Диссертация (1140658)

Просмтор этого файла доступен только зарегистрированным пользователям. Но у нас супер быстрая регистрация: достаточно только электронной почты!

Текст из файла

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ АВТОНОМНОЕОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ ВЫСШЕГО ОБРАЗОВАНИЯ«ПЕРВЫЙ МОСКОВСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙУНИВЕРСИТЕТ ИМЕНИ И.М. СЕЧЕНОВА» МИНИСТЕРСТВАЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИНа правах рукописиГрекова Екатерина ВладимировнаОПТИМИЗАЦИЯ МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКОГО МЕТОДАДИАГНОСТИКИ И ТЕРАПИИ ГРИБОВИДНОГО МИКОЗА14.01.10 – Кожные и венерические болезниДИССЕРТАЦИЯНа соискание ученой степени кандидата медицинских наукНаучный руководитель:Доктор медицинских наук, профессорОлисова Ольга ЮрьевнаНаучный консультант:Доктор биологических наук, профессорЗалетаев Дмитрий ВладимировичМОСКВА-20192ОГЛАВЛЕНИЕВВЕДЕНИЕ ....................................................................................................... 4ГЛАВА 1.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ ................................................................ 121.1. Эпидемиология и этиопатогенез грибовидного микоза ...................... 121.2. Современные возможности диагностики грибовидного микоза ....... 151.2.1. Клинико-анамнестический метод диагностики ................................. 191.2.1.1. Подтипы и атипичные клинико-морфологические формыгрибовидного микоза ...................................................................................... 241.2.2. Гистологический метод диагностики .................................................

261.2.3. Иммуногистохимический метод диагностики ................................... 271.2.4. Молекулярно-генетический метод определения реаранжировки генаТ-клеточного рецептора .................................................................................

301.2.4.1. Молекулярно-генетические механизмы патогенеза идиагностические маркеры грибовидного микоза ........................................ 321.3. Дифференциально-диагностические признаки грибовидного микоза ибляшечного парапсориаза .............................................................................. 351.4. Методы терапии грибовидного микоза ................................................. 38ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ ......................

442.1 Общая характеристика больных.............................................................. 442.2. Критерии включения, невключения и исключения из исследования 462.3. Методы исследования ............................................................................. 472.3.1. Оценка тяжести кожного поражения с учетом модифицированнойшкалы (modified Severity Weighted Assessment Tool -- mSWAT) .............. 482.3.2. Гистологическое исследование биоптатов пораженной кожи .........

482.3.3. Иммунофенотипирование .................................................................... 482.3.4. Определение реаранжировки по генам γ-цепи Т-клеточногорецептора ......................................................................................................... 502.3.5. Определение уровня экспрессии генетических маркеров (FOXP3,STAT4, IL-12B) ...............................................................................................

512.3.5.1. Выделение РНК .................................................................................. 522.3.5.2. Cинтeз кДНК ...................................................................................... 532.3.5.3. ПЦР в режиме реального времени (Real time-ПЦР) ...................... 5332.4. Схема терапии больных грибовидным микозом с применением ПУВАи интерферона-α .............................................................................................. 562.5. Методы статистической обработки данных.......................................... 59ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИCCЛЕДОВАНИЙ ............ 613.1. Результаты клинико-анамнестического исследования ........................

613.2. Результаты гистологического исследования ........................................ 723.3. Результаты иммуногистохимического исследования .......................... 803.4. Результаты молекулярно-генетического исследования ....................... 863.5. Клинические наблюдения ....................................................................... 90Клиническое наблюдение №1 .......................................................................

90Клиническое наблюдение №2 ....................................................................... 93Клиническое наблюдение №3 ....................................................................... 953.6. Результаты экспрессии генетических маркеров ................................... 993.7. Оценка результатов комбинации ПУВА-терапии и интерферона-α посравнению с монотерапией ПУВА у больных грибовидным микозом... 1053.7.1.

Побочные эффекты от лечения ......................................................... 1123.7.2. Отдаленные результаты проводимой терапии................................. 113ГЛАВА 4. ЗАКЛЮЧЕНИЕ .......................................................................... 117ВЫВОДЫ ....................................................................................................... 122ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ ...................................................... 123СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ .......................................................................... 124СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ ............................................................................

126ПРИЛОЖЕНИЕ А. ........................................................................................ 148ПРИЛОЖЕНИЕ Б. ........................................................................................ 1494ВВЕДЕНИЕАктуальность проблемыТ-клеточные лимфомы кожи (ТКЛК) относят к гетерогенной группелимфопролиферативныхзаболеваний(ЛПЗ),характеризующейсяформированием инфильтрата из атипичных Т-лимфоцитов в эпидермисе,дермеигиподермесвозможностьювторичноговнекожногораспространения (лимфатические узлы, кровь, селезенка, легкие, печень)[23, 26, 160].В группе больных ТКЛК подавляющее большинство (80%) составляютбольные грибовидным микозом (ГМ) [29, 74].Диагноз ГМ устанавливается на основании комплексной оценкиклинико-анамнестических данных, гистологического (часто неоднократного),иммунофенотипического исследования опухолевых клеток и молекулярногенетического (наличие клональности по генам γ- или β-цепей Т-клеточногорецептора (ТКР) [1, 3, 40, 136].На ранних стадиях ГМ дифференциальная диагностика достаточносложнаввидуклиническогосходствасдоброкачественнымивоспалительными дерматозами [4, 34, 87, 146].

