Диссертация (1139542), страница 9
Текст из файла (страница 9)
[365] Kanazawa с соавторами продемонстрировали, что нейтрофилы,изолированные из периферической крови пациентов с астмой, генерируютдостоверно более высокие уровни АФК, чем клетки здоровых субъектов, чтокоррелировало со степенью бронхиальной гиперчувствительности на47ингаляции метахолина и с тяжестью заболевания. На основании этогоавторами сделан вывод о возможном прямом или косвенном участиисвободных радикалов в модуляции воспаления дыхательных путей приастме. [310]Имеются также убедительные доказательства усиления способности кгенерации активных метаболитов кислорода и азота изолированнымиэозинофилами, выделенными из периферической крови, лаважной жидкости,индуцированной мокроты, бронхиальных биоптатов пациентов с астмой.[335,356]Эозинофилы, альвеолярные макрофаги и нейтрофилы, выделенные излаважной жидкости пациентов с астмой, продуцируют больше реактивныхметаболитов, чем те же клетки из лаважной жидкости здоровых.
Висследовании Шестовицкого В.А. с соавторами продемонстрировано, что упациентов с БА на фоне купирования тяжелого обострения заболеваниянаблюдается достоверное по сравнению с контролем усиление метаболизмаАФКвклеткахпромывныхводбронхов,определяемоеметодомхемилюминесценции. [140] В исследованиях Болевича С.Б., Даниляк И.Г.,Когана А.Х. неоднократно продемонстрировано усиление генерации АФКлейкоцитами (преимущественно в системах цельной крови) пациентов с БАпо сравнению с контролем. [52, 17]В то же время данные, приводимые в исследованиях Дидковского Н.А.и Владимирова Ю.А.
с соавторами, демонстрируют, что исходные различия вуровне генерации АФК гранулоцитами цельной крови у пациентов с астмойи здоровыми имеют лишь характер тенденций. [54] В исследованииДаировой Р.А и Геппе Н.А. с соавторами установлено, что у детей с БАуровень генерации АФК изолированными лейкоцитами крови, определяемойметодом ХЛ, в период ремиссии соответствовал аналогичному показателюздоровых, в «послеприступном» же периоде заболевания достовернопревышал аналогичные показатели как у здоровых, так и у пациентов састмой в периоде ремиссии.
Данные различия были значимы при48взвешивании лейкоцитов в забуференном физиологическом растворе, привзвешивании же лейкоцитов в аутентичной плазме данные различиянивелировались, что расценивалось авторами как влияние антиоксидантнойактивности плазмы. [48]В исследовании Сажиной Н.А. исследована способность к генерацииАФК лейкоцитами крови у детей раннего возраста, больных БА. Авторомустановлено, что для периода обострения заболевания характерен достоверноболее высокий уровень генерации АФК лейкоцитами по сравнению сгруппой контроля. Уровень ХЛ лейкоцитов коррелировал с тяжестьюзаболевания и снижался в периоде ремиссии, оставаясь все же выше уровняздоровых детей. [123]Таким образом, в большинстве исследований отмечается усилениеспособности гранулоцитов у пациентов с астмой по сравнению со здоровымипродуцировать повышенное количество активных метаболитов кислорода,особенно в период обострения заболевания.
Не столь однозначные данныесостояния данной генерации имеются по отношению к периоду ремиссииастмы. Не оценена также и потенциальная возможность использованияданных тестов для мониторинга бронхиальной астмы. Последнее,разумеется, не представляется достаточно перспективным для использованияв широкой клинической практике, так как методы извлечения эффекторныхклеток для исследования в них процессов респираторного взрыва являютсяинвазивными и трудоемкими, но данные аспекты важны для пониманияприроды бронхиальной астмы и закономерностей ее течения.Трансформациябиомолекулпод воздействиемрадикальногостресса у пациентов с астмой. При астме наблюдается повышениесодержания оксидантов в плазме, включая целый ряд токсичных метаболитовкислорода, таких как супероксид-радикал, перекись водорода, гипохлорнаякислота и гидроксил-радикал, а также активных метаболитов азота.
