Диссертация (1141371), страница 25

Просмтор этого файла доступен только зарегистрированным пользователям. Но у нас супер быстрая регистрация: достаточно только электронной почты!

Текст из файла (страница 25)

Каждая экспериментальная группа насчитывала по 14крыс (7 самцов и 7 самок). Всего в эксперименте использовано 42 крысы.Животные были получены из питомника лабораторных животных ЧП«Дали-2001» (г. Киев). В период карантина (2 недели) и во время экспериментаживотные находились в виварии при температуре воздуха 18-20 оС,относительной влажности 50-60 %, естественном световом режиме «день-ночь», встандартных пластиковых клетках, на стандартном пищевом рационе [12-14].При выборе доз руководствовались экспериментальными данными,полученными при изучении острой токсичности.Дозы исследуемого препарата составляли: 3,8 мг/кг и 7,7 мг/кг (для самцов)и 4,2 мг/кг и 8,4 мг/кг для самок по налоксона гидрохлориду (приблизительно 1/10и 1/5 от дозы, изученной в остром эксперименте).

Контролем служили интактныеживотные.Исследуемый препарат вводили назально один раз в сутки в течение 7суток.Оценку токсического воздействия исследуемого препарата на организмэкспериментальных животных проводили по следующим параметрам: клиническиенаблюдения, выживаемость животных, потребление пищи и воды, динамика массытела, гематологические и биохимические показатели крови и мочи, клиническийанализ мочи, электрофизиологическая активность миокарда, функциональноесостояние ЦНС. В конце эксперимента животных подвергали эвтаназии дляпроведения макроскопии и изучения морфоструктуры внутренних органов.Клинические наблюдения за животными проводили ежедневно в течениеэксперимента, регистрируя изменения в их общем состоянии, поведении,потреблении пищи и воды.

Регистрацию массы тела животных проводили доначала и в конце эксперимента.Оценку влияния препарата на состояние ЦНС проводили у крыс методом«открытого поля» в конце эксперимента [20].ЭКГ снимали в конце эксперимента во втором стандартном отведении(электрокардиограф ЭК1К-01). При расшифровке электрокардиограмм учитывалиследующие показатели: R-R – длительность полного сердечного цикла; длительностьинтервала P-Q, характеризующую время распространения возбуждения попредсердиям; длительность желудочкового комплекса QRS и электрической систолыжелудочков – интервала Q-T; вольтаж и направленность зубцов Р и Т, вольтаж зубцаR [21].В периферической крови, взятой у крыс из вены хвоста перед началом и вконце эксперимента, определяли содержание гемоглобина, количество иморфологию эритроцитов, содержание лейкоцитов, тромбоцитов, а такжепроцентное соотношение различных форм лейкоцитов (лейкоцитарную формулу).Гемоглобин определяли гемоглобинцианидным методом, подсчет эритроцитов,лейкоцитов, тромбоцитов и лейкоцитарной формулы проводили общепринятымиметодами [22].167Оценку влияния исследуемого препарата на функциональное состояниепечени и различные метаболические процессы проводили по ряду биохимическихпоказателей крови с использованием диагностических наборов «ФилиситДиагностика» (Украина).

Содержание общего белка в крови определялибиуретовым методом, показатель тимоловой пробы – по методу осадочных проб,содержание альбумина – по реакции с бромкрезоловым зеленым, активностьаланинаминотрансферазы и аспартатаминотрансферазы (АлАТ и АсАТ) –методом Райтмана-Френкеля, содержание глюкозы в крови – ферментативнымметодом, содержание мочевины в крови – диацетилмонооксимным методом,холестерин – по методу Илька [15]. Исследуемые показатели определяли в концеопыта.Для оценки влияния исследуемого препарата на функциональное состояниепочек крыс определяли спонтанный суточный диурез, удельную плотность мочи.По диагностическим полоскам «PHAN» (фирма PLIVA-Lachema a.s.,) определялирН мочи (тест основан на изменении цвета смешанного кислотно-основногоиндикатора в диапазоне рН 5-9), белок мочи (тест основан на изменении цветакислотно-основного индикатора под влиянием белков), содержание глюкозы вмоче (тест основан на ферментативной реакции), содержание мочевины в моче –диацетилмонооксимным методом [15].

Перечисленные показатели определяли вконце эксперимента.Все полученные данные обрабатывали методом вариационной статистики. Вданном отчете принят уровень значимости р  0,05. Для получения статистическихвыводов при сравнении выборок относительных переменных, после того какоднофакторный дисперсионный анализ (или критерий Крускала-Уоллиса дляданных, не подчиняющихся нормальному закону распределения) выявлял различиямежду экспериментальными группами, применяли критерий Стьюдента длямножественных сравнений или критерий Ньюмена-Кейлса [17, 18].2.2.

