Диссертация (1139542), страница 13
Текст из файла (страница 13)
Н. Новгорода, врач функциональной диагностики БолдоваМ.В.). Исследование ВСР проводилось в клино-ортоположении, в положениисидя, а так же в ходе дозированной физической нагрузки и после еевыполнения.Участидетейбылаисследованаобщаяфизическаяработоспособность. Запись сердечного ритма для исследования ВСРпроизводилось как с помощью «монитора сердечного ритма РС-3» (SigmaSport, Германия) – рис.1, так и с помощью монитора МАР-02 (Кардекс,Нижний Новгород).Для выполнения задачи мониторирования сердечного ритма в периодвыполнения физической нагрузки наиболее удобным, простым и доступнымявляется комплект устройства “Монитор сердечного ритма РС-3” (“SIGMASPORT” Германия).
Точность измерения временных интервалов составляетне менее 5%. Монитор состоит из нагрудного ремня – передатчика, инаручного дисплея на эластичном ремешке (Рисунок 2.1).Нагрудный передатчик располагается непосредственно под груднымимышцами. Логотип при этом располагался должен находиться точно поцентру грудной клетки (Рисунок.
2.2).7212Рисунок.2.1. Монитор сердечного ритма РС-3. 1 – дисплей; 2 нагрудный ремень-передатчик.Рисунок 2.2. Расположение передатчика на теле ребенка.Продолжительность записи сердечного ритма составляла не менее 5минут. При анализе более длительных отрезков проводилась разбивка записина 5-минутные интервалы. Регистрация сердечного ритма проводилась вположении ребенка лежа на спине после десятиминутного отдыха, допроведения различного рода травмирующих манипуляций. Повторныезаписи ВСР снимались в одни и те же часы. Анализ показателейВСРпроизводился с помощью программы «Вариабельность сердечного ритма»,разработанной проф.
Игнатовым С.К. и доц. Ошевенским Л.В (ННГУ имН.И. Лобачевского) в соответствии с рекомендациями и стандартами 1996года. [59]временныеДанная компьютерная программа позволяетинтервалымеждусердечнымирегистрироватьсокращениями,между73комплексамизубцовQRSэлектрокардиограммы,проводитанализполученных значений параметров ВСР, представляет результаты анализа свыводом на экран монитора и на принтер. [59]При анализе параметров ВСР были использованы основные группыметодов обработки массива кардиоинтервалов, а именно:1. Статистические методы. Применяются для непосредственнойколичественной оценки ВСР в исследуемый промежуток времени. При ихиспользовании кардиоинтервалограмма рассматривается как совокупностьпоследовательных временных промежутков – интервалов RR. Наиболееважнымистатистическимихарактеристикамидинамическогорядакардиоинтервалов являются: SDNN - Standard Devation, NN – означает ряд нормальныхинтервалов “normal to normal ” с исключением экстрасистол.Представляет собой среднее квадратическое отклонение (СКО),выражаетсявмсвеличининтерваловRRзавесьрассматриваемый период RMSSD – квадратный корень из суммы квадратов разностивеличин последовательных пар интервалов NN (нормальныхинтервалов RR). NN5O – количество пар последовательных интервалов NN,различающихся более чем на 50 миллисекунд, полученное за весьпериод записи. PNN5O(%)–процентNN50отобщегоколичествапоследовательных пар интервалов, различающихся более чем на50 мс, полученное за весь период записи.2.
Спектральный анализ ритма. Он включает определение тотальноймощности спектра (TP) и ее составляющих: высокочастотного компонента (High Frequency - HF > 0.15 Hz), низкочастотного компонента (Low Frequency - LF от 0,15 до 0,04Hz) и74 очень низкочастотного компонента (Very Low Frequency - VLF,менее 0,04 Hz). [279]По данным спектрального анализа сердечного ритма вычисляетсяиндекс симпатовагального взаимодействия LF/НF.Исследование органоспецифических параметров воспаленияИсследование конденсата выдыхаемого воздуха.Исследования КВВ были выполнены на базе Института химии ННГУим Н.И.