[224, 280,243]Вышеуказанныекомпонентыкоротко-живущи,чтозатрудняетиспользование их для диагностики радикального стресса при астме. В свою49очередьусилениепроцессовстрессасопровождаетсяповреждением липидов, белков, ДНК. [168] И именноэти молекулы,подвергшиесявесьмавоздействиюрадикальногоактивныхрадикалов,часторассматриваются в качестве маркеров радикального стресса при БА.Наибольшее распространение имеют методы, основанные на регистрацииконечных и промежуточных продуктов перекисного окисления липидов итрансформацииихподвлияниемактивныхрадикалов:малоновогодиальдегида, 8-изопростана, оснований Шиффа, этана, пентана и другихсоединений. [161]ДетекцияпродуктовлипопероксидацииприБАпроводитсявразличных биосубстратах, что позволяет оценить как системные изменения ворганизме пациентов с астмой, так и органоспецифические процессы.
Дляизучения системных процессов используются чаще всего компоненты крови,реже слюна и моча, для исследования органоспецифических процессов –выдыхаемый воздух, конденсат выдыхаемого воздуха, лаважная жидкость,индуцированная мокрота.Изопростан.Изопростаныарахидоновойкислоты,радикальногостресса.–стабильныеявляющиесяДляБАмаркерамихарактерномолекулыокислениялипоперокисдацииповышениеисодержанияизопростанов в различных биологических средах.[313, 415] Определениеизопростановвнастоящеевремяпроводитсяпреимущественноиммуноферментным методом, при этом стоимость расходных материаловдостаточно высока.
Следует также отметить, что концентрация изопростановв КВВ у здоровых составляет 3.8±0.6 pg/ml по данным Shahid исоавторов[443], в моче 1.9±0.6 pg/ml по данным Wedes S.H. и соавторов[490], в то время как многие из производители тест-систем для определенияизопростанов иммуноферментным методом определяют чувствительностьметода в 7 pg/ml (http://www.biocompare.com). Данные обстоятельства указываютна преждевременность внедрения данных методов детекции воспаления вклиническую практику в качестве предикторов контроля БА.50Этан и пентан – летучие соединения, присутствующие в выдыхаемомвоздухе здоровых и пациентов с астмой в сверхмалых концентрациях. Этанявляется продуктом окисления n-3 ненасыщенных жирных кислот, пентан n-6 ненасыщенных жирных кислот.
Уровень этана у пациентов с БА, неполучающих лечения глюкокортикостероидами, достоверно выше, чем уздоровых. [400]. Уровень выдыхаемого пентана повышается у пациентов приобострении БА, достоверно уменьшается по мере купирования обострения, ив период ремиссии соответствует уровню здоровых. [393] Определение этанаи пентана при типичных концентрациях в выдыхаемом воздухе не являетсядоступным методом исследования в современной клинической практике.[339]Малоновыйдиальдегид.Изучениепродуктовлипопероксидациинеоднократно выполнялось у пациентов с астмой и по определениюсодержания малонового диальдегида (МДА) – конечного продукта окисленияи декомпозиции полиненасыщенных жирных кислот, содержащих три иболее двойных связей.
Многие авторы указывают, что у пациентов с астмойобнаруживаются более высокие, чем в контроле, уровни малоновогодиальдегида как в плазме, так и в конденсате выдыхаемого воздуха. [444,395, 159] В то же время в исследовании Сажиной Н.А. не выявленодостоверных различий в концентрации МДА в сыворотке крови детейраннего возраста с астмой в различные периоды заболевания с аналогичнымипараметрами здоровых детей того же возраста. [123]Некоторые авторы подвергают критике определение концентрациималонового диальдегида приисследованиях оксидативного стресса всистемах in vivo.
