Диссертация (1139676), страница 25
Текст из файла (страница 25)
Staphylococcus aureus 43300 АТСС(MRSA) чувствителен к исследуемому соединению.Исследуемый циклический амид 5D способен замедлять или подавлять рости размножение клинических штаммов S.aureus, S.epidermidis, S.pyogenes,S.pneumoniae, S.salivarius, S.uberis, S.mitis, S.agalactiae, E. faecalis, E.faecium,B.cereus, E.coli, S.enteritidis, C.freundii, E.cloaceae, E.aerogenes, K.pneumoniae.В результате исследования группы соединений, полученных на основезамещенного 4-амино-фенилиндола оказалось, что соединение с лабораторнымшифром 5D (циклический амид), является наиболее активным в данной группе.Обладает выраженной активностью в отношении грамположительных кокков,представителей родов Staphylococcus, в том числе MRSA штаммов, Streptococcus,Enterococcus,подавляетростграмотрицательныхмикроорганизмов,представителей рода семейства Enterobacteriaceae родов Escherichia, Salmonella,Citrobacter, Enterobacter и Klebsiella, но малоактивно в отношении P.vulgaris,P.mirabilis и P.aeruginosa.
Циклический амид 5D обладает широким спектром147противомикробного действия и активен в отношении антибиотикоустойчивыхштаммов S.aureus и S.epidermidis, E.coli и B.cereus. Соединение с лабораторнымшифром 5D не уступает по активности препаратам сравнения диоксидину,нитрофурантоину, фосфомицину и мирамистину.Соединения с лабораторными шифрами 6D (амид) и 17 (пирролохинолон)оказалисьмалоактивны,каквотношенииграмположительных,такиграмотрицательных тест-штаммов исследуемых микроорганизмов.В рамкахдальнейшегоисследованиябиологических свойств былаисследована острая токсичность 4-гидрокси-8-фенил-4-(трифторметил)-1,3,4,7тетрагидро-2Н-пирроло[2,3-h]хинолин-2-она (лабораторный шифр 5D).При внутрибрюшинном введении соединения с лабораторным шифром 5Dдля самцов мышей LD50 составила 964 (796÷1166) мг/кг, LD16 – 716 мг/кг, LD84 –1234 мг/кг, для самок мышей LD50 – 859 (709÷1039) мг/кг, LD16 – 658 мг/кг, LD84 –1197 мг/кг.
Для самцов крыс LD50 составила 721 (605÷857) мг/кг, LD16 – 565 мг/кг,LD84 – 899 мг/кг, для самок мышей LD50 – 690 (580÷800) мг/кг, LD16 – 510 мг/кг,LD84 – 897 мг/кг.Перед гибелью животных, через 15-20 мин после введения исследуемогосоединения, наблюдалось общее угнетенное состояние животных, снижениедвигательной активности, дыхание становилось частым и поверхностным, затемглубоким и судорожным. Животные забивались в угол. Иногда наблюдалосьповышениерефлекторнойвозбудимости.Затемсимптомыинтоксикациинарастали, появлялся тремор, подергивание конечностей, одышка.
Послеприступа тонических судорог животные погибали, принимая боковое положение.При патологоанатомическом вскрытии животных, павших после введениясоединения выявлены неспецифические изменения паренхиматозных органов,характеризующие картину острого токсикоза. Точечные кровоизлияния в тканяхсердца и легких, увеличение печени, дряблость почек.При внутрижелудочном введении мышам LD50 для самцов составила 1106(945÷1294) мг/кг, LD16 – 893 мг/кг, LD84 – 1401 мг/кг, для самок мышей LD50 –1152 (985÷1348) мг/кг, LD16 – 821 мг/кг, LD84 – 1445 мг/кг. Перед гибелью148животных, через 25-40 мин после введения, наблюдалась сходная картина остроготоксикоза. При патологоанатомическом вскрытии регистрировалась гиперемиястенок желудка, двенадцатиперстной кишки и тонкого кишечника, точечныекровоизлияния в тканях печени и почек, капсула почек легко снимается.При внутрижелудочном введении крысам в дозах от 100 до 2000 мкг/млсоединение 5D не вызывало гибель экспериментальных животных, вследствиечего определение средней смертельной дозы не представлялось возможным.После введения препарата наблюдалось общее угнетенное состояние, снижениедвигательной активности, на звуковые раздражители отмечалось вздрагивание иподпрыгивание на месте.
