Диссертация (1139676), страница 40
Текст из файла (страница 40)
Оптическая плотность культуральнойсреды в присутствии тест-штамма Staphylococcus aureus, культивируемого при15,6 мкг/мл, 31,25 мкг/мл, 62,5 мкг/мл, 125 мкг/мл [465] концентрацияхпирролохинолона 39D составляет 0,030; 0,018; 0,008; 0,003 соответственно(формула 13).
Оптическая плотность культуральной среды с исследуемыммикроорганизмом, при культивировании без исследуемого соединения составляет0,27.KD =0,030 + 0,018 + 0,008 + 0,003×100 = 1,4754(13)Показатель КD с пирролохинолоном 39D более 1, следовательно,исследуемое соединение обладает бактериостатическим типом действия вотношении Staphylococcus aureus 6538-P АТСС.279Исследование типа противомикробно о действия соединенияс лабораторнымифром 5DЗависимость оптической плотности соединения с лабораторным шифром 5Dс культурой Staphylococcus aureus 6538-P АТСС обнуляют по показателямоптической плотности антибиотика (0,006). Оптическая плотность культуральнойсреды в присутствии тест-штамма Staphylococcus aureus, культивируемого при 7,8мкг/мл, 15,6 мкг/мл, 31,25 мкг/мл, 62,5 мкг/мл [465] концентрациях циклическогоамида 5D составляет 0,045; 0,026; 0,014; 0,006 соответственно (формула 14).Оптическая плотность культуральной среды с исследуемым микроорганизмом,при культивировании без исследуемого соединения составляет 0,27.KD =0,045 + 0,026+ 0,014 + 0,006×100 = 2,2754(14)Показатель КD с циклическим амидом 5D более 1, следовательно,исследуемое соединение обладает бактериостатическим типом действия вотношении Staphylococcus aureus 6538-P АТСС.Показатель КD с исследуемыми соединениями составлял более 1.
Этосвидетельствует о том, что исследуемые соединения, синтезированные на основезамещенных 4-, 5-, 6-, 7-аминоиндолов обладают бактериостатическим типомпротивомикробного действия в отношении исследуемых микроорганизмов. Спомощью нового способа определения типа противомикробного действияподтверждено бактериостатическое действие исследуемых соединений, изученноев главе 7 настоящей работы.280ГЛАВА 9. ВЛИЯНИЕ ИССЛЕДУЕМЫХ СОЕДИНЕНИЙ НА ОСНОВЕЗАМЕЩЕННЫХ 4-, 5-, 6-, 7-АМИНОИНДОЛОВ НА ДНКПРОКАРИОТИЧЕСКОЙ КЛЕТКИДействие большинства современных синтетических противомикробныхпрепаратов связано либо с подавление синтеза ДНК, либо с подавлениембактериального белкового синтеза на уровне трансляции или транскрипции.Изучение влияния новых соединений на структуру дезоксирибонуклеиновыхкислот на примере бактериальной ДНК имеет большое значение не только дляопределениямолекулярныхмеханизмовантибактериальнойактивностисоединений, но и для прогноза его возможной генотоксичности.ДлявыявленияДНК-повреждающегодействиясоединенийможноиспользовать тест-систему, в которой индукцию SOS оперонов в присутствииразличных концентраций испытуемого вещества оценивают по абсолютномузначению активности β-галактозидазы [117].Эффективность мутационного процесса в целом зависит от ряда факторов,причем сам факт взаимодействия молекулы химического соединения с ДНКявляется лишь одним из этапов в общем процессе, приводящем к возникновениюмутаций.
В течение последних десятилетий расшифрованы основные механизмыработы SOS-системы бактерий, которая формирует комплексный SOS-ответклетки на повреждение ДНК [141].SOS-ответ включает следующие основные реакции: задержка клеточногоделения, замедление клеточного дыхания, индукцию профагов и SOS репарациюДНК. В результате «ошибочной» SOS-репарации, возможна репликация ДНК идальнейшее клеточное деление. Роль UmuDC-зависимой SOS-репарации состоитв том, что при множественных дефектах ДНК, если клетка никак не поспеваетвозобновить начальную последовательность ДНК, она стремится продолжитьрепликацию, посредством введения случайных оснований в синтезируемую цепьнапротив повреждений.
