Диссертация (1139554), страница 15
Текст из файла (страница 15)
В-третьих, данные о наличии активирующих рецепторов NK-клеток позволяют по-новому оценить их функциональную активность,используя метод проточной цитометрии. В-четвертых, появилась возможностьоценить степень воздействия лекарственной терапии на NK-клетки как в норме,так и при патологии. Это позволяет значительно расширить возможности клинической фармакологии по поиску средств, напрямую влияющих на данную группуклеток (ХТ опухолей, ИТ и др.). В-пятых, изучение субпопуляций NK-клеток иих функциональной активности может повлиять на наши представления о природе онкологического процесса [114].
Это весьма важно, как для пониманияфундаментальных аспектов межклеточных взаимодействий у здоровых индивидуумов, где значение NK-клеток уже достаточно определено, так и для противоопухолевой защиты организма и происхождения иммуносупрессивных процессов, при которых значимость врожденных и приобретенных механизмов иммунитета недостаточно изучена. Как следствие этого, новые научные данные могутспособствовать развитию различных диагностических подходов, иммуномониторинга проводимой терапии и более корректной ИТ различных онкологическихзаболеваний с учетом их влияния на данные клетки.68Глава II. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ2.1. Характеристика клинического материалаВ основе работы лежит анализ клинико-диагностических данных и результатов лечения 339 пациентов.
В частности, в исследование включены 279 больных с онкологическими заболеваниями, контрольную группу составили 60условно здоровых добровольцев (доноров) старше 18 лет. Все пациенты проходили обследование или находились на лечении в Медицинском радиологическомнаучном центре им. А.Ф. Цыба – филиал ФГБУ «Национальный медицинскийисследовательский центр радиологии» Минздрава России (далее Центр) с 2006по 2016 гг. Кровь здоровых доноров забиралась из отделения трансфузиологииЦентра. Исследование проводили в соответствии с Хельсинкской декларациейВсемирной ассоциации «Этические принципы проведения научных медицинских исследований с участием человека».Так как работа состояла из нескольких этапов, то больные были разделены на группы в соответствии с дизайном исследования (рис.
7).IВыявление дисбалансапоказателей иммунитета(MICA,субпопуляционный составлимфоцитов, маркерыактивации, цитокины)(n=200, контроль n=60)IIIIIСоздание клеточноймодели активациилимфоцитовПроведениеадоптивнойиммунотерапиицитотоксическимилимфоцитами(n=79)(IL-2, IL-15,жизнеспособность,функциональнаяактивность)(n=25, контроль n=10 )IVИммуномониторингпоказателей до и после АИТ(MICA, субпопуляционныйсостав лимфоцитов,маркеры активации,цитокины) (n=79)Рисунок 7.
Дизайн исследования.69I – На первом этапе проводили выявление дисбаланса показателей иммунитета у 200 онкологических больных до проведения специфического лечения основного заболевания. Для сравнения показателей использовали кровь 60здоровых доноров.II – Для разработки метода активации лимфоцитов использовали периферическую кровь 25 онкологических больных, которым в последующем былапроведена адоптивная иммунотерапия (АИТ) и 10 здоровых доноров (n=35).III – Для проведения АИТ активированными лимфоцитами в исследование включены 79 онкологических больных на различных этапах противоопухолевой терапии (n=79).IV – С целью проведения мониторинга иммунологических показателейосуществлялся забор крови у этих же 79 онкологических больных с различными злокачественными новообразованиями на этапах до и после АИТ (n=79).2.1.1.
Характеристика пациентов по изучению иммунологическихпоказателей кровиВ исследование для оценки дисбаланса иммунологических параметровбыли включены 200 онкологических больных в возрасте от 21 до 85 лет. Средний возраст больных составил 53 года (медиана 59 лет). Среди больных мужчин было 139 (69,5%), а женщин – 61 (30,5%). У всех больных данной группыне было предшествующего противоопухолевого лечения (первичные больные). Также у этих больных не было в анамнезе других онкологических заболеваний. Все больные были разделены на подгруппы в зависимости от нозологии опухолевого процесса (таблица 1). В контрольную группу данного этапаисследования были включены 60 практически здоровых доноров.
