОХИМИЧЕСКОГО И ФАРМАКОЛОГИЧЕСКОГО ИЗУЧЕНИЯШАЛФЕЯ ЛЕКАРСТВЕННОГО, РОЙЛЕАНОНЫ. ТРИТЕРПЕНОИДЫ. ....121.1.1.2.1.3.1.4.1.5.Ботаническая характеристика……………………………....12Местообитание……………………………………………....13Химический состав шалфея лекарственного1.3.1. Надземная часть………………………………..131.3.2. Корни…...……………………………………....14Ройлеаноны…………………………………………………..151.4.1. Распространение в растительном мире………151.4.2.
Биогенез………………………………………..151.4.3. Методы выделения из растительного сырья..221.4.4. Химические свойства ройлеанонов………….231.4.5. Установление структуры ройлеанонов………261.4.6. Биологическая активность ройлеанонов…….33Тритерпеноиды олеанолового и урсанового ряда………..351.5.1. Методыустановлениястроениятритерпеноидов……………………………….361.5.2. Биологическая активность тритерпеноидов..40Часть II. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬГлава II. ОБЪЕКТЫ, МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ……...43ГлаваIII.ИЗУЧЕНИЕМОРФОЛОГО-АНАТОМИЧЕСКИХХАРАКТЕРИСТИК И ХИМИЧЕСКОГО СОСТАВА КОРНЕЙ ШАЛФЕЯЛЕКАРСТВЕННОГО (SALVIA OFFICINALIS L.)……………………………..463.1.
Ройлеаноны…………………………………………………….463.1.1. Изучение морфолого-анатомического строениякорней шалфея лекарственного……………..463.1.2. Микроскопический анализ сырья……………463.1.3. Экстракция сырья. Выделение ройлеаноновметодом колоночной хроматографии………4933.1.4. Идентификация ройлеанонов. Сопоставлениеантимикробнойактивностивыделенныхройлеанонов…………………………………..503.1.5.Масс-спектрометрическоеизучениеройлеанонов…………………………………..553.2. Пентациклические тритерпеноиды..…………………………583.2.1.Выделениетритерпеноидовметодомколоночной хроматографии …………………593.2.2.Идентифтикацияпентациклическихтритерпеноидов.Установлениестроениянового вещества………………………………603.2.3.
Биологическая активность пентациклическихтритерпеноидов……………………………….68Выводы к Главе III………………………………………………………………71ГлаваIV.ТЕХНОЛОГИЯПОЛУЧЕНИЯСУБСТАНЦИИАНТИМИКРОБНОГО ДЕЙСТВИЯ РОЙЛЕВИН…………………………….72Выводы к Главе IV………………………………………………………………93Глава V. РАЗРАБОТКА ПОКАЗАТЕЛЕЙ КАЧЕСТВА СУБСТАНЦИИРОЙЛЕВИН………………………………………………………………………945.1. Разработка методов установления подлинночти …………..945.2.Разработка методик количественного определения 7гидроксиройлеанона (горминона) в Ройлевине дляпостадийного контроля при получении субстанции………965.2.1.Разработкаметодикиколичесвтенногоопределения7-гидроксиройлеанона(горминона) в Ройлевине…………………….965.2.1.1. Разработка метода получения горминона СО иоценка его качества…………………………..975.2.1.2.Методика количественного определениягорминона в Ройлевине………………………9945.2.2.Разработкаметодикколичественногоопределения7-гидроксиройлеанона(горминона) в постадийном контроле приполучении Ройлевина……………………….1075.2.2.1.
Разработка методик определения горминона всырье и шроте……………………………….1095.2.2.2. Разработка методики анализа 1го и 2госпиртового экстракта сырья ………………..1115.2.2.3. Разработка методики анализа хлороформногоизвлечения из сырья ..………………………112Выводы к ГлавеV………………………………………………………………113ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ…………………..…………………………114ОБЩИЕ ВЫВОДЫ……………………………………………………………..117СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ ...………………………………………………….118СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ .………………………...…………………………..119ПРИЛОЖЕНИЯ ..………………………………………………………………1365ВВЕДЕНИЕОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫАктуальностьтемыисследованияПрепаратыантибактериальногодействия в настоящее время занимают большой удельный вес среди всехмедикаментозных средств и потребность в них не только не уменьшается, а стечением времени растет. Инфекционные болезни на протяжении всей историибыли огромной проблемой для человечества.
