Диссертация (1141348), страница 9
Текст из файла (страница 9)
Также рассчитывается фактор матрицы, нормализованный повнутреннему стандарту, путём деления рассчитанного значения фактора матрицыаналита на значение фактора матрицы внутреннего стандарта. Для определенияфактора матрицы используют образцы контроля с концентрациями аналита науровне ККБ и ККГ (в соответствии с Таблицей 6а (моча) и 6б (плазма крови)).Анализ проводится в 6 сериях для каждого значения концентрации. Результатысоответствуют критериям приемлемости. Результаты оценки эффекта матрицыпредставлены в Таблице 7а (моча) и 7б (плазма крови).Для расчёта показателей извлечения аналитов из мочи были определеныотношенияплощадейхроматографическихпиковвобразцахконтроля,полученных путем экстрагирования из образцов контроля качества ККБ и ККГ сплощадями хроматографических пиков из образцов без проведения экстракции.Анализ проводится в 6 сериях для каждого значения концентрации.
Результатысоответствуют критериям приемлемости. Результаты оценки степени извлеченияпредставлены в Таблице 8а (моча) и 8б (плазма крови).Критерийнормализованногоприемлемости:коэффициентпостандартувнутреннемувариациифактораматрицызначенийдолженсоставлять не более 15%; степень извлечения анализируемого вещества не должнапревышать 100% (без учёта погрешности); коэффициент вариации значенийстепени извлечения исследуемых веществ должен составлять не более 15%.76Таблица 6а – Содержание определяемых веществ в образцах контроля качества (моча)Концентрацияаналита, нг/млОбразец контроля качестваКофеинПараксантинЛозартанE-3174Кортизол6-β-OH-кортизолПинолинМетаболит пинККА1010101010100,50,5ККБ3030303030301,51,5ККВ25002500250025002500250055ККГ3750375037503750375037507,57,5Таблица 6б – Содержание определяемых веществ в образцах контроля качества (плазма крови)Концентрацияаналита, нг/млОбразец контроля качестваКофеинПараксантинЛозартанE-3174Кортизол6-β-OH-кортизолПинолинМетаболит пинККАККБККВККГ5050505050500,250,251501501501501501500,750,755000500050005000500050001,501,507500750075007500750075002,252,2577Таблица 7а – Результаты оценки эффекта матрицы (моча)Кортизол6-βOHкортизолПинолин6-гидрокси1,2,3,4тетрагидроβ-карболин2,766,8711,039,846,734,7512,1510,209,3310,45Пинолин6-гидрокси1,2,3,4тетрагидроβ-карболинКофеинПараксантинЛозартанE-3174ККБ5,127,6510,12ККГ4,9811,8711,23АналитКоэффициент вариациифактора,нормализованного пофакторуматрицывнутреннегостандарта, %Таблица 7б – Результаты оценки эффекта матрицы (плазма крови)КофеинПараксантинЛозартанE-3174Кортизол6-βOHкортизолККБ4,345,185,933,194,877,687,116,96ККГ3,563,592,752,192,052,313,855,19АналитКоэффициент вариациифактора,нормализованного пофакторуматрицывнутреннегостандарта, %Таблица 8а – Результаты оценки степени извлечения (моча)АналитКофеинПараксантинЛозартанE3174Кортизол6-β-OHкортизолПинолинСтепеньККБ81,5185,5687,5787,5586,4784,8284,866гидрокси1,2,3,4тетрагидроβ-карболин88,27извлечения, %ККГ90,0283,1383,7790,2582,8584,8085,6784,55КоэффициентККБ8,588,4311,748,898,4711,188,538,64вариации, %ККГ10,228,318,389,0312,858,486,979,1178Таблица 8б – Результаты оценки степени извлечения (плазма крови)АналитКофеинПараксантинЛозартанE3174Кортизол6-β-OHкортизолПинолинСтепеньККБ88,1585,4683,2778,8883,2574,9380,886гидрокси1,2,3,4тетрагидроβ-карболин73,60извлечения, %ККГККБ85,4983,7981,2578,9079,6074,7083,0776,42Коэффициент8,354,537,815,718,215,044,976,13вариации, %ККГ4,872,384,402,525,845,373,282,123.4.4.Точность и прецизионностьТочность и прецизионность методов внутри серии определялась порезультатам анализов образцов контроля качества ККА; ККБ; ККВ; ККГ в составеодного аналитического цикла.