В течении 30-40 мин симптомы повторялись, иногдапоявлялся тремор, одышка. Затем наблюдалось постепенное восстановлениежизненных функций организма животного. По истечении 6-12 часов симптомыисчезали. В течении последующих суток наблюдалось полное восстановлениефункций. Животные внешне выглядели вполне здоровыми, активно совершалигруминг, функционирование органов дыхания становилось полноценным,количество дыхательных движений укладывалось в пределы физиологическойнормы.Животныеактивнопотребляликорм иводу.Физиологическиеотправления без отклонений от нормы. В течении первых двух суток отмечалосьнекоторое снижение массы, но затем животные прибавляли в весе.
Достоверногоотличия прибавки в весе животных в контрольной группе и опытной группе ненаблюдалось.Патологоанатомическаякартинавскрытиявыжившихэкспериментальных животных не отличалась от таковой, у контрольныхживотных. Макроскопических признаков, свидетельствующих о повреждениижелудка,гиперемии,нарушенияцелостностислизистойоболочкиненаблюдалось.При накожном нанесении исследуемого соединения в дозах от 2000 до 5000мкг/кг циклический амид 5D не вызывал гибель животных, вследствие чегоопределение LD50 при накожном нанесении не представлялось возможным.
Посленанесения соединения наблюдалось снижение двигательной активности, в первыечасы – снижение аппетита. Через 4-5 часов указанные симптомы исчезали.149Отмечалась нормальная координация движений. Животные активно потребляликорм и воду. Физиологические отправления без отклонений от нормы. Припатологоанатомическом вскрытии видимых изменений в макроскопическойкартине не выявлено.По классификации токсичности веществ [79] изучаемое соединениеотносится к практически нетоксичным соединениям.150ГЛАВА 4.
СИНТЕЗ И БИОЛОГИЧЕСКАЯ АКТИВНОСТЬСОЕДИНЕНИЙ НА ОСНОВЕ 5-АМИНОИНДОЛОВРеакцииразличнотрифторацетоуксуснымзамещенныхэфиромв5-аминоиндоловтермическихсусловиях4,4,4-проходилипреимущественно с участием сложноэфирной группы кетоэфира. При этомобразовывались соответствующие амиды нециклического строения.Так, 5-амино-2,3-диметил-индол (2) давал в качестве продукта реакции амид–194,4,4-трифтор-3-оксо-N-(2,3-диметил-1Н-индол-5-ил)бутанамид(лабораторный шифр 3D) (схема 4.1) [169].Схема 4.1F3CMeH2NOMe +2NHMeHNOOMeOF 3CNHOMe19Введение метильной группы к пиррольному азоту исходного аминоиндоланеизменялонаправленияпревращения,врезультате5-амино-1,2,3-триметилиндол (3) превращался в амид 20 – 4,4,4-трифтор-3-оксо-N-(1,2,3триметил-1Н-индол-5-ил)бутанамид (лабораторный шифр 2D) (схема 4.2).Схема 4.2MeH2NF3COMe +N3 MeOMeHNOOMeMeF 3CNO20MeАминоиндол (4) с дополнительным метильным заместителем в бензольномкольце при нагревании с трифторуксусным эфиром также образовывал151соответствующий амид 21 – 4,4,4-трифтор-N-(1-метил-2-фенил-1Н-индол-5-ил)-3оксобутанамид (лабораторный шифр 64D) (схема 4.3).Схема 4.3F3CMeH2NOMe +Me4NHCF3OOMeHNOMeONHMe21MeИзменения замещения у пиррольных атомов углерода не влияли на ходреакции.
