Диссертация (1139676), страница 36
Текст из файла (страница 36)
Для самцов крыс LD50 составила 421 (379÷467) мг/кг, LD16 – 255 мг/кг,LD84 – 649 мг/кг, для самок крыс LD50 – 390 (351÷433) мг/кг, LD16 – 210 мг/кг,LD84 – 582 мг/кг.Перед гибелью животных, через 15-20 мин после введения исследуемогосоединения наблюдалось сходная картина острого токсикоза.При внутрижелудочном введении мышам LD50 для самцов составила 706(619÷804) мг/кг, LD16 – 533 мг/кг, LD84 – 1042 мг/кг, для самок мышей LD50 – 752(659÷857) мг/кг, LD16 – 521 мг/кг, LD84 – 992 мг/кг. При внутрижелудочномвведении крысам LD50 для самцов составила 751 (670÷841) мг/кг, LD16 – 548мг/кг,LD84 – 997 мг/кг, для самок крыс LD50 – 799 (713÷894) мг/кг, LD16 – 523 мг/кг,LD84 – 901 мг/кг.
Перед гибелью животных, через 25-40 мин после введения,наблюдалась сходная картина острого токсикоза.При накожном нанесении исследуемого соединения в максимальновозможной концентрации амид 4D не вызывал гибель животных, вследствие чегоопределение LD50 при накожном нанесении не представлялось возможным.По классификации токсичности веществ [79] изучаемое соединение 4Dотносится к умеренно токсичным соединениям.241ГЛАВА 7. ТИП ПРОТИВОМИКРОБНОГО ДЕЙСТВИЯ СОЕДИНЕНИЙ НАОСНОВЕ ЗАМЕЩЕННЫХ 4-, 5-, 6-, 7-АМИНОИНДОЛОВДляэкспериментаконцентрации100мг/млготовилирастворы(конечнаяисследуемыхконцентрация≈соединений80-100мкг/мл)ввфизиологическом растворе и разливали по пробиркам (по 1 мл), для азитромицина2 мг/мл (конечная концентрация ≈ 1-2 мкг/мл). В качестве препарата сравнениябыл выбран азитромицин, как классический препарат с бактериостатическимдействие, МПК90 азитромицина для S.aureus 0,01-2 мкг/мл [81].Контрольные пробирки не содержали исследуемые соединения.
Для работыиспользовали стандартный инокулюм S.aureus АТСС 6538-Р, соответствующий поплотности 0,5 по стандарту Мак-Фарланда и содержащий примерно 1,5x108КОЕ/мл. МПК исследуемых соединений для S.aureus составляют у циклическогоамида 5D 7,8 мкг/мл, циклического амида 7D 125 мкг/мл, для амида S3 62,5мкг/мл, циклического амида HD – 59 мкг/мл. Инокулюм добавляли по 1 мл впробирки с исследуемыми соединениями. Отмечали время, а затем через 5, 10, 15и 30 минут, 1, 2 и 4 часа с помощью нихромовой петли делали высевы впробирки, содержащие 1 мл Мюллер-Хинтон бульона. Пробирки помещали втермостат при 37 °С и наблюдали в течение 5-ти суток. Рост исследуемыхмикроорганизмов фиксировали в проходящем свете и по изменению оптическойплотности культуральной среды фотоколориметрически с использованиемфотоэлектроколориметра (ФЭК)Apel«AP-101».
В процессепроведенияэксперимента было выявлено, что видимый рост микроорганизмов в питательнойсреде наблюдается при показателях оптической плотности (D) культуральнойсреды более 0,21. «Отрицательный» контроль микроорганизмов (содержащийинокулюм одной нихромовой петли в 1 мл МХБ и хранившийся в холодильнике)имеет значение D=0,003.В контрольных пробирках видимый рост микроорганизмов наблюдалсячерез 20 часов после посева (таблица 7.1).242Таблица 7.1 – Показатели роста S.aureus АТСС 6538-Р после экспозиций вфизиологическом раствореВремя Контроль5экспозицииминВремяисследования1-е суткирострост10мин15мин30мин1час24часа часарострострост рост рост ростПоказатели оптической плотности культуральной среды после первых сутоккультивирования демонстрировали прирост микробной массы до 0,26 и более(таблица 7.2; рисунок 7.1).