После того, как было установлено,что инфекции вызываются болезнетворными микроорганизмами, вектор борьбыс такими болезнями переместился в направлении создания антибактериальныхсредств. Однако, в течение почти 100 последних лет эффективных в этомнаправлении средств практически не было. Положение изменилось в 30-х годахпрошлого столетия с созданием сульфаниламидов, а десятилетие спустяантибиотиков. Была получена возможность направленного и эффективноголечения. Однако, антибиотики, принеся избавление от одних проблем, вызвалиновые, одна из них – самая труднопреодолимая и глобально масштабная –антибиотикорезистентность. В настоящее время существует уже несколькопоколений антибиотиков, и к большинству из них появляются новыерезистентные штаммы микроорганизмов.
Меры преодоления, предлагаемые внашей стране и за рубежом – комбинации антибиотиков, замена на отдельныхэтапах лечения одних антибиотиков другими, ограничение примененияантибиотиков в тех случаях, когда без них можно обойтись. Другой путьрешения проблемы – обращение к препаратам растительного происхождения.Антимикробные препараты из лекарственного растительного сырья (ЛРС), такиекак Эвкалимин (из листьев эвкалипта), Сангвиритрин (из травы маклеи),разработанные в ВИЛАР как аналоги антибиотиков, имеют широкий спектрдействия, практически не имеют побочных эффектов и, что самое главное, к нимне вырабатывается устойчивость микроорганизмов. Одним из перспективныхрастений для создания препарата антимикробного действия является шалфейлекарственный.6Шалфей лекарственный (Salvia officinalis L.) является официнальнымрастением и часто применяется в медицинской практике разных стран мира.
Онвключен в фармакопеи Англии, США, Германии, Франции, Польши, Австрии иКитая. Экстракты шалфея обладают противовоспалительным, антимикробным,желчегонным, тонизирующим и целым рядом других действий. Традиционносчиталось, что биологическая активность растения связана с наличием эфирногомасла. В последнее время интерес для исследователей представляют нелетучиекомпоненты.
Одной из основных групп действующих веществ являютсядитерпеноиды абиетанового ряда с ароматическим кольцом С, содержащиеся втраве шалфея – корназоловая кислота и ее производные, проявляющие сильноеантимикробное действие. В корнях также найдены абиетановые дитерпеноиды,где кольцо С имеет строение хинона: ройлеанон, 7-гидроксиройлеанон(горминон) и 7-ацетоксиройлеанон. Эти соединения обладают высокойантимикробной активностью. В настоящее время создание субстанцииантимикробногодействияизкорнейшалфеялекарственногоявляетсяактуальным. Потребность в препарате антимикробного действия растительногопроисхождения сохраняется. Возможно комплексное использование растения без дополнительныхэкономических затрат, т.к. корни шалфея лекарственного являютсяотходами после использования растений для заготовки листьев в течениенескольких вегетационных периодов. Помимо антимикробной активности в последнее время у ройлеаноновобнаружено цитотоксическое действие на клетки опухоли кишечника ипечени (Мастеровá с соавт., 2004 г.).Степень разработки темы исследования В лаборатории антимикробныхисследований ВИЛР (Вичканова С.А.
с сотр., 1969 г.) впервые показано наличиеу ройлеанонов антимикробного действия и на основе этих данных (РомановаА.С. с соавт.) была разработана субстанция под рабочим названием «Донелвин»как полуфабрикат для получения лекарственных форм. Действующими7веществами субстанции являлась сумма горминона и 7-ацетосигорминона.Балластными веществами были неполярные компоненты липофильногохарактера, стерины, линейные углеводороды типа козана. Состав субстанцииотличался нестабильностью: доля горминона и 7-ацетоксигорминона колеблетсяот 20 до 80 % в зависимости от сырья.