Лобачевского (директор профессор Сулейманов Е.В.)Методика сбора конденсата выдыхаемого воздуха. Выдыхаемыйвоздухимеет 100%влажность,чтопозволяетполучатьконденсатвыдыхаемого воздуха (КВВ). Он представляет собой жидкость, котораяобразуется в результате охлаждения выдыхаемого воздуха и осаждения(конденсирования)настенкахиспользуемогоустройствадлясбораконденсата. В настоящем исследовании сбор конденсата проводилсястандартным методом с использованием R-tube (Respiratory Research, США),достоинством которого является достаточно высокая скорость сбораконденсата (1,0-1,5 мл за 10 минут) и исключение загрязнения конденсатаслюной.
[293]Сборконденсатапроводилсявположениисидяпослепредварительного полоскания полости рта кипяченой водой в режимесвободного дыхания. Испытуемый в спокойном состоянии дышал череззагубник в течение 5 – 10 минут (Рис. 2.3). При этом выдыхаемый воздухпроходил через охлаждаемую специальным рукавом пластиковую трубку, настенках которой оседал конденсат выдыхаемого воздуха.
Конструкция R-tubeисключает возможность загрязнения собираемого конденсата примесямислюны, что существенно повышает качество выполняемого исследования.75Объем получаемого КВВ составлял 2 мл.Собранный конденсатпереносился в количестве 1,0 мл в 2 одноразовые пробирки. В последующемпроводили измерение РН КВВ, определение в нем суммарного содержаниянитритов/нитратов,определениесодержанияпероксидаводорода.Исследования КВВ выполнены на базе Института химии ННШУ имН.И.Лобачевского (директор д.х.н.
профессор Сулейманов Е.В.) подметодическим руководством лаборатории клинической и экспериментальнойбиофизики (зав. лабораторией д.м.н. профессор Соодаева С.К.).Определение РН конденсата выдыхаемого воздуха. Определение рНКВВ проводили с использованием прибора рН METER – рН410 (Аквилон,Россия). РН-метрию КВВ проводили при стандартной температуре 22-24ГрадС непосредственно после сбора КВВ.
Затем образцы с конденсатомзамораживалив морозильной камере бытового холодильника притемпературе -18 ГрадС. Образцы хранили не более 14 дней. Затем проводилиборбатирование аргоном при скорости потока 250 мл/мин в течение 10 минутс целью деаэрации образцов конденсата, вытеснения из них углекислого газа,и устранения ацидификации образцов, обусловленной примесью СО2. Далеепроводили повторное измерение рН образцов вышеописанным методом.76Рисунок 2.3.
Сбор конденсата выдыхаемого воздуха с использованием Rtube.Определение суммарной концентрации метаболитов оксида азота(МОА) - нитратов и нитритов в конденсате выдыхаемого воздуха.Содержание стабильных метаболитов оксида азота (нитриты/нитраты) в КВВопределяли фотометрическим методом, основанном на восстановлениинитратов до нитритов посредством кадмиевого редуктора с последующимопределением этих ионов спектрофотометрическим методом с реактивомГрисса (Griess). [76, 262, 264, 268, 504].
В основе определения суммарногосодержания нитритов/нитратов в биосубстратах методом Griess лежатреакции диазотирования сульфаниловой кислоты и - нафтиламина собразованиемазокрасителякрасно-фиолетовогоцвета.Количествометаболитов NO в КВВ выражали в нмоль/мл.В работе использовались следующие реагенты:Стандартныйрастворнитратанатрия.Основнойраствор.Растворяют 0.8500 г NaNO3, высушенного при 105ºС, в 100 млдистиллированной воды.Рабочий раствор.Разбавляют 100 мкл основного стандартногораствора NaNO3 в 100 мл дистиллированной воды. Получают 100 мкМраствор нитрата натрия.Стандартныйрастворнитританатрия.Основнойраствор.Растворяют 0.6900 г NaNO2, высушенного при 105 º С, в 100 млдистиллированной воды.Рабочий раствор.
Разбавляют 100 мкл основного стандартного раствораNaNO2 в 100 мл дистиллированной воды. Получают 100 мкМ растворнитрита натрия.Буферныйраствор.Растворяют250гхлоридааммониявдистиллированной воде, прибавляют 25 мл концентрированного растворааммиака и разбавляют водой до 1 л.77Соляная кислота, 2 н раствор. К 830 мл дистиллированной водыдобавляют 170 мл соляной кислоты, плотностью 1.19 г/см3.Реактив Грисса, 0.6 %. Растворяют 0.6 г сухого реактива Грисса в 100мл дистиллированной воды.Раствор хлорида меди, 0.5 %. Растворяют 0.5 г CuCl2 чда в 100 млдистиллированной воды.Кадмий металлический, гранулированный.Спектрофотометр СФ – 26.Магнитная мешалка ММ2 А (Чехословакия).Ход анализа: Для омеднения редуктор опускали на 1 минут в раствор2н соляной кислоты, после чего помещали на 10-15 сек.