Через 48 часов культивирования значения Dмикробной популяции S.aureus АТСС 6538-Р достигли 0,39, через 72 ч – 0,51,через 96 ч – 0,56, через 110 часов культивирования этот показатель составил 0,6.Таким образом, в течение эксперимента наблюдался прирост микробнойпопуляции на 50 %, на 30 %, на 9 %, на 7 % после 2-х, 3-х, 4-х и 5-ти сутоккультивирования соответственно (рисунок 7.2). Снижение интенсивности ростаобъясняется истощением ресурсов питательной среды.Плотность культуральнойсреды0,70,60,50,40,30,20,101-е сутки2-е сутки3-и сутки4-е сутки5-е суткиВремя культивированияРисунок 7.1 – Оптическая плотность культуральной среды со S.aureus АТСС6538-Р при культивировании в течение 5 суток243Таблица 7.2 – Динамика роста S.aureus АТСС 6538-Р по показателям оптической плотности культуральной средыВремяэкспозицииКонтроль5 мин10 мин15 мин30 мин1 час2 часа4 часаВремяисследования1-е сутки0,26±0,030,22±0,010,22±0,020,25±0,040,26±0,020,23±0,050,27±0,030,25±0,022-е сутки0,39±0,060,38±0,070,38±0,090,38±0,120,37±0,080,43±0,090,39±0,040,44±0,013-е сутки0,51±0,050,45±0,020,45±0,040,48±0,020,49±0,080,51±0,030,46±0,020,51±0,014-е сутки0,56±0,020,53±0,010,53±0,030,56±0,030,56±0,010,58±0,010,54±0,010,57±0,015-е сутки0,60±0,020,54±0,030,54±0,050,57±0,030,57±0,010,59±0,010,55±0,040,58±0,03244Плотность культуральной среды0,70,60,50,40,30,20,105 мин10 мин15 мин30 мин1ч2ч4чВремя экспозиции в физиологическом растворе1-е сутки2-е сутки3-и сутки4-е сутки5-е суткиРисунок 7.2 – Оптическая плотность культуральной среды со S.aureus АТСС6538-Р после экспозиций в физиологическом растворе при культивированиив течение 5 сутокПрепарат сравнения азитромицин задерживал рост и размножение тестштамма S.aureus в течение 3- суток.
После 4-х суточного культивирования вприсутствии МПК азитромицина наблюдалось появление видимого ростамикробной популяции в проходящем свете (таблица 7.3).245Таблица 7.3 – Показатели роста S.aureus АТСС 6538-Р после экспозициис азитромициномВремя Контроль5экспозициимин10мин15мин30мин1час24часа часаВремяисследования1-е суткиростнетнетнетнетнетнетнет2-е суткиростнетнетнетнетнетнетнет3-е суткиростнетнетнетнетнетнетнет4-е суткирострострострострострост рост ростОптическая плотность культуральной среды, содержащей инокулюм однойнихромовой петли МХБ с азитромицином равна 0,039.Увеличениеплотностикультуральнойсредыпослеэкспозицийсазитромицином наблюдалось после 2-х суток культивирования.