Результаты исследованийНаблюдения в течение эксперимента не выявили токсического влиянияисследуемого препарата на общее состояние и поведение экспериментальныхживотных. Визуальное наблюдение за животными экспериментальных групппоказало, что внешне они выглядели нормально, истощенных или ожиревшихживотных не выявлено. Область живота в объеме не увеличена. Шерсть мягкая,блестящая, плотно прилегает к поверхности тела, без признаков расчесов иопрелости. Внешний вид кожи ушной раковины и наружного слухового проходанормальный, выделение секрета и образование корок, а также подергивание ушейотсутствовали.

Слезотечение, выделение секрета из глаз не отмечено,конъюнктивы век и глаза влажные, помутнения роговицы не выявлены.Состояние носовых отверстий и слизистых оболочек ротовой полости неизменены, поверхность языка не обложена, без признаков десквамации и трещин.Наличия геморрагических везикул и сыпи на твердом небе не отмечалось.Потребление пищи и воды у животных опытных групп не имело отличий оттаковых у интактных крыс.168Анализ данных, приведенных в таблице 2.1, показал, что животные всехгрупп в течение эксперимента не имели достоверного изменения массы тела посравнению с исходными данными.Таблица 2.1Масса (г) тела крыспри субхроническом воздействии исследуемого препаратаПоказателиИнтактныйконтрольНалоксон,1 дозаНалоксон,2 дозаИсходные данные7 сут261,4 ± 3,40274,3 ± 2,97260,7 ± 3,85274,3 ± 6,94259,3 ± 4,42269,3 ± 7,19Исходные данные237,9 ± 3,76237,9 ± 3,067 сут245,7 ± 2,97244,3 ± 3,69Примечание: 1 – р  0,05 относительно исходных данных.237,1 ± 3,25241,4 ± 3,40СамцыСамкиРезультаты изучения функционального состояния центральной нервнойсистемы крыс (табл.

2.2) показали, что исследуемый препарат не влияет напоказатели, характеризующие горизонтальную и вертикальную двигательнуюактивность, а также эмоциональную реактивность крыс.Таблица 2.2Показатели ЦНС крыспосле субхронического воздействия исследуемого препаратаПоказателиКоличество:пересеченных квадратовстоекумыванийдефекацийКоличество:пересеченных квадратовcтоекумыванийдефекацийИнтактныйконтрольСамцыНалоксон,1 дозаНалоксон,2 доза26,0 ± 2,445,0 ± 1,910,9 ± 0,343,4 ± 1,00Самки23,9 ± 3,985,9 ± 1,930,6 ± 0,574,4 ± 0,9024,3 ± 3,574,1 ± 1,140,3 ± 0,184,7 ± 0,6132,8 ± 2,247,1 ± 1,900,6 ± 0,303,4 ± 1,0231,0 ± 4,325,3 ± 1,320,1 ± 0,144,3 ± 1,1930,7 ± 4,807,3 ± 1,110,7 ± 0,294,7 ± 0,71Анализ данных, характеризующих электрофизиологическую активностьмиокарда крыс (табл.

2.3), показал, что введение исследуемого препарата втечение 7 суток не вызывает изменений длительности интервалов PQ, QRS, QT иRR, а также не влияет на высоту зубцов P, R и T.Таблица 2.3Показатели ЭКГ крыспосле субхронического воздействия исследуемого препарата169ПоказателиИнтактныйконтрольСамцыНалоксон,1 дозаНалоксон,2 доза0,035 ± 0,0030,024 ± 0,0020,070 ± 0,0030,123 ± 0,0040,034 ± 0,0020,020 ± 0,0000,072 ± 0,0020,123 ± 0,0030,030 ± 0,0000,026 ± 0,0020,070 ± 0,0030,120 ± 0,0030,100 ± 0,0000,660 ± 0,0510,120 ± 0,012Самки0,110 ± 0,0100,690 ± 0,0870,160 ± 0,0190,100 ± 0,0000,520 ± 0,0820,120 ± 0,0120,036 ± 0,0020,026 ± 0,0020,070 ± 0,0030,120 ± 0,0030,032 ± 0,0020,026 ± 0,0020,068 ± 0,0020,118 ± 0,0020,032 ± 0,0020,020 ± 0,0000,066 ± 0,0040,119 ± 0,0040,110 ± 0,0100,630 ± 0,0440,160 ± 0,0190,110 ± 0,0100,620 ± 0,0750,170 ± 0,0120,100 ± 0,0000,640 ± 0,0480,150 ± 0,016Длительность интервалов, с: PQQRSQTRRВысота зубцов, mv:PRTДлительность интервалов, с: PQQRSQTRRВысота зубцов, mv:PRTДанные, характеризующие периферическую кровь, свидетельствуют, чтовведение исследуемого препарата в течение 7 суток не влияет на изучаемыегематологические показатели крови крыс: концентрация гемоглобина, количествоэритроцитов, лейкоцитов и тромбоцитов не отличались от аналогичныхпоказателей контрольной группы животных (табл.