Образцы периферический крови были взяты у них в отделении трансфузиологии Центра.70Таблица 1Распределение онкологических больных по нозологиям для оценки сывороточного уровня молекул MICA№Группы больных12345678910Рак щитовидной железыРак мочевого пузыряРак почкиРак тела или шейки маткиРак предстательной железыМеланомаРак языка или гортаниРак молочной железыКолоректальный ракРак желудкаВсегоКоличество больныхабс.%19106121643111153192009,5536821,55,55,526,59,5100Характер и степень выраженности иммуносупрессии в клеточном и гуморальном звеньях иммунитета, в том числе субпопуляционный состав лимфоцитов периферической крови и уровень цитокинов среди 200 больных с солидными опухолями были оценены у 83 пациентов из двух различных по иммуногенности нозологических групп.
В первую группу включены 45 больныхмеланомой кожи IIа-IV стадии в возрасте от 26 до 75 лет (медиана 56 лет), 30женщин и 15 мужчин. Во вторую группу были включены 38 первичных больныхс гистологически подтвержденным диагнозом – колоректальный рак (КРР) в возрасте от 42 до 88 лет (медиана 63 года), 18 женщин и 20 мужчин. Распределениебольных по клиническим стадиям заболевания согласно международной классификации по TNM (TNM Classification of Malignant Tumours – 7 edition) представлены в таблице 2.
Наименьшее число пациентов было с I стадией, наибольшее с III стадией. Общее число больных III-IV клинической стадии заболевания, т.е. с регионарными и отдаленными метастазами составило 55 больных,т.е. 62,3% пациентов, включенных в исследование по обнаружению дисбаланса показателей гуморального и клеточного иммунитета и выявления иммуносупрессии.71Таблица 2Распределение больных по клиническим стадиям заболевания для выявления дисбаланса показателей иммунитета№Стадия1234IIIIIIIVИтогоМеланомаабс.%817,83168,9613,445100Колоректальный ракабс.%615,81436,81026,3821,138100Всего, (%)абс.%67,22226,54149,41416,983100У всех 83 больных были оценены иммунологические показатели клеточного звена иммунитета (субпопуляционный состав лимфоцитов, фенотип В-, Тлимфоцитов, Treg, NKT-и NK-клеток периферической крови и маркеры активации (HLA-DR, CD38, CD69, CD314 (NKG2D), CD25, CD95). В дополнение кэтому для характеристики гуморального звена иммунитета у этих же больных вработе оценен уровень цитокинов (TNF-α, IFN-α, IFN-γ, IL-2, IL-10).Обследование больных с целью установки диагноза и стадиизаболеванияпроводилосьинструментальныхсметодов:использованиемрентгенографиястандартныхлегких,клинико-ультразвуковоеисследование органов брюшной полости и периферических лимфатическихузлов,гастро-исследованиеиколоноскопия,биопсийногоцитологическоематериала,игистологическоеклинико-лабораторныеметодыисследования.
Для уточнения стадии заболевания и дифференциальнойдиагностики некоторым больным по показаниям выполняли компьютернотомографические методы исследования, в том числе совмещенные срадиоизотопными методами (ОФЭКТ/КТ и ПЭТ/КТ), а также магнитнорезонансную томографию.722.1.2. Характеристика пациентов, получивших адоптивнуюиммуннотерапиюВ клиническое исследование по применению АИТ активированными ЦЛбыли включены 79 больных с морфологически подтвержденным онкологическим заболеванием, которые дали согласие на участие в исследовании и подписали информированное согласие.Данной части исследования предшествовало пилотное поисковое исследование, в котором был разработан, апробирован и оценен на переносимостьметод адоптивной иммунотерапии, как составляющая комбинированного икомплексного лечения онкологических больных.