Показателивеличины D культуральной среды статистически значимо отличались от таковыхв контроле (Р<0,05). Увеличение плотности культуральной среды до 0,23-0,25дало видимое помутнение культуральной среды после 4-х суток культивированиямикроорганизмов в термостате при 37 °С, но задержка роста микробнойпопуляции оставалась статистически значимо отличной от контроля в течениевсего эксперимента (таблица 7.4; рисунок 7.3).Запоздалый рост свидетельствует об отсутствии бактерицидного действия.МПК90 азитромицина задерживает рост и размножение микроорганизмов иоказывает в исследумой концентрации бактериостатическое действие.246Таблица 7.4 – Динамика роста S.aureus АТСС 6538-Р по показателям оптической плотности культуральнойсреды после экспозиций с азитромициномВремяэкспозицииКонтроль5 мин10 мин15 мин30 мин1 час2 часа4 часаВремяисследования1-е сутки0,26±0,030,05±0,01* 0,05±0,01* 0,05±0,01* 0,05±0,01* 0,07±0,03* 0,07±0,02* 0,06±0,01*2-е сутки0,39±0,060,09±0,06* 0,09±0,05* 0,12±0,04* 0,15±0,02* 0,15±0,01* 0,15±0,04* 0,11±0,02*3-е сутки0,51±0,050,13±0,07* 0,13±0,05* 0,17±0,02* 0,20±0,01* 0,20±0,01* 0,19±0,02* 0,18±0,02*4-е сутки0,56±0,020,24±0,05* 0,25±0,03*0,27±0,070,33±0,030,34±0,020,25±0,035-е сутки0,60±0,020,25±0,05* 0,26±0,02*0,28±0,090,38±0,10,36±0,060,26±0,02* 0,25±0,01*Примечание: * - отличие от контроля статистически достоверно при Р<0,050,23±0,03*247Оптическая плотность культуральной среды0,70,60,51-е сутки0,42-е сутки3-и сутки0,34-е сутки5-е суткиконтроль 5-сутки0,20,105 мин10 мин15 мин30 мин1ч2ч4чВремя экспозиции с исследуемым соединениемРисунок 7.3 – Оптическая плотность культуральной среды со S.aureus АТСС 6538-Р после экспозиций сазитромицином248В первые сутки видимый в проходящем свете рост в пробирках послеэкспозиции микроорганизмов с циклическим амидом HD не наблюдался.
Через 48часов культивирования при 37 °С рост микроорганизмов во всех пробирках невооруженным глазом не определялся. Через 3-е суток наблюдения былообнаружено видимое помутнение среды во всех пробирках с посевами (таблица7.5).Таблица 7.5 – Показатели роста S.aureus АТСС 6538-Р после экспозицийс соединением HDВремя Контроль5экспозициимин10мин15мин30мин1час24часа часаВремяисследования1-е суткиростнетнетнетнетнетнетнет2-е суткиростнетнетнетнетнетнетнет3-е суткирострострострострост рост рост ростОптическая плотность культуральной среды, содержащей инокулюм однойнихромовой петли МХБ с соединением HD равна 0,012.Значение D культуральной среды после первых суток наблюдениясвидетельствует о задержке роста и размножения тест-штамма S.aureus АТСС6538-Р после экспозиций с исследуемым соединением (таблица 7.6).
Послекультивирования в течение 2-х суток при 37 °С циклический амид HDстатистически значимо задерживал рост микробной популяции (Р<0,05). Втечение всего эксперимента плотность культуральной жидкости содержащейМПК изучаемого соединения была ниже, чем в контроле (рисунок 7.4). МПКисследуемого соединения HD задерживает рост и размножение микроорганизмови оказывает в исследумой концентрации бактериостатическое действие.249Таблица 7.6 – Динамика роста S.aureus АТСС 6538-Р по показателям оптической плотности культуральнойсреды после экспозиций с соединением HDВремяэкспозиции Контроль5 мин10 мин15 мин30 мин1 час2 часа4 часаВремяисследования1-е сутки0,26±0,03 0,07±0,01* 0,07±0,02* 0,07±0,01* 0,08±0,03* 0,07±0,01* 0,06±0,02* 0,05±0,001*2-е сутки0,39±0,06 0,18±0,04* 0,18±0,02* 0,15±0,03* 0,14±0,03* 0,09±0,01* 0,08±0,01*0,07±0,02*3-е сутки0,51±0,050,28±0,110,28±0,080,28±0,020,24±0,05* 0,22±0,03* 0,21±0,04*0,23±0,02*4-е сутки0,56±0,020,35±0,090,35±0,120,36±0,090,36±0,100,32±0,070,36±0,090,30±0,065-е сутки0,60±0,020,43±0,050,43±0,090,43±0,060,53±0,050,43±0,090,46±0,040,37±0,09Примечание: * - отличие от контроля статистически достоверно при Р<0,05.250Оптическая плотность культуральной среды0,70,60,51-е сутки0,42-е сутки3-и сутки0,34-е сутки5-е суткиконтроль 5-сутки0,20,105 мин10 мин15 мин30 мин1ч2ч4чВремя экспозиции с исследуемым соединениемРисунок 7.4 – Оптическая плотность культуральной среды со S.aureus АТСС 6538-Р после экспозиций ссоединением HD251В контрольной пробирке рост микроорганизмов наблюдался через 20 часовпосле посева.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