Установлено, что индукция SOS-ответа приводит кзначительному увеличению частоты мутаций. Если жизненно важные функции281все-таки безнадежно утрачены, такая клетка, в конце концов, погибнет. В томслучае, если мутации, возникшие в результате «ошибочной» SOS-репарацииокажутся не летальными, клетка выживет, но ее потомки будут носителямимутаций, возникших в процессе SOS-ответа клетки [23].Таким образом, факторы, индуцирующие SOS-ответ клетки, обладают ДНКповреждающей(генотоксической)активностьюиспособнывызвать такназываемый SOS-мутагенез в клетках бактерий.ВнастоящейработедляоценкиДНК-повреждающейактивностисоединений использован SOS-хромотест, предложенный в 1982 г.
PhilippeQuillardet с коллегами [407; 408].Фактор индукции SOS-ответа соединения 7D в концентрациях 50 и 500мкг/мл оказался ниже порогового значения, и составляло 1,2 и 1,8 соответственно,при повышении концентрации изучаемого циклического амида до 1000 мкг/млзначение IF превысило пороговый уровень «2» и составило 3,2. Исследуемоесоединениестатистическизначимопвышалоактивностьиндуцибельногофермента β-галактозидазы в концентрации 1000 мкг/мл (таблица 9.1).Таблица 9.1 – SOS-индуцирующая активность циклического амида 7DИсследуемоесоединениеДоза,β-галактозидаза,Щелочная фосфатаза,Фактормкг/млпоказательпоказательиндукцииактивностиактивностиSOSответа (IF)Негативный-246,3±27,01453,3±94,8-102107,2±70,91775,6±93,17,0250243,4±31,31290,8±185,91,2500399,2± 78,91315,2±218,91,81000946,5±34,6*1682, 5±73,13,2контрольМитомицин С7DПримечание: * - отличие от контроля статистически достоверно при Р<0,05.282Амид 66D в исследуемых концентрациях в тесте на повреждение ДНК непроявил ни токсического, ни генотоксического действия.
Фактор индукции SOSответа для изучаемого соединения в концентрации от 50 до 1000 мкг/мл был нижепорогового значения (таблица 9.2).Таблица 9.2 – SOS-индуцирующая активность амида 66DИсследуемоесоединениеДоза,β-галактозидаза,Щелочная фосфатаза,Фактормкг/млпоказательпоказательиндукцииактивностиактивностиSOSответа (IF)Негативный-177,2±9,61493,7±76,2102107,2±70,91775,54731±93,057,0250173,5± 7,551575,5± 238,11,0500192,6±4,61506,1±41,41,101000187,7±6,31417,9±133,91,17контрольМитомицин С66DФактор индукции SOS-ответа соединения НD в концентрации 50 мкг/млоказалсянижепороговогозначения, исоставил 1,3.
Приповышенииконцентрации изучаемого циклического амида до 500 мкг/мл значение IFпревысило пороговый уровень «2» и составило 2,8. Дальнейшее увеличениеконцентрации изучаемого соединения НD выявило дозозависимое повышениезначения фактора индукции SOS-ответа до 6,7. Исследуемый циклический амидстатистически значимо увеличивал активность индуцибельного фермента βгалактозидазы в концентрации 500 и 1000 мкг/мл (таблица 9.3).283Таблица 9.3 – SOS-индуцирующая активность циклического амида HDИсследуемоесоединениеДоза,β-галактозидаза,Щелочная фосфатаза,Фактормкг/млпоказательпоказательиндукцииактивностиактивностиSOSответа (IF)Негативный-177,2±9,61493,7±76,2102107,2±70,91775,6±93,17,0250246,0±9,21636,6±172,11,3500532,1±121,9*1098,9±386,02,810001055,9±94,2*1387,9±44,46,7контрольМитомицин СHDПримечание: * - отличие от контроля статистически достоверно при Р<0,05.Фактор индукции SOS-ответа пирролохинолона 4D в концентрации 50мкг/мл также оказался ниже порогового значения, и составил 1,9.
