Диссертация (1141374), страница 15
Текст из файла (страница 15)
В качестве растворасравнения используют спирт этиловый 96%.Содержание горминона в процентах рассчитывают по формуле:112ХD 50 25%5 10 A11см, гдеD – оптическая плотность испытуемого раствора;1%А1см- удельный показатель поглощения горминона равен 395.5.2.2.3. Разработка методики анализа хлороформного извлечения изсырья10 мл хлороформного извлечения помещают в плоскодонную колбуобъемом 300 мл, к нему прибавляют 90 мл хлороформа и 75 мл 1% растворанатрия гидроксида, смесь помещают на качалку на 30 минут. Затем смесьпереносят в делительную воронку объемом 250 мл и взбалтывают 5-6 раз,оставляют до полного разделения слоев, после этого хлороформноеизвлечение отбрасывают, щелочной раствор переносят в химический стакани оставляют под тягой до полного удаления паров хлороформа периодическиперемешивая.Извлечениеподкисляют13мл5%кислотыхлористоводородной до значения рН=2 и оставляют на 10 минут дополучения хлопьевидного осадка.Полученный осадок отфильтровывают наворонке через обеззоленный бумажный фильтр (белая лента) диаметром 11см,промывают40млдистиллированнойводы.Промытыйосадокподсушивают на фильтре и обрабатывают 40 мл 96% спирта, собираяраствор в мерную колбу вместимостью 50 мл.
Объем доводят до метки этимже спиртом (раствор Б).Оптическую плотность раствора Б измеряют на спектрофотометре вкювете с толщиной слоя 10 мм при длине волны 273 нм. В качестве растворасравнения используют спирт этиловый 96%.Содержание горминона в процентах рассчитывают по формуле:ХD 50 25%10 1 A11cм, гдеD – оптическая плотность испытуемого раствора;1131%А1см- удельный показатель поглощения горминона равен 395.Выводы к Главе V1. Разработаны качественные реакции на подлинность Ройлевина.2. Для метода количественного определения содержания гогрминона вРойлевине и постадийного контроля технологического процессапредложен метод прямой спектрофотометрии.3.
Показано, что непосредственное измерение оптической плотности вспиртовом экстракте корней шалфея неправомерно, т.к. максимумпоглощения спиртового экстракта и Ройлевина различаются (λ max 278 и273 нм соответственно).4. Установлена природа вещества, влияющего на поглощение в УФспектрах спиртового экстракта корней шалфея.5. Для исключения влияния этого соединения на результаты измерения,аналитические процессы должны совпадать с технологическими, в ходекоторых паразамещенный фенол отделяется от Ройлевина.114ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВИзучениелитературы,посвященнойхимииройлеаноноввсовокупности с собственными данными, позволило нам сделать рядобобщений и выделить некоторые диагностические характеристики.Немногочисленная группа ройлеанонов (30 соединений) известна лишьс середины XX века.Из литературы можно заключить о генетической связиройлеанонов с производными карнозоловой кислоты, а также с таншинонамии изотаншинонами.
Первые (производные карнозоловой кислоты) можнорассматривать как предшественники ройлеанонов, которые, в свою очередь,служат предшественниками таншинонов.Суммируя спектральные данные 1Н ЯМР и13С ЯМР ройлеанонов, мыотметили ряд характеристических параметров. В 1Н ЯМР спектрах такиепараметры можно выделить не для всех ройлеанонов, а только длясоединений с незамещенным кольцом А и изопропильной группой при С-13:3,09-3,18 м.д., спт, 7 Гц, -СН–(СН3)2; 1,10-1,22 м.д., дд, 7 Гц, -СН–(СН3)2; ~4,7 м.д., м, Н при С(7)–ОН; ~ 5,7 м.д., м, Н при С(7)–ОАс; 7,24-7,25 м.д., с, ОН при С-12.В спектрах13С ЯМР можно выделить характеристическиесигналы для всех ройлеанонов.
Параметры сигналов С-атомов хиноновогоцикла, имеющие значение для решения структурных вопросов следующие:182-190 м.д., -С=О (12 и 14 положения); 150-151,9 м.д., С-12; 117-125 м.д., С13; 132-144 м.д., С-8; 144-155 м.д., С-9.Из доступных нам литературных источников известно, что массспектрометрияиспользуетсяпреимущественнодляопределениямолекулярной массы. Общие закономерности распада молекулы поддействиемэлектронногоудара,подобноретро-диеновомувпентациклических тритерпенах, не выявлены.