Аминоиндол 5 в этих же условиях превращался в амид 22 – 4,4,4трифтор-3-оксо-N-(2,3,6-триметил-1Н-индол-5-ил)бутанамид(лабораторныйшифр 32D) (схема 5.4) [172].Схема 4.4F3CH2NPhN5 MeАналогичноO+OHNOOMePhF3CNOMe225-амино-6-метил-2-фенилиндол (6) втехжеусловияхпроведения превращения образовывал амид 23 – 4,4,4-трифтор-N-(6-метил-2фенил-1Н-индол-5-ил)-3-оксобутанамид (лабораторный шифр 43D) (схема 4.5).152Схема 4.5F3CH2NPhMe6O+NHCF3OOHNOPhONHMe23MeИзменение места расположения метильной группы в бензольном кольцемолекулы амина не влияло на направление реакции.
Из 5-амино-7-метил-2фенилиндола (7) по аналогичной методике был получен амид 24 – N-(1,7диметил-2-фенил-1Н-индол-5-ил)-4,4,4-трифтор-3-оксобутанамид (лабораторныйшифр 235D) (схема 4.6).Схема 4.6F3CH2NPh+NMe7OHNOOMeOPhF3CMeNOMe24MeХарактер заместителя в бензольной части молекулы аминоидола также непрепятствовалобразованиюамида25–4,4,4-трифтор-N-(6-метокси-1,2,3-триметил-1Н-индол-5-ил)-3-оксобутанамид (лабораторный шифр 66D) из 5амино-6-метокси-1,2,3-триметилиндола (8) и трифторацетоуксусного эфира(схема 4.7).153Схема 4.7F3CMeH2NOMe +MeOMeHNON8CF3OOMeOMeNMeO25MeMeВ результате исследования обнаружилось, что наряду с образованиемнециклических амидов, на основе замещенных 5-аминоиндолов, как основныхпродуктов реакции, происходит образование побочных соединений – енаминов засчетреализациивзаимодействиякарбонильнойфункциикетоэфирасаминогруппой индола. Но используя различие в растворимости в неполярныхрастворителяхихроматографическойподвижности,индолиламидылегкоочищались от примесей индолиленаминов.
В ходе химического экспериментаобразование циклических амидов из 5-аминоиндолов не зафиксировано.Замыкание цикла с одновременной ароматизацией наблюдалось лишь дляамида 22 в трифторуксусной кислоте. При этом был выделен 1-метил-2-фенил-8(трифторметил)-1,5-дигидро-6H-пирроло-[2,3-g)хинолин-6-он,действием диметилсульфаталегко превращалсякоторыйподв 1,5-диметил-2-фенил-8-трифторметил-1,5-дигидро-6Н-пирроло-[2,3-g]хинолин-6-он (26) – лабораторныйшифр 39D (схема 4.8) [172].Схема 4.8OHNOMeHNOPhF3CPhNO22MeNPhNCF3MeNCF326Me154Таблица 4.1 – Внеэкспериментальный прогноз противомикробнойактивности в ряду производных замещенных 5-аминоиндоловСоединениеСтруктурная формулаPa123Этиловый эфир (Z)-4,4,4-CH3HNF3CCH3трифтор-3-[(2,3-диметил-1Ниндолил-5)амино]-2-NHO0,424OC2H5бутеновой кислоты (1c)N-(2,3-диметил-1Н-индол-5-MeHNOMeил)-4,4,4-трифтор-3-оксоF3Cбутанамид (2c) (19-3D)NHO0,6243DCH3HNF3CCH3NЭтиловый эфир (E,Z)-4,4,4-Oтрифтор-3-[(1,2,3-триметил1Н-индолил-5)-амино]-2бутеновой кислоты (1d)OC2H5F3CCH3NOC2H5CH3HNMeOMe(1,2,3-триметил-1Н-индол-5ил)бутанамид (2d) (20-2D)0,452CH3HNO4,4,4-трифтор-3-оксо-N-CH3F3CNOMe2D0,55315512Этиловый эфир (Z)-4,4,4-3OC2H5OF3CCH3трифтор-3-[(2,3,6-триметил-HNCH31Н-индолил-5)-амино]-2NHH3Cбутеновой