2.4 и 2.5). К концуэксперимента у животных всех групп отмечено достоверное изменениеколичества эритроцитов по сравнению с исходными данными, однако оно невыходит за пределы физиологической нормы для крыс. В лейкоцитарной формулекрови крыс всех экспериментальных групп количество палочкоядерных исегментоядерных нейтрофилов, эозинофилов, моноцитов и лимфоцитовнаходилось в пределах физиологической нормы.Таблица 2.4Показатели гемограммы самцов крыспри субхроническом воздействии исследуемого препаратаПоказателиГемоглобин, г/лЭритроциты, 1012/лЛейкоциты, 109/лТромбоциты, 109/лЛейкограмма, %Нейтрофилы пал.Нейтрофилы сегм.ИнтактныйНалоксон,контроль1 дозаИсходные данные128,5 ± 2,66128,1 ± 2,685,65 ± 0,035,66 ± 0,0519,11 ± 0,9416,93 ± 1,10433,2 ± 16,61436,0 ± 11,090,3 ± 0,1812,7 ± 1,270,3 ± 0,1816,1 ± 2,26Налоксон,2 доза127,4 ± 1,795,67 ± 0,0319,06 ± 1,57431,2 ± 14,210,7 ± 0,3614,3 ± 1,30170ЭозинофилыМоноцитыЛимфоциты2,6 ± 0,430,8 ± 0,3483,6 ± 1,452,0 ± 0,490,7 ± 0,2980,9 ± 1,962,0 ± 0,380,6 ± 0,3082,4 ± 1,39130,0 ± 1,316,25 ± 0,04118,56 ± 0,85460,4 ± 12,18129,4 ± 1,586,30 ± 0,02117,20 ± 1,54453,2 ± 11,39130,4 ± 0,586,29 ± 0,04116,54 ± 1,10454,5 ± 12,060,6 ± 0,3013,4 ± 1,362,7 ± 0,840,7 ± 0,1882,6 ± 1,000,4 ± 0,2015,7 ± 1,842,4 ± 0,360,9 ± 0,2680,7 ± 2,150,3 ± 0,1816,9 ± 1,563,0 ± 0,760,4 ± 0,3079,4 ± 1,637 сутокГемоглобин, г/лЭритроциты, 1012/лЛейкоциты, 109/лТромбоциты, 109/лЛейкограмма, %Нейтрофилы пал.Нейтрофилы сегм.ЭозинофилыМоноцитыЛимфоцитыПримечание: 1 – р  0,05 относительно исходных данных.171Таблица 2.5Показатели гемограммы самок крыспри субхроническом воздействии исследуемого препаратаПоказателиГемоглобин, г/лЭритроциты, 1012/лЛейкоциты, 109/лТромбоциты, 109/лЛейкограмма, %Нейтрофилы пал.Нейтрофилы сегм.ЭозинофилыМоноцитыЛимфоцитыГемоглобин, г/лЭритроциты, 1012/лЛейкоциты, 109/лТромбоциты, 109/лЛейкограмма, %Нейтрофилы пал.Нейтрофилы сегм.ЭозинофилыМоноцитыЛимфоцитыИнтактныйНалоксон,контроль1 дозаИсходные данные126,6 ± 1,36126,5 ± 3,175,69 ± 0,035,71 ± 0,0115,37 ± 0,7515,74 ± 1,01437,6 ± 15,42430,5 ± 13,070,7 ± 0,3614,3 ± 1,691,86 ± 0,460,86 ± 0,3482,3 ± 1,857 суток129,6 ± 1,406,27 ± 0,04114,74 ± 1,18455,3 ± 15,200,3 ± 0,1614,3 ± 1,572,3 ± 0,420,9 ± 0,2682,3 ± 1,55Налоксон,2 доза126,9 ± 3,105,73 ± 0,0215,94 ± 1,06435,3 ± 11,250,60 ± 0,3015,4 ± 1,022,14 ± 0,671,14 ± 0,6380,7 ± 0,940,7 ± 0,3015,9 ± 1,751,4 ± 0,431,0 ± 0,3181,1 ± 1,91129,9 ± 0,586,34 ± 0,03115,11 ± 1,77461,6 ± 10,89130,0 ± 0,616,32 ± 0,05113,57 ± 0,83462,9 ± 13,240,1 ± 0,1414,3 ± 1,442,6 ± 0,690,4 ± 0,3082,6 ± 1,430,4 ± 0,3017,1 ± 1,452,4 ± 0,811,0 ± 0,2279,0 ± 1,62Примечание: 1 – р0,05 относительно исходных данных.Результаты биохимических исследований (табл.

Характеристики

Список файлов диссертации