В нашей работе былиспользован сравнительно новый метод электронного спрея (авторы,разработавшие данный метод в 2002 году получили Нобелевскую премию).Более мягкая ионизация позволила выявить общие закономерности распадаройлеанонов: отрыв Н2О от протонированной молекулы, разрыв связи С(1)С(10) или С(4)-С(5) с последующим отщеплением алкильных групп.115Основываясьройлеаноновинаобщихэуглобалейструктурных(прочныеособенностяхмолекулвнутримолекулярныеН-связифенольного или енольного гидроксила с -С=О группой), общим механизмеантимикробного действия этих природных соединений, обусловленномподвижностью протона –ОН группы, мы сделали вывод о возможностиобщего технологического принципа получения препаратов антимикробногодействия на основе ройлеанонов и эуглобалей из корней шалфеялекарственного и эвкалипта прутовидного соответственно.
Сущность этогопринципа – переход в водную фазу бинарной системы фенолятов илиенолятов, образующихся под действием щелочи. Нейтральные веществаостаются в органической фазе. Это необходимое условие для новойтехнологии получения субстанции Ройлевин из шалфея лекарственного.Достаточнымегоделаетдоказаннаянамистабильностьгорминона(основного действующего компонента корней шалфея лекарственного) вщелочнойсредевтечениевремени,позволяющегоосуществитьтехнологическую операцию.
Гидролиз компонента корней шалфея, 7ацетоксигорминона, с переходом в горминон – положительный фактор, т.к.последний в 4 раза активнее исходного.В ходе изучения химического состава ройлеанонов корней шалфеялекарственного нами выделено 6 ройлеанонов, из которых ранее былиизвестны 3 соединения.Определение антимикробной активности каждоговещества позволило намвысказать некоторые соображения о связи строенияи биологической активности, выделить предпочтительные (горминон,таксохинон) и нежелательные (6,7-дегидроройлеанон) компоненты длясубстанции Ройлевин.Качество Ройлевина мы предложили определять по содержаниюгорминона.
Для этого разработан метод получения стандартного образца(СО)горминонаи значение его удельного показателя поглощения введено вформулу расчета. Это делает необязательным использование СО горминона вкаждом анализе. При анализе сырья, шрота, а также при постадийномконтроле технологического процесса исходили из того, что в корнях шалфея116и соответственно во всех экстрактах до воздействия щелочи присутствуетсумма горминона и 7-ацетоксигорминона, а также паразамещенный фенол,поглощающий в УФ-области практически при рабочей частоте определениягорминона (276-278 нм). Поэтому, мы применили метод пробоподготовкиоснованныйнатехнологииполученияРойлевина,чтоприводиткприсутствию в анализате одного горминона.Состав сопутствующих веществ в Ройлевине более однородный посравнению с «Донелвином».
В последнем – это стерины, замещенныефенолы, высокомолекулярные углеводороды с неразветвленной цепью(додекозан, пентакозан), в Ройлевине – пентациклические тритерпеновыекислоты.Суммируя литературные и собственные данные, можно отметить, что вшалфее присутствуют все типы терпеноидов, за исключением сескви- исестертерпенов, пока необнаруженных. В надземной части содержатся монои дитерпены, в корнях – ди- и тритерпены. Кроме ранее известныхолеаноловой и урсоловой кислот, нами выделены тритерпены α- и βамиринового ряда с последовательно возрастающей степенью окисленности(19-дезоксиэускафиковая, эускафиковая, 2α,21β,22α-тригидроксиолеаноловаякислоты).Биологическаяактивностьтритерпеновувеличиваетзначимостьсубстанции Ройлевин, так как антимикробная активность урсоловой кислоты,установленная в ходе наших исследований, а также японскими и китайскимиколлегами, сочетается с противогрибковой, противовоспалительной иантиноцептивной активностью эускафиковой кислоты.Таким образом, наши исследования в сочетании с литературнымиданными значительно расширяют представление о компонентах корнейшалфея лекарственного (ройлеаноны и тритерпеноиды).117ОБЩИЕ ВЫВОДЫ1.
Установлены морфолого-анатомические характеристики подлинностисырья–корнейшалфеялекарственного.Поданныммикроскопического исследования ройлеаноны локализованы в клеткахкоры и сердцевинных лучах.2. Впервые из корней шалфея лекарственного в дополнение к ройлеанону,горминонуиацетоксигорминону,выделены7-оксоройлеанон,таксохинон и 6,7-дегидроройлеанон. С помощью ВЭЖХ показананативность всех ройлеанонов. Отмечена связь между строениеммолекулы ройлеанонов и степенью их антимикробной активности.3. Разработана схема получения субстанции Ройлевин путем переводасуммы ройлеанонов в горминон щелочной обработкой хлороформногоэкстракта, подтвержденная стабильностью горминона в щелочнойсреде методом ЯМР-спектроскопии и отсутствием конкурирующихреакций в процессе щелочного гидролиза ацетоксигорминона.4.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