кислоты (1e)CF3OO4,4,4-трифтор-3-оксо-N-MeHN(2,3,6-триметил-1Н-индол-5-0,508Meил)бутанамид (2e) (21-64D)Me64DЭтиловый эфир (E,Z)-4,4,4-HNтрифтор-3-[(1,7-диметил-2-Nфенил-1Н-индолил-5)-(1g)CH3NCH3OC2H5OCH3HNиндол-5-ил)-4.4.4-трифтор-3оксобутанамид (2g) (24235D)0,409CH3HNF3CON-(1,7-диметил-2-фенил-1Н-NHOC2H5OF3Cамино]-2-бутеновой кислоты0,418PhF3CNOMeMe235D0,59915612OC2H5OЭтиловый эфир (Z)-4,4,4трифтор-3-[(1-метил-2-F3CHNфенил-1Н-индолил-5)-0,335амино]-2-бутеновой кислотыN(1h)N-(1-метил-2-фенил-1Н-3CH3HNOPhиндол-5-ил)-4.4.4-трифтор-3-F3Cоксобутанамид (2h) (22-32D)0,536NOMe32DЭтиловый эфир (Z)-4,4,4-OC2H5OF3CCH3трифтор-3-[(6-метокси-1,2,3-HNтриметил-1Н-индолил-5)амино]-2-бутеновой кислотыCH3NH3COCH3(1i)CF3OO4,4,4-трифтор-N-(6-метокси1,2,3-триметил-1Н-индол-5-MeHNил)-3-оксобутанамид (2i) (25-Meтрифтор-3-[(6-метил-2фенил-1Н-индолил-5)амино]-2-бутеновой кислоты(1k)0,762NMeO66D)Этиловый эфир (Z)-4,4,4-0,43766DMeOC2H5OF3CHNH3C0,407NH157124,4,4-трифтор-N-(6-метил-2-3CF3OOфенил-1Н-индол-5-ил)-3-0,770HNоксобутанамид (2k) (23-43D)PhNHMe43D1-Метил-2-фенил-8-HNO(трифторметил)-1,5-дигидроN6Н-пирроло-[2,3-g]хинолин6-он (1l)1-метил-2-фенил-3-CH3F3CCOCF3HNOтрифторацетил-8-0,228(трифторметил)-1,5-дигидро-N6Н-пирроло-[2,3-g]хинолин-0,374CH3F3C6-он (2l)Me1,5-Диметил-2-фенил-8(трифторметил)-1,5-дигидро-ONPh6Н-пирроло-[2,3-g]хинолин6-он (26-39D)NCF30,576Me39DПроведено исследование противомикробной активности новых соединений,производных замещенных 5-аминоиндолов, 4,4,4-трифтор-3-оксо-N-(2,3-диметил1Н-индол-5-ил)бутанамида (19, лабораторный шифр 3D), 4,4,4-трифтор-3-оксо-N(1,2,3-триметил-1Н-индол-5-ил)бутанамида (20, лабораторный шифр 2D), 4,4,4трифтор-N-(1-метил-2-фенил-1Н-индол-5-ил)-3-оксобутанамида(21,158лабораторный шифр 64D), 4,4,4-трифтор-3-оксо-N-(2,3,6-триметил-1Н-индол-5ил)бутанамида (22, лабораторный шифр 32D), 4,4,4-трифтор-N-(6-метил-2-фенил1Н-индол-5-ил)-3-оксобутанамида (23, лабораторный шифр 43D), N-(1,7-диметил2-фенил-1Н-индол-5-ил)-4,4,4-трифтор-3-оксобутанамидашифр235D),оксобутанамида(24,лабораторный4,4,4-трифтор-N-(6-метокси-1,2,3-триметил-1Н-индол-5-ил)-3(25,лабораторныйшифр66D),1,5-диметил-2-фенил-8-трифторметил-1,5-дигидро-6Н-пирроло-[2,3-g]хинолин-6-она (26, лабораторныйшифр 39D) [465].Соединение с лабораторным шифром 3D относительно тест-штаммовмикроорганизмов проявило следующую активность: для S.aureus 25923 АТСС,E.coli 25922 АТСС, P.aeruginosa 27853 АТСС, S.pyogenes 1238 АТСС, B.cereus 96МПК исследуемого соединения составили более 250 мкг/мл (таблица 4.2).