Другими недостатками технологииявляются необходимость нагрева пожароопасных растворителей (петройленыйэфир), а также трудновоспроизводимый и длительный процесс кристаллизациицелевого продукта с возможностью образования смолистой субстанции, поэтомуработа были приостановлена, а субстанция не зарегистрирована.В связи с вышеизложенным разработка субстанции антимикробногодействия из корней шалфея лекарственного по новой технологии являетсяактуальной.Цельисследования–разработатьспособполучениясубстанцииантимикробного действия на основе углубленного изучения химического составакорней шалфея лекарственного и метод стандартизации субстанции.Задачи:1.
Изучитьморфолого-анатомическоелекарственного,установитьстроениелокализациюкорнейройлеаноновшалфеявкорнях,диагностические признаки сырья.2. Определить количественное содержание и химический состав ройлеаноновв корнях шалфея лекарственного, включая минорные компоненты.3. Разработать новый способ получения субстанции антимикробногодействия, основанный на преобразовании суммы ройлеанонов в наиболееактивный горминон.4. Изучить химический состав веществ, сопутствующих горминону всубстанции антимикробного действия.5.
Установить числовые значения параметров контроля подлинности икачества субстанции антимикробного действия, оформить нормативнуюдокументацию на субстанцию антимикробного действия и на стандартный8образец горминона для количественного определения (проект ФС,методики количественного определения, лабораторный регламент).Научная новизна1. Впервые выделены биологически активные вещества: 7-оксоройлеанон,таксохинон и 6,7-дегидроройлеанон в дополнение к ранее известнымгорминону, 7-ацетоксигорминону и ройлеанону в ходе углубленногоизучения содержания ройлеанонов в корнях шалфея лекарственного.2.
Установлена связь строения молекул и биологической активностиройлеанонов, содержащихся в корнях шалфея. Наиболее активныйгорминон предложен в качестве основы для субстанции антимикробногодействия.3. Изучена стабильность горминона в щелочной среде и реакция гидролизаацетоксигорминонакакобоснованиеновогоспособаполучениясубстанции антимикробного действия из корней шалфея лекарственного.4. Оптимизированы параметры экстракции сырья на головной стадии и настадии жидкофазных экстракций в ходе технологического процесса.5.
Впервые выделены из корней шалфея лекарственного пентациклическиетритерпены: эускафиковая, 19-дезоксиэускафиковая кислоты и новоесоединение 2α, 21β, 22α-тригидроксиолеаноловая кислота и установлено еестроение.6. Отмеченоналичиеантимикробнойактивностиувыделенныхтритерпеновых кислот.7. Впервые в ходе изучения ройлеанонов с помощью масс-спектрометрииустановлена закономерность распада молекулы ройлеанона под действиемэлектронного спрея ESI.Теоретическая и практическая значимость исследования Результатыработы:1.
Разработанлабораторныйрегламентна производствосубстанцииантимикробного действия из корней шалфея лекарственного «Ройлевин»ЛР 04868244-01-2016.92. Разработанытехническиеусловиянастандартныйобразец7-гидроксиройлеанона (горминона) ТУ 9369-188-04868244-2015.3. Разработан проект фармакопейной статьи (проект ФС) на субстанциюантимикробного действия Ройлевин.4. Разработаныметодикиколичественногоопределения7-гидроксиройлеанона при получении субстанции Ройлевин из корнейшалфея лекарственного №М-04868244-52-2016.5.
Характеристики
Тип файла PDF
PDF-формат наиболее широко используется для просмотра любого типа файлов на любом устройстве. В него можно сохранить документ, таблицы, презентацию, текст, чертежи, вычисления, графики и всё остальное, что можно показать на экране любого устройства. Именно его лучше всего использовать для печати.
Например, если Вам нужно распечатать чертёж из автокада, Вы сохраните чертёж на флешку, но будет ли автокад в пункте печати? А если будет, то нужная версия с нужными библиотеками? Именно для этого и нужен формат PDF - в нём точно будет показано верно вне зависимости от того, в какой программе создали PDF-файл и есть ли нужная программа для его просмотра.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
