Диссертация (1141348), страница 12
Текст из файла (страница 12)
В литературе описаны различные исследования,оценивающие влияние различных заболеваний на активность системыметаболизма. В частности, изучалось влияние на экспрессию генов CYP прианафилактической реакции у мышей после введения специфическихлипополисахаридов, приводящих к анафилаксии [121]. В результате исследованиябыло установлено, что при анафилактическом шоке резко снижается активностьферментов CYP1A2, CYP2C29 и CYP3A11. Активность ферментов снизилась какзасчет количественного фактора, так и качественного. Установлено, чтоактивность ферментов CYP зависит от провоспалительных цитокинов,выделяющихся в системный кровоток при различных воспалительных реакциях.Разработанный«коктейльный»методопределенияактивностиизоферментов CYP методом фенотипирования был апробирован с цельювыявления зависимости между риском возникновения лекарственной аллергии иизмененной активностью метаболизма как последствие наличия хроническойсердечной недостаточности. В исследовании принимало участие 60 человек,мужчины и женщины от 15 до 85 лет, поделенных на 3 группы по 20 человек.
Впервую группу входили пациенты, у которых возник эпизод лекарственнойаллергииналекарственныефармакологическимгруппам.вещества,Вовторуюотносящихсягруппуквходилиразличнымпациентыслекарственной аллергией на нестероидные противовоспалительные средства,приёмкоторыхбылназначендлятерапиихроническойсердечной97недостаточности. Третья группа – контрольная, в которую входили пациенты безэпизодов хронической аллергии в анамнезе.
У пациентов первой группыопределялась активность изоферментов CYP3A4 и CYP2D6, у пациентов второй итретьей группы – CYP3A4, CYP2D6 и CYP2C9. Для определения активностиCYP2C9 пациентам однократно назначался лозартан в дозе 25 мг. Определениеактивности CYP3A4 и CYP2D6 проводилось по эндогенным субстратамкортизолу и пинолину в соответствии с разрабоатнной методикой.В результате исследования были получены значения метаболическихотношений, представленные в Таблице 12.Таблица 12 – Результаты исследования активности метаболизма№№Значение метаболического отношенияCYP3A4CYP2D6Группа №116,231,8824,011,2534,510,5345,650,7453,481,7863,711,6873,411,3285,290,5395,581,20105,311,50114,561,06122,661,93136,370,83146,210,59155,730,92CYP2C998164,340,76176,191,95187,370,87194,641,79205,061,76Ср. Знач.5,011,24---Станд. откл.1,200,51---Группа №2116,162,001,26226,880,402,51318,580,982,54417,151,252,6658,361,393,05612,031,651,53727,240,502,45813,991,912,39920,860,932,50106,971,251,251128,840,561,501213,930,891,831318,011,842,801417,542,262,83153,420,912,841612,411,192,54178,911,712,271830,241,021,121922,501,991,122012,452,051,80Ср.
Знач.16,82*1,332,1499Станд. откл.7,530,560,64Группа №314,991,430,9926,790,602,2635,171,241,4840,513,352,4157,442,622,3964,950,961,3573,612,263,0984,722,523,1390,632,771,23105,390,462,63113,992,243,80125,091,131,92130,221,512,98147,102,401,53158,271,020,50163,300,141,99173,232,953,10185,201,240,77192,762,583,44201,521,462,08Ср. Знач.4,241,742,15Станд. откл.2,310,910,93* - статистически значимое различие от значения у контрольной группы №3(p<0,05)Среднее значение метаболического отношения для изофермента CYP3A4составило 5,01±1,20 для группы №1, 16,82±7,53 для группы №2 и 4,24±2,31 для100контрольной группы.
Среднее значение метаболического отношения дляизофермента CYP2D6 составило 1,24±0,51 для группы №1, 1,33±0,56 для группы№2 и 1,74±0,91 для контрольной группы. Среднее значение метаболическогоотношения для изофермента CYP2C9 составило 2,14±0,64 для группы №2 и2,15±0,93 для контрольной группы.Для выявления статистически значимых различий значений метаболическихотношений между 3мя группами был проведен t-тест для независимых выборок спомощью программного обеспечения IBM SPSS 27.0.0.0. Результаты t-теста длянезависимых выборок представлены в Таблице 13.Таблица 13 – Результаты t-теста для определения статистически значимыхразличий между значениями метаболических отношенийСравниваемые группыЗначимость p полученного t-критерия(при а=0,95)CYP3A4CYP2D6CYP2C9Группа №1 – контрольная группа0,3670,210---Группа №2 – контрольная группа0,0000,3300,976Группа №1 – Группа №20,0000,728---Из полученных данных видно, что с 95% вероятностью имеютсястатистические различия в активности изофермента CYP3A4 между 1-ой группойи контрольной группой, а также 1-ой группой и 2-ой группой.