Выявлено, что средний срокдо установления диагноза, даже у больных классической формой ГМ,составляет около 5 лет, и может значительно удлиняться при другихвариантах его течения [26, 161].Наиболеесложнымвдифференциальнойдиагностикеявляетсябляшечный парапсориаз (БП), особенно крупнобляшечный вариант (КБП)[3, 12].По данным Wu J. и соавт. [163] трансформация КБП в ГМ отмечается в10-40% случаев, хотя ряд авторов считает КБП изначально ТКЛК смедленнойопухолевоймелкобляшечногопрогрессией[19, 44,54,144].Поповодупарапсориаза (МБП) абсолютное большинство ученыхсчитает, что он является хроническим доброкачественным воспалительным5дерматозом, но существует мнение, что он также может рассматриваться какабортивная форма ТКЛК или начальная стадия ГМ [72, 104].Достоверность диагноза ГМ, подтвержденного только клиническими,гистологическими и иммуногистохимическими признаками, составляет 5075% [5, 67].

Наиболее достоверным диагностическим методом является ПЦРисследование для идентификации реаранжировки гена γ-цепи Т-клеточногорецептора (ТКР), но он не может быть универсальным из-за невысокойспецифичности в начальных стадиях ГМ, а также наличия «клональныхдерматозов».МоноклональностьТ-лимфоцитовинфильтратаявляетсястабильным признаком только в опухолевой стадии ГМ [4, 48].Молекулярно-генетические исследования, проведенные в последниегоды, убедительно доказывают роль генетических факторов в инициациизлокачественного процесса и развития опухоли.Активность сигнального пути Jak-3/STAT препятствует развитиюТКЛК через стимуляцию синтеза IL-5, IL-10, IL-12, IL-17A и IL-17F,регулирование факторов ангиогенеза [133, 106, 111].

Имеются сведения одисрегуляции сигнального пути и интерлейкиннезависимой пролиферциизлокачественных Т-клеток при ГМ, т.е. в опухолевых клетках наблюдаетсяабберантная активация белков Jak и сигнальных систем STAT [115, 129].Такжевсебольшеемалигнизированныхокружающиемакрофаги),лимфоцитовопухольвлияютзначение[14,(Т-регуляторныенаразвитиепридается65].микроокружениюСчитается,клетки,чтоклетки,дендритныеклетки,неконтролируемойпролиферацииопухолевых клеток и способствуют их уклонению от иммунного надзора[75, 94].СогласноизложеннымвышеданнымирекомендациямМеждународного общества по лимфомам кожи (ISCL), Европейскойорганизации изучения и лечения рака (EORTC) [136] поиск и изучениеновых, более информативных и специфичных генетических маркеров дляранней диагностики ГМ является актуальной научной задачей.6В последние годы достигнут прогресс в терапии ГМ, однако лечениебольных до сих пор представляет значительные трудности. В настоящеевремя для терапии ГМ применяются препараты первой и второй линии,включаятопическиеиммунотерапиюкортикостероиды,(интерферонфото-ИФН)-иилучевуютерапию,ретиноиды,атакжехимиотерапевтические препараты (вориностат, хлорамбуцил, доксорубицин,гемцитабин) [40, 136].

Однако данные методы терапии оказываются илималоэффективными, или дают кратковременный эффект.Фотохимиотерапия (ПУВА) для лечения больных ГМ применяется с1970 года [34, 159], однако имеется ограниченное число работ, посвященныхданной проблеме [85, 91, 137, 141, 158]. Также имеются единичныеисследования,атакжеописаниесериислучаевоположительномтерапевтическом эффекте ПУВА-терапии и ИФН-α у больных ГМ, главнымобразом на ранних стадиях заболевания [109, 76, 151, 142, 132].

Однако, досих пор не разработана методика и эффективная схема комбинированногометода терапии больных ГМ.Такимобразом,значительноеснижениекачестважизни,прогрессирующее течение с частыми рецидивами и неблагоприятнымпрогнозом,отсутствиенеоднозначностьвобщепринятыхподходахкведениюдиагностическихбольныхикритериев,недостаточнаяэффективность терапии обусловливают необходимость усовершенствованияуже существующих и разработки более эффективных методов лечения.Одним из перспективных направлений современной дерматовенерологииявляется персонализация терапии ГМ в сочетании с ее безопасностью иэффективностью.Цель и задачи исследованияЦель исследования: выявление генетических маркеров раннейдиагностикигрибовидногопатогенетической терапии.микозадляповышенияэффективности7В соответствии с целью исследования, были определены следующиезадачи:1.

Характеристики

Тип файла PDF

PDF-формат наиболее широко используется для просмотра любого типа файлов на любом устройстве. В него можно сохранить документ, таблицы, презентацию, текст, чертежи, вычисления, графики и всё остальное, что можно показать на экране любого устройства. Именно его лучше всего использовать для печати.

Например, если Вам нужно распечатать чертёж из автокада, Вы сохраните чертёж на флешку, но будет ли автокад в пункте печати? А если будет, то нужная версия с нужными библиотеками? Именно для этого и нужен формат PDF - в нём точно будет показано верно вне зависимости от того, в какой программе создали PDF-файл и есть ли нужная программа для его просмотра.

Список файлов диссертации