Анализ проводится в 5 сериях для каждогозначения концентрации. Определение значений концентраций образцов контроляосуществлялсяпоформуле,соответствущейкалибровочнойкривойдляаналитического цикла. Полученные результаты приведены в Таблице 9а и 9б исоответствуют критериям приемлемости.Точность и прецизионность разработанных методик между аналитическимициклами определялась по результатам анализа образцов контроля качества ККА;ККБ; ККВ; ККГ, произведенного в течение трех аналитических циклов однимисследователем. Анализ проводится в 5 сериях для каждого значенияконцентрации.Определениезначенийосуществлялсяпосоответствущейформуле,концентрацийобразцовкалибровочнойконтролякривойдлясоответствующего аналитического цикла.
Полученные результаты приведены вТаблице 9а и 9б и удовлетворяют критериям приемлемости.Критерии приемлемости:•Прецизионность:.•Точность: среднее значение концентраций для образцовконтроля должно быть в пределах 15% от соответствующеготеоретического значения (для НПКО – в пределах 20%).79Таблица 9а – Результаты оценки точности и прецизионности (моча)АналитКофеинПараксантинЛозартанE-3174Кортизол6-β-OH-кортизолПинолин6-гидрокси-1,2,3,4тетрагидро-βкарболинОбразецконтролякачестваВнутри серииМежду сериямиRSD,%E,%RSD,%E,%ККА8,1217,329,8714,12ККБ5,4310,018,1211,36ККВ4,876,988,548,95ККГ3,417,145,313,12ККА6,4311,525,819,56ККБ7,3214,915,128,78ККВ5,128,914,955,98ККГ5,016,852,081,80ККА7,2814,427,8411,84ККБ6,3812,466,6210,07ККВ5,007,956,757,47ККГ4,217,003,702,46ККА7,7011,878,8612,98ККБ5,9011,247,3710,72ККВ4,937,467,648,21ККГ3,817,074,502,79ККА7,0611,707,3311,27ККБ6,6113,076,259,75ККВ5,038,196,307,09ККГ4,416,963,292,30ККА5,659,967,139,14ККБ4,407,515,625,13ККВ5,649,355,516,87ККГ7,1512,477,5511,36ККА6,1311,526,699,44ККБ4,717,855,966,11ККВ5,028,154,404,58ККГ5,469,716,838,90ККА4,677,215,475,25ККБ4,738,515,825,96ККВ5,739,606,488,20ККГ6,1211,215,888,3180Таблица 9а – Результаты оценки точности и прецизионности (плазма крови)АналитКофеинПараксантинЛозартанE-3174Кортизол6-β-OH-кортизолПинолин6-гидрокси-1,2,3,4тетрагидро-βкарболинОбразецконтролякачестваВнутри серииМежду сериямиRSD,%E,%RSD,%E,%ККА3,99-10,405,88-9,00ККБ1,64-7,202,99-7,80ККВ4,58-6,164,92-7,35ККГ4,64-9,104,01-8,24ККА5,06-5,606,19-7,60ККБ6,37-10,005,28-11,27ККВ1,30-2,153,52-3,54ККГ4,38-7,344,69-6,69ККА5,73-9,606,74-12,20ККБ3,70-10,004,19-9,93ККВ3,63-4,904,99-6,87ККГ5,98-7,794,90-7,62ККА5,54-8,007,13-7,40ККБ6,51-7,075,90-7,13ККВ5,95-11,326,45-6,93ККГ5,46-4,804,90-7,01ККА6,34-14,806,48-12,60ККБ6,82-5,875,89-5,33ККВ5,41-11,104,08-11,41ККГ3,42-8,544,76-8,47ККА5,08-12,005,11-11,40ККБ3,72-9,074,49-8,40ККВ6,15-6,234,65-7,73ККГ2,76-4,983,33-5,97ККА6,49-11,206,92-8,60ККБ2,90-11,606,30-8,13ККВ4,18-5,903,79-6,71ККГ2,93-3,873,57-5,28ККА8,67-12,806,96-13,80ККБ5,24-9,873,72-9,27ККВ4,30-5,835,10-8,06ККГ5,52-8,034,45-7,59813.4.5.Нижний предел количественного определенияЗначение нПКО методики проводится с учётом данных точности,прецизионности и линейности.