Метод АИТ был первоначально апробирован у 15 больных с различными солидными опухолями в возрасте от 25 до 79 лет (медиана 57 лет). Женщин было 6, мужчин – 8 человек(таблица 3).Таблица 3Характеристика больных, у которых проводили апробацию АИТ№123456789101112131415Больные,ПроведенноеЗаболевание ПолTNMСтадиявозрастлечениеВ., 60РЛжТ2N1М1IVПХТТ., 50РМЖжT4N1M0IVЛТ, ХТ, ФДТЕ., 79РМЖжT4N0M0IIIbНе былоШ., 59ПКРм pT3aN0M1IVОЛ., 55ПКРмТ3aN0M1IVОС., 66ПКРмТ3aN0M1IVОБ., 57ПКРжT3aN1M1IVО, ХТА., 53РПЖмT3N1M0IIbО, ПХТШ., 47РПЖмT4NхM1IVО, ПХТА., 45РПЖжT4NхM1IVПХТЧ., 79РПЖжT4N1M1IVЛТВ., 25РЖмT3N1M0IIbО, ПХТ, ФДТИ., 63РЖмT3N1M0IIbПХТЧ., 46РПмT4bN1M0IVbО, ЛТ, ПХТЛ., 59РПмT3N1M0IIIbЛТПримечание: РЛ - рак легкого, РМЖ - рак молочной железы, ПКР - почечно-клеточныйрак, РПЖ - рак поджелудочной железы, РЖ - рак желудка, РП - рак пищевода.
О – операция,ЛТ – лучевая терапия, ПХТ – полихимиотерапия, ФДТ – фотодинамическая терапия.73Только у 1 больного ПКР состояние было оценено как ECOG-0, у 5 больных – ECOG-1, у 6 больных – ECOG-2 и у 3 больных – ECOG-3, которые былиспособны лишь к ограниченному самообслуживанию. Таким образом, большая часть пациентов 9 (60%) имели ECOG-2 и -3 и половину времени бодрствования проводили в постели, что свидетельствовало о снижении качестважизни.После завершения пилотного исследования, на следующем этапе нашейработы были оценены результаты проведения АИТ.
Во данную часть исследования по АИТ были включены 64 больных: 13 больных колоректальным раком(КРР) (рак прямой кишки у 9 больных, сигмовидной у 3 , анального канала у 1больного) и 51 больной меланомой кожи. Данные представлены в таблице 4.Таблица 4Характеристика больных, принимающих участие в исследовании свключением АИТ активированными цитотоксическими лимфоцитамиХарактеристикаКоличество больных, (%)Женщины / МужчиныМедиана возраста, интервал, летСтадия заболевания, абс. / %IIIIIIIVНаличие метастазов или первичного очага, абс. / %Предшествующее лечение: абс. / %ХирургическоеХимиотерапияКомплексноеКомбинированноеНе проводилосьСреднее время наблюдения, мес.
/интервалМедиана времени наблюдения, мес.НозологияКРРМеланома13 (37,8)51 (62,2)1,6 / 11,4 / 154 (40–78) 53 (26–82)74Всего64 (100)38 / 2653 (26–82)1 / 7,72 / 15,46 / 46,24 / 30,809 / 17,636 / 70,66 / 11,81 / 1,611 / 17,242 / 65,610 / 15,69 / 69,235 / 68,644 / 68,8001 / 7,711 / 771 / 7,719,4±13,2(3-37)253 / 5,92 / 3,935 / 68,611 / 21,6021,9±13,3(1-51)243 / 4,72 / 3,136 / 56,322 / 34,41 / 1,620,6±13,2(1-51)24Большинство больных (52 человека (81,3%)) находились на III и IV клинической стадии заболевания.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