При повышенииконцентрации изучаемого пирролохинолона до 500 мкг/мл значение IF превысилопороговый уровень «2» и составило 3,1. Изучаемое соединение 4D выявилодозозависимое SOS-индуцирующее действие, однако способность индуцироватьSOS-ответ у него выражена слабее, чем у циклического амида HD и IFпирролохинолона4Dсоставил3,8.Исследуемыйпирролохинолон4Dстатистически значимо увеличивал активность индуцибельного фермента βгалактозидазы в концентрации 1000 мкг/мл (таблица 9.4).284Таблица 9.4 – SOS-индуцирующая активность пирролохинолона 4DИсследуемоесоединениеДоза,β-галактозидаза,Щелочная фосфатаза,Фактормкг/млпоказательпоказательиндукцииактивностиактивностиSOSответа (IF)Негативный-177,2±9,61493,7±76,2-102107,2±70,91775,6±93,17,0250336,2±12,71575,6±194,01,9500333,0±22,11000,5±107,93,11000591,0±76,8*1287,6±130,93,8контрольМитомицин С4DПримечание: * - отличие от контроля статистически достоверно при Р<0,05.Фактор индукции SOS-ответа амида S3 в концентрации 50 мкг/мл такжеоказалсянижепороговогозначения, исоставил 1,7.
Приповышенииконцентрации изучаемого амида до 500 мкг/мл значение IF превысило пороговыйуровень «2» и составило 2,1. Дальнейшее увеличение концентрации изучаемогосоединения S3 не выявило дозозависимого повышения значения фактораиндукции SOS-ответа и значение IF осталось на уровне 2,0. Наблюдаласьтенденция к увеличению активности β-галактозидазы в концентрации 1000 мкг/мл(таблица 9.5).285Таблица 9.5 – SOS-индуцирующая активность амида S3ИсследуемоесоединениеДоза,β-галактозидаза,Щелочная фосфатаза,Фактормкг/млпоказательпоказательиндукцииактивностиактивностиSOSответа (IF)Негативный-177,2±9,61493,7±76,2-102107,2±70,91775,6±93,17,0250211,2±9,31188,4±135,91,7500211,2±58,5990,07±99,22,11000224,9±79,21132,6±75,12,0контрольМитомицин СS3Значение фактора индукции SOS-ответа циклического амида 5D вконцентрации 50 мкг/мл было ниже порогового значения, и составил 1,0.
Приповышении концентрации изучаемого циклического амида до 500 мкг/млзначение IF достигло порогового уровеня и составило 2,0. Дальнейшееувеличение концентрации изучаемого соединения 5D выявило дозозависимоеповышение значения фактора индукции SOS-ответа до 3,1. Исследуемыйциклическийамид5Dстатистическизначимоповышалгалактозидазы в концентрации 500 и 1000 мкг/мл (таблица 9.6).активностьβ-286Таблица 9.6 – SOS-индуцирующая активность циклического амида 5DИсследуемоесоединениеДоза,β-галактозидаза,Щелочная фосфатаза,Фактормкг/млпоказательпоказательиндукцииактивностиактивностиSOSответа (IF)Негативный-327,6±36,5993,1±39,5-102107,2±70,91775,6±93,17,0250282,9±39,9868,4±27,91,0500640,43±51,7938,82±60,82,010001004,53±113,3*854,14±41,63,1контрольМитомицин С5DПримечание: * - отличие от контроля статистически достоверно при Р<0,05.На фоне применения амида 43D в исследуемых концентрациях не выявленоиндукции SOS-функций у тестерного микроорганизма.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