Таблица 4.2 – Чувствительность тест-штаммов микроорганизмов ксоединению 3D (метод серийных разведений в Мюллер-Хинтон бульоне)250,0S.aureus25923АТСС++E.coli25922АТСС++125,0++++++++++62,5+++++++++++++31,3+++++++++++++++15,7+++++++++++++++7,9+++++++++++++++3,9+++++++++++++++1,96+++++++++++++++0,98++++++++++++++++/-+/-+/-+/-+/-питательной среде, мкг/млКонцентрация веществ вТест-культура«Отрицательный»контрольP.aeruginosa27853 АТСС++S.pyogenes B.cereus123896АТСС++++159Примечание: «+++» – диффузное помутнение МХБ; «++» – умеренноепомутнение МХБ; «+» – слабое помутнение МХБ; «+/-» – отсутствие помутненияМХБ (как в «отрицательном контроле»); «0» – отсутствие роста при пересеве наМХА.Изучаемый амид 3D в дозе 500 мкг/диск оказался мало активным вотношении исследуемых тест-штаммов микроорганизмов (таблица 4.3).Таблица 4.3 – Антибактериальная активность соединения 3D относительнотест-штаммов микроорганизмов (диско-диффузионный метод)Тест-штамм микроорганизмаЗона задержкиАктивностьроста (мм)соединения 3DStaphylococcus aureus 90614малоактивноStaphylococcus aureus 43300 АТСС13малоактивноStreptococcus pyogenes 19615 АТСС14малоактивноStreptococcus pneumoniae 49619 ATCC12малоактивноEnterococcus faecalis 19433 ATCC13малоактивноEscherichia coli M-1715малоактивноSalmonella enteritidis 5765 ATCC13малоактивноShigella sonnei S-форма11малоактивноCitrobacter freundii 101/5712малоактивноKlebsiella pneumoniae 13883 АТСС11малоактивноProteus vulgaris «Цветков»13малоактивноPseudomonas aeruginosa 45312малоактивноПримечание: соединение высокоактивно – полное отсутствие роста вдиаметре >25 мм; соединение активно – полное отсутствие роста в диаметре 16-25мм; соединение малоактивно – полное отсутствие роста в диаметре 10-15 мм;соединение неактивно – задержка роста не наблюдается.Таким образом, соединение с лабораторным шифром 3D малоактивно вотношении исследованных грамположительных и грамотрицательных тестштаммов in vitro.160Амидслабораторнымшифром2Dотносительнотест-штаммовмикроорганизмов проявил следующую активность: для S.aureus 25923 АТСС,E.coli 25922 АТСС, P.aeruginosa 27853 АТСС, S.pyogenes 1238 АТСС, B.cereus 96МПК исследуемого соединения составили более 250 мкг/мл (таблица 4.4).Таблица 4.4 – Чувствительность тест-штаммов микроорганизмов ксоединению 2D (метод серийных разведений в Мюллер-Хинтон бульоне)250,0S.aureus25923АТСС++E.coli25922АТСС++125,0++++++++++62,5+++++++++++++31,3+++++++++++++++15,7+++++++++++++++7,9+++++++++++++++3,9+++++++++++++++1,96+++++++++++++++0,98+++++++++++++++питательной среде, мкг/млКонцентрация веществ вТест-культураP.aeruginosa27853 АТСС++S.pyogenes B.cereus123896АТСС++++«Отрицательный»+/+/+/+/+/контрольПримечание: «+++» – диффузное помутнение МХБ; «++» – умеренноепомутнение МХБ; «+» – слабое помутнение МХБ; «+/-» – отсутствие помутненияМХБ (как в «отрицательном контроле»); «0» – отсутствие роста при пересеве наМХА.Соединение 2D при нагрузке 500 мкг/диск оказалось малоактивнымотносительно тест-штаммов исследуемых микроорганизмов (таблица 4.5).
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