За нПКО методики принималась минимальнаяконцентрация аналита в плазме, для которой возможно определение аналитов созначениями среднего значения концентраций и относительного стандартногоотклонения не более 20 % в диапазоне линейной зависимости.3.4.6.Перенос пробыДля определения наличия переноса пробы в хроматографической системепроизводят ввод образца контроля качества ККГ с последующим вводомхолостого образца биожидкости.
По результатам анализа холостых образцовперенос аналитов внутри хроматографической системы отсутствовал ввидуотсутствия соответствующих характеристических пиков (площадь пика ссоответствующим временем удерживания составляла не более 20% от площадипика на уровне нПКО).3.4.7.СтабильностьСтабильность в плазме крови добровольцев определялась с использованиемобразцовконтроляККБиККГ,проведеныследующиеисследованиястабильности:•краткосрочная стабильность аналитов в матрице (24 ч) при комнатнойтемпературе без пробоподготовки•краткосрочная стабильность аналитов в матрице (24 ч) при комнатнойтемпературе после пробоподготовки•стабильность в процесе замораживания/ оттаивания (замораживание вморозильной камере и размораживание при комнатной температуре)•краткосрочная стабильность аналитов после пробоподготовки втермостате автосемплера•долгосрочная стабильность (в условиях заморозки в течение 30 дней)Затем проводился анализ образцов совместно с вновь приготовленнымиобразцами в составе одной аналитической серии.
Определялось отношение82значений концентрации образцов после хранения со средними значениямиконцентраций вновь приготовленных образцов контроля качества. Расчёт модуляразницы проводился по соответствующей формуле:(1),где С2 – среднее значение концентрации в конце исследования, С1 – среднеезначение концентрации в начале исследования.Результаты определения стабильности соответствуют критериюприемлемости.
Результаты приведены в Таблицах 10а и 10б.Критерий приемлемости: модуль разницы не должен превышать 15%.83Таблица 10а – Результаты оценки стабильности (моча)Нормализованный модуль разницы, %Аналитхранение прикомнатнойтемпературе идневном свете безпробоподготовки втечение 24 часовхранение прикомнатнойтемпературе идневном свете послепробоподготовки втечение 24 часовисследованиестабильности послезаморозки/разморозкиисследованиестабильности послепробоподготовки(хранение втермостатеавтосамплера притемпературе 4 °С втечение 24 часов)исследованиестабильности послехранения в условияхзаморозки в течениемесяцаКофеин ПараксантинЛозартанE3174Кортизол6-β-OHкортизолПинолин6гидрокси1,2,3,4тетрагидроβ-карболинККБ5,346,033,869,347,319,3912,3710,34ККГ4,985,918,046,394,857,918,018,78ККБ5,165,975,957,876,088,6510,199,56ККГ5,075,947,007,135,478,289,109,17ККБ6,436,825,037,377,748,7310,5810,34ККГ5,636,587,337,047,99,228,798,78ККБ10,1911,438,909,8713,5512,8110,438,94ККГ7,9611,7310,238,019,5512,1411,8710,31ККБ9,7411,049,889,548,719,1210,149,63ККГ8,8511,3910,068,789,1310,6311,019,9784Таблица 10б – Результаты оценки стабильности (плазма крови)Нормализованный модуль разницы, %Аналитхранение прикомнатнойтемпературе идневном свете безпробоподготовки втечение 24 часовхранение прикомнатнойтемпературе идневном свете послепробоподготовки втечение 24 часовисследованиестабильности послезаморозки/разморозкиисследованиестабильности послепробоподготовки(хранение втермостатеавтосамплера притемпературе 4 °С втечение 24 часов)исследованиестабильности послехранения в условияхзаморозки в течениемесяцаКофеин ПараксантинЛозартанE3174Кортизол6-β-OHкортизолПинолин6гидрокси1,2,3,4тетрагидроβ-карболинККБ6,218,378,267,769,733,487,563,71ККГ3,863,253,454,274,304,083,514,34ККБ10,8011,2111,8513,2810,5611,4712,3410,24ККГ8,509,509,6610,358,849,7510,5310,80ККБ13,438,8311,2613,3913,3211,2613,8211,23ККГ7,516,857,027,276,326,846,806,29ККБ8,499,7810,0410,4910,147,489,976,98ККГ6,176,376,547,296,556,917,017,57ККБ8,499,7810,0410,4910,147,489,976,98ККГ6,176,376,547,296,556,917,017,57853.5.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