Данными исследователями отмечается, что МДА чаще всегоопределяется в реакции с тиобарбитуровой кислотой (ТБК), в сочетании скоторой он формирует соединение МДА-ТБК, количественно определяемое сиспользованиемспектрофотомерии.Однакоимеютсясомнениявспецифичности и воспроизводимости данного метода исследования. Помимовозможных оптических помех, привносимых гемоглобином, билирубином и51т.д., следует иметь в виду, что МДА репрезентативен менее чем для 1%пероксидов.[244] Описанные выше методические недостатки частичнонивелируются при применении прямой детекции МДА с использованиемжидкостной хроматографии, но этот метод является существенно болеесложным и дорогостоящим.
[338]Таким образом, определение хроматографическими методами молекул,претерпевших биотрансформацию под воздействием радикального стресса, вкачестве предикторов течения БА, информативно, но является сложным идорогостоящим. Это затрудняет применение данных параметров в условияхреальной клинической практики.Антиоксидантная (антирадикальная) защита у пациентов с астмой.Система антиоксидантной и антирадикальной защиты в легких сложна имногокомпонентна, включает в себя антиоксиданты с малым молекулярнымвесом,протеины,связывающиебелки,гликопротеинымокроты,испециальные антиоксидантные ферменты, что представлено в Таблице 1.5.2.[323, 212, 324]Таблица 1.5.2. Маркеры антиоксидантной защиты у пациентов с БА.МаркерАктивностьПроцессСубстратыСОД, Редуцирование радикалов до менее Эритроциты, плазма, клеткикаталазы, глутатион - активных молекуллаважной жидкости,пероксидазыВитамин СВодорастворимыйинактивацияАФК,антиоксидант, Лаважнаяжидкость,регенерация Плазма, клетки кровиокисленного токоферолаВитамин ЕЖирорастворимыйантиоксидант, Эритроциты,инактивация АФК в мембранахКаротиноидыТЕАСплазма,лаважная жидкостьЖирорастворимые антиоксиданты, Плазма/сыворотка,инактивация АФК в мембранахлаважной жидкостиОбщая антиоксидантная активностьПлазма/сывороткаклетки52В ряду процессов антиоксидантной и антирадикальной защиты важнаяроль принадлежит исследованию следующих компонентов:1.
Ферментныесистемы:глютатион-пероксидаза,супероксиддисмутаза, каталаза и активность данных ферментов;глютатион (общий, окисленный и редуцированный)2. Витамины водо- и жирорастворимые, в том числе поступающие ворганизм экзогенно: Витамин С (аскорбиновая кислота), ВитаминЕ (токоферол), Витамин А (каротиноиды)3. Общая антиоксидантная активность: ТРОЛОКС – эквивалентантиоксидантной емкости, Хемилюминесцентные подходыопределения общей антиоксидантной активностиИмеются многочисленные свидетельства изменения антиоксидантнойзащиты у пациентов с астмой. [377] Однако, несмотря на большой объемисследований в данной области, до настоящего времени нет ясности взакономерностях изменения антиоксидантной и антирадикальной защитыпри БА.
[353] Сообщается о снижении общей антиоксидантной емкости приБА по сравнению со здоровыми.[377] Однако при этом в однихисследованиях данное снижение по сравнению со здоровыми былодостоверным [419], в других имело характер тенденции. [375]Результаты исследований ферментных систем, участвующих вантирадикальной защите, противоречивы. Сообщается о повышении общегоглутатиона у пациентов с астмой, по сравнению с контролем, в крови и влаважной жидкости. [375] В то же время различий по содержанию общегоглутатиона в мокроте и клетках респираторного тракта по сравнению сконтролем не выявлено.[213]Аналогичная ситуация с исследованиемокисленного глутатиона.[334] В одних исследованиях выявлено егоповышение у пациентов с астмой, [314] тогда как в других исследованияхразличий с контролем не найдено.[213] Часть исследователей сообщает оснижении активности глутатион-перокисдазы в эритроцитах, лейкоцитах,53тромбоцитах и плазме периферической крови у пациентов с астмой посравнению с контролем.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