Активность жедругих изоферментов статистически не отличается. Таким образом, хроническаясердечная недостаточность как патология может оказывать влияние наметаболическуюактивностьизоферментаCYP3A4.Данныйизоферментучаствует в биотрансформации порядка 70% известных лекарственных веществ, втом числе и нестероидные противовоспалительные средства. Следовательно, нафоне измененной активности изофермента CYP3A4 ввиду наличия такогосопутствующего заболевания, как хроническая сердечная недостаточность, моглапроизойти вторичная реакция организма на принимаемые препараты в виде101лекарственной аллергии. Отсутствие статистически значимых различий вактивности изоферментов между 1-ой и контрольной группами говорит о том, чтоизмененная активность ферментов метаболизма – далеко не единственныйфактор, вызывающий лекарственную аллергию. К тому же, в виду включения в 1ую группу пациентов с различными заболеваниями, поражающими различныесистемы органов, так же подтверждается тот факт, что не каждое заболеваниевлияет на метаболическую активность организма.
Для более детальногоисследования данного вопроса следует увеличить выборку испытуемых,имеющих в анамнезе лекарственную аллергию, а также разделять их по группам взависимости от заболевания и пораженной системы органов, с целью полученияболее информативных данных о влиянии соответствующих заболеваний наактивность метаболизма человека.102ОБЩИЕ ВЫВОДЫ1. Проведено изучение описанных в литературе методик определенияактивности изоферментов CYP методом фенотипирования in vivo, в томчисле и «коктейльные» методы. На основании изученных данных выбраныизоферментыCYP,представляющиенаибольшийинтерескакметаболизирущие наибольшее количество ксенобиотиков по сравнению состальными – CYP1A2, CYP2C9, CYP3A4 и CYP2D6.
Выбраны субстратымаркеры и их метаболиты для определения активности указанныхизоферментов - кофеин/параксантин (CYP1A2), лозартан/Е-3174 (CYP2C9),кортизол/6-β-гидроксикортизол (CYP3A4) и пинолин/6-гидрокси-1,2,3,4тетрагидро-β-карболин (CYP2D6). С целью повышения эффективности ибезопасности методик, для изоферментов CYP3A4 и CYP2D6 быливыбраны эндогенные субстраты, а для CYP1A2 и CYP2C9, ввидуневозможности использования эндогенных субстратов, были выбранылекарственные средства с низким риском возникновения нежелательныхлекарственных явлений.2. Разработаны методики пробоподготовки образцов плазмы крови и мочи.Для пробоподготовки плазмы крови использовался метод твердофазнойэкстракции, для мочи - метод жидкостной экстракции.
Степень извлечениякофеина,параксантина,лозартана,E-3174,кортизола,6-β-гидроксикортизола, пинолина и 6-гидрокси-1,2,3,4,-тетрагидро-β-карболинаиз биожидкостей составляет 81-91% для мочи 73-88% для плазмы крови,что позволяет использовать разработанные методики для последующегосовместного количественного определения аналитов в одной пробе.1033. Оптимизированыхроматографическиеусловиядлясовместногоколичественного определения кофеина, параксантина, лозартана, E-3174,кортизола,6-β-гидроксикортизола,тетрагидро-β-карболина.пинолинаРазработанныеи6-гидрокси-1,2,3,4,-методикиколичественногоопределения исследуемых веществ методом ВЭЖХ-МС/МС позволяютопределить концентрации каждого из аналитов по данным одного анализа.4.
Проведенавалидацияразработанныхметодикпопараметрам:селективность, линейность, точность и прецизионность, эффект матрицы,степень извлечения, предел количественного определения, перенос пробы,стабильность.Разработанныеметодикиудовлетворяливсемвалидационным критериям приемлимости.5. Разработанные «коктейльные» методы использовались для определенияактивности изоферментов CYP1A2, CYP2C9, CYP3A4 и CYP2D6 вразличных исследованиях. Активность изофермента CYP3A4 определяласьу больных гормонзависимой бронхиальной астмой по метаболическомуиндексу в плазме крови.
Активность изоферментов CYP3A4, CYP2C9 иCYP2D6 по моче выявления зависимости между риском возникновениялекарственной аллергии и измененной активностью метаболизма какпоследствиеналичияхроническойсердечнойнедостаточности.Определялась активность CYP1A2, CYP2C9, CYP3A4, CYP2D6 у пациентовпосле трансплантации печени. Данные исследования показали, чторазработанные методики пригодны для определения активности указанныхизоферментов CYP в практике специалистов лабораторий клиническойфармакологии.Практические рекомендацииРазработанные методики целесообразно использовать в лабораторияхклиническойфармакологии,фармакокинетикиприопределенииактивности основных изоферментов цитохрома P450 для рационализациифармакотерапии и минимизации риска возникновения нежелательных104лекарственных явлений.Перспективы дальнейшей разработки темыВ последующих исследованиях возможно включение в «коктейль»дополнительных субстратов-маркеров других изоферментов CYP с цельюопределения метаболической активности большего числа изоферментовцитохрома P450 в одной пробе.105СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ ИСТОЧНИКОВ1Кукес В.Г.
Метаболизм лекарственных средств: клинико-фармакологические аспекты. М.: Издательство «Реафарм», 2004.144 с.2Клиническая фармакогенетика /Сычёв Д.А. [и др.][под ред. В.Г.Кукеса, Н.П. Бочкова] М.: ГЭОТАР, 2007. 248с.3Virginie Y Martiny, Maria Miteva. Advances in MolecularModeling of Human Cytochrome P450 Polymorphism // Journal of MolecularBiology. 2013. Vol.7.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
