Диссертация (1139676), страница 42
Текст из файла (страница 42)
Таким образом, индекс мутагенности исследуемогосоединения оказался менее 2, так как при добавлении 50 мкг/мл S3 этотпоказатель штамма S.typhimurium составлял 1,4, 500 мкг/мл – 1,68 и 1000 мкг/ мл– 1,87. Соединение с лабораторным шифром S3 не показало мутагенных эффектов296ни в одной из исследуемых концентраций, хотя индекс мутагенностидозозависимо увеличивался, но оставался в пределах нормы даже при 1000мкг/мл.Добавление к питательной среде для культивирования ауксотрофногоштамма S.typhimurium исследуемого циклического амида с лабораторнымшифром HD не показало мутагенной активности ни в одной из исследуемыхконцентраций. Так при добавлении исследуемого соединения НD в дозе 50 мкг/млна чашках наблюдалось в среднем 73,3±4,73 КОЕ His+ревертантов штаммаS.typhimurium TA 100, в дозе 500 мкг/мл – 86,7±5,5 КОЕ и в дозе 1000 мкг/ мл –102,3±3,06 КОЕ.
Индекс мутагенности исследуемого соединения составил 0,88,1,04 и 1,23 соответственно при использовании 50 мкг/мл, 500 мкг/мл 1000 мкг/млсоединения НD. Соответственно индекс мутагенности оставался в пределахнормы.Таблица 10.3 – Мутагенность исследуемых соединений по отношению кштамму S.typhimurium ТА 100ИсследуемоеДоза,Среднее число колонийПревышение надсоединениемкг/млHis+ревертантов/чашкаспонтанным фономмутирования123483,33±5,69-511,3±19,736,1450154,3±2,521,85500154,7±3,211,861000156,7±3,511,88НегативныйконтрольПозитивныйконтроль7D29715DS3HD23450116,3±8,021,40500122,7±5,511,471000124±3,611,4950116,7±4,511,40500139,7±6,661,681000156±2,651,875073,3±4,730,8850086,7±5,511,041000102,3±3,061,237Индекс мутагености6543210Исследуемые соединенияРисунок 10.2 - Мутагенность исследуемых соединений по отношению кштамму S.typhimurium ТА 100При исследовании соединений 7D, 5D, S3 и HD в тесте Эймса установлено,что ни одно из соединений не вызывает превышение числа колоний,298индуцированныхHis+-ревертантов,надспонтаннымфономмутирования(негативный контроль) более, чем в 2-2,5 раза, что свидетельствует об отсутствиимутагеннойактивностиданныхсоединенийвисследованномдиапазонеконцентраций, исключает мутагенное воздействие на прокариотические клетки ивозможность индукции генных мутаций в прокариотической клетке.299ГЛАВА 11.
ПРОТИВОМИКРОБНАЯ АКТИВНОСТЬ ИССЛЕДУЕМЫХСОЕДИНЕНИЙ IN VIVO НА МОДЕЛИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙХИРУРГИЧЕСКОЙ РАНЕВОЙ ИНФЕКЦИИВрезультатепроведенногоисследованияопределено,чтонеинфицированная экспериментальная хирургическая рана у мышей имеет обычнуюклиническую картину, связанную с неинфицированной раной открытого типа.Сразу после того, как был сделан разрез, было только минимальное кровотечение,и оно прекратилось спонтанно.
Небольшие отек и эритема наблюдались на раннихстадиях заживления ран, которое быстро прогрессировало почти до полноговосстановления целостности тканей через 2-3 недели.Микроскопически неинфицированная рана первоначально демонстрировалаклассические признаки воспаления: отек, экстравазационные эритроциты илейкоциты. Расширенные капилляры. В результате хирургической процедурыгибели животных не наблюдалось.При инфицировании S.aureus и P.aeruginosa, клинические признакиинфекции присутствовали, но не были ярко выражены. По краям раннаблюдались не значительные отек и эритема, и на разведенной коже отмечалосьнагноение.
Заживление ран обычно требовало около 3-х недель с моментазаражения. Гибель мышей, инфицированных S.aureus не наблюдалась. Гибельживотных регистрировалась у мышей, инфицированных P.aeruginosa.Длявоспроизведенияраневойинфекциииспользовалиинокулюммикроорганизмов плотностью 1,5×108 КОЕ в МХБ (0,5 по Мак-Фарланду).Исследуемые соединения использовали в виде растворов в глицерине (10мг/мл). Для нанесения на раны использовали насадку-распылитель. Лечебнаяпроцедура включала орошение поверхности ран 2 раза в сутки в течение 5дней:5D, 7D, S3 и HD для экспериментальных хирургических ран, инфицированныхS.aureus АТСС 43300; S3 и HD для экспериментальных хирургических ран,инфицированных P.aeruginosa АТСС 27853.300В качестве препарата сравнения использовали раствор диоксидина (10мг/мл) для внутриполостного и наружного применения.