В 0.5 %-ный растворхлорида меди (II). Затем редуктор промывали в дистиллированной воде. Впробирку для редуктора добавляли пробу 0,9 мл, добавляли 0,1 мламмонийного буфера, т. е. соотношение проба : буфер соответствовало 9 : 1.Затем в пробирку помещали редуктор и осуществляли перемешивание втечение 5 минут на магнитной мешалке при комнатной температуре. Дляопределения содержания нитритов в пробе к 1 мл полученного растворадобавляли равное количество 0.6 % - ого раствора реактива Грисса. Развитиеокраски происходит в течение 10 мин., далее пробу фотометрировалиотносительно контрольного раствора при длине волны 540 нм (фильтр № 6для ФЭК) в кювете с длинной оптического пути 1 см.Контрольным являлся раствор, полученный добавлением к 1 млраствора реактива Грисса 1 мл дистиллированной воды.Содержание нитратов в пробе определяют по градуировочномуграфику, построенному в диапазоне 1-50 мкМ нитратов.Градуировочный график.Градуировочный график строится попоказателям оптической плотности (А) стандартных растворов нитратов.
Дляэтого готовят стандартные растворы нитрата.1 мл 10 мкМ NaNO3 + 9мл Н2О = 1мкМ NaNO33 мл 10 мкМ NaNO3 + 7мл Н2О = 3мкМ NaNO3785 мл 10 мкМ NaNO3 + 5мл Н2О = 5мкМ NaNO31 мл 100 мкМ NaNO3 + 9 мл Н2О = 10 мкМ NaNO32 мл 100 мкМ NaNO3 + 8 мл Н2О = 20 мкМ NaNO33 мл 100 мкМ NaNO3 + 7 мл Н2О = 30 мкМ NaNO35 мл 100 мкМ NaNO3 + 5 мл Н2О = 50 мкМ NaNO3К 0,9 мл стандартного раствора нитрата добавляют 0,1 мл буфера ипомещают в редуктор. Дальнейшую обработку проводят аналогичноисследуемому веществу (см. выше). По полученным данным строятградуировочный график зависимости “оптическая плотность – суммарноесодержание нитритов и нитратов”.Исследование содержания оксида азота в выдыхаемом воздухе. Внастоящемисследованиипримененпринципиальноновыйметодисследования содержания NO в выдыхаемом воздухе, основанный нарегистрацииNO полупроводниковыми химическими сенсорами.
[49, 60]Предел обнаружения NO при использовании данного метода составляет науровне 5 ppb.Методика измерения и пробоотбора. Отбор пробвоздуха дляпоследующего определения содержания в нем NO производился в режимеспонтанного дыхания в майларовые мешки, что исключало сорбцию на нихоксида азота. Пациент в положении сидя производил спонтанный вдохатмосферного воздуха ртом через специальный загубник, присоединенный кфильтру NO/NO2 (Ionics Instruments, AFL 14010-01), что позволяло устранитьпримесь атмосферных оксидов азота во вдыхаемомвоздухе.В случаеотбора бронхиального воздуха пробоотбор осуществлялся через загубник,присоединенный к системе напуска с мешком-коллектором. При отбореназальных проб выдох осуществлялся аналогично через назальные канюли,снабженные системой пневматической подкачки для плотной обтурацииносовых ходов.
Перед мешком-коллектором воздух проходил черезцифровой расходомер (модель TSEC), что позволяло определять скорость79потока и точно дозировать объем отбираемой пробы. Данные с расходомерапоступали на вход компьютера, и выводились на экран в графическом виде,что позволяло реализовать обратную связь (принцип “biofeedback”) иоптимизировать дыхательный маневр испытуемого.Концентрация NO измерялась с использованием метода сенсорнойдетекции и созданного для этой цели газоанализатора. Конструкция приборапозволялапроизводитьодновременныймониторингтемпературы,влажности, концентрации NO и O2.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