Лечебная процедуравключала орошение поверхности ран 2 раза в сутки в течение 5дней.В процессе эксперимента определено, что методика поверхностных смывовсобирает из раны только поверхностно локализованные бактерии, тогда как методгомогенизации оценивает, как поверхностные, так и тканево-локализованныемикроорганизмы. Поэтому, более высокие показатели обсемененности раны,полученные методом гомогенизации, являются показателем инвазивностизаражающего организма (таблицы 11.1, 11.2).Таблица 11.1 – Показатели среднего микробного числа в процессеформирования экспериментальных хирургических ран, инфицированныхS.aureus АТСС 43300День послеCреднее значение микробного числа (n=10)инфицирования Метод поверхностного смыва,Метод гомогенизации,Log КОЕ/рана(±m)*Log КОЕ/г(±m)*17,15±1,48,41±1,327,68±1,58,26±2,137,92±2,18,47±1,447,89±3,08,36±1,557,86±2,08,13±1,367,82±1,07,95±0,677,75±1,47,93±0,5105,43±0,45,56±0,7142,93±2,43,32±1,6* – среднее отклонение.Однакоколичествомикроорганизмовраны,полученноеметодомповерхностного смыва, хотя и ниже, также точно отражает динамику общего301количества микроорганизмов раны, поверхностно- и тканево-локализованныхбактерий в ходе инфекции.Таблица 11.2 – Показатели среднего микробного числа в процессеформирования экспериментальных хирургических ран, инфицированныхP.aeruginosa АТСС 27853День послеСреднее значение микробного числа (n=10)инфицирования Метод поверхностного смыва,Метод гомогенизации,Log КОЕ/рана(±m)*Log КОЕ/г(±m)*16,4±1,46,94±0,526,94±1,58,38±1,235,91±2,19,37±2,145,78±3,08,89±0,955,76±2,07,98±1,265,81±1,07,95±0,375,88±1,47,93±0,5104,21±2,54,98±2,1143,82±1,03,88±1,6* – среднее отклонение.Также была исследована возможность системного поражения в результатераневых инфекций, вызванных P.aeruginosa и S.aureus.
Через различныепромежутки времени после заражения исследованы внутренние органы и кровьдля определения отсутствия или наличия тестируемого организма. Обе инфекциипроявили некоторую степень системного участия довольно быстро послезаражения.В случае инфекции S.aureus тестируемый организм был обнаружен впечени, селезенке и почках у большинства мышей в течение 24 часов послеинфицирования и определялся в течение первой недели (таблица 11.3).
Однако,302когда органы исследовались через 2 недели после заражения, S.aureus выделялсятолько изредка. Из органов, взятых через 3-х и 4-недельные интервалыпостинфекции,исследуемыемикроорганизмыневыделялись.Несколькоположительных культур крови были получены только в течение первой неделизаражения, причем наибольшее количество было обнаружено после 24 часовкультивирования.
Во время всего эксперимента не было зафиксировано гибелиэкспериментальных животных после воспроизведения инфекционного процесса сS.aureus.Таблица 11.3 – Локализация микроорганизма во внутренних органахпосле инфицирования экспериментальных хирургических ранS.aureus АТСС 43300КоличествопогибшихДень послеКоличество инфицированных мышей / общее животных /инфицирования количество животныхобщееколичествоживотныхпеченьселезенкапочкикровь115/1515/1514/156/150/30214/1515/1514/151/150/30313/1512/1514/153/150/30415/1514/1515/153/150/30710/1510/1511/150/150/30141/151/150/150/150/30210/150/150/150/150/30280/150/150/150/150/30При инфицировании P.aeruginosa через 3 дня после заражения почти 75 %мышей продемонстрировали присутствие микроорганизма в печени, почках и303селезенке, хотя культуры крови в большинстве случаев были отрицательными напротяжении всего эксперимента (таблица 11.4).
P.aeruginosa сохранялся в органахэкспериментальных животных до 7 дней, но редко выделялся впоследствии.Несколько случаев гибели животных были зарегистрированы в течение первойнедели после заражения, но ни один из них не произошел позже 7 дня послеинфицирования. P.aeruginosa была изолирована из всех внутренних органов,исследуемыхмышей,которыеумерли,чтоуказываетнаразвитиегенерализованной инфекции.Таблица 11.4 – Локализация микроорганизма во внутренних органахпосле инфицирования экспериментальных хирургических ранP.aeruginosa АТСС 27853КоличествопогибшихДень послеКоличество инфицированных мышей / общее животных /инфицирования количество животныхобщееколичествоживотныхпеченьселезенкапочкикровь14/152/154/150/150/4026/152/157/150/150/40313/1510/1510/153/152/30410/157/157/151/153/3076/157/157/150/155/30141/152/151/150/150/30210/150/150/150/150/30280/150/150/150/150/30В эксперименте была оценена эффективность исследуемых соединений,применяемых с различной кратностью и различное количество дней.
Наиболее304эффективным оказалось применение 2 раза в день в течение 5 дней. Терапияначиналась через 24 часа после инфицирования, путем орошения поверхностиран, исследуемыми соединениями.Исследование глицерина свидетельствует об отсутствии роста, изучаемыхтест-культур в нем и об отсутствии влияния растворителя на развитиеэкспериментального инфекционного процесса.Послеинфицированияинокулятом,содержащимS.aureus,былообнаружено, что исследуемый микроорганизм хорошо размножается в тканяхкожи.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
