Диссертация (1139532), страница 33
Текст из файла (страница 33)
НОВАТОРСКИЕ ПОДХОДЫ К ПЕРСОНАЛИЗАЦИИНАЗНАЧЕНИЯ ПРЕПАРАТОВ МЕТАБОЛИЧЕСКОГО РЯДАНА ОСНОВАНИИ ИЗУЧЕНИЯ ИХ ИНДИВИДУАЛЬНОГОВЛИЯНИЯ НА МИТОХОНДРИИ И ГЕНОМ ЧЕЛОВЕКАНами были разработаны и оформлены в виде изобретений две методики,позволяющие определить индивидуальную чувствительность митохондрий игенома человека на лекарственные препараты метаболического ряда в тестах invitro.
Для этих целей использовали методы конфокальной микроскопии и ДНКкомет, подробно описанные в главе 2.Обнаружили два варианта реагирования митохондрий лейкоцитовпациентов с ИБС на введение метаболических корректоров - в виде ихактивации либо угнетения. У одного и того же пациента наблюдали различнуюреакцию митохондрийнавведениеразныхлекарственныхпрепаратовметаболического ряда.Проводили сравнительный анализ между группами пациентов, у которыхвведение метаболического корректора вызывало активацию или угнетениефункциональной активности митохондрий.
Критерием разделения больных нагруппы явился показатель прироста флюоресценции митохондрий послевведения препаратов (краситель – пирен): для триметазидина (Таблицы 6.1 и6.2), мельдония (Таблицы 6.3 и 6.4), фосфокреатина (Таблицы 6.5 и 6.6) ицитофлавина (Таблицы 6.7 и 6.8).
При значении показателя приростафлюоресценции митохондрий после введения препарата>0 делали вывод обактивации митохондрий, а при значении прироста флюоресценции<0 делаливывод об угнетении митохондрий под влиянием лекарственного препарата.Получили следующие результаты:221Таблица 6.1Влияние триметазидина на митохондрии человекаПоказательАктивирует митохондрии,Угнетает митохондрии,n=27n=29Микроальбуминурия, г/л0,015±0,006***0,175±0,015***АСТ, МЕ23,38±1,42*29,78±1,54*Калий крови, ммоль/л4,31±0,11*4,73±0,14*Суммарный вольтаж зубца21,09±1,84**14,50±1,22**R в стандартныхотведениях, ммСоотношение0,27±0,07*0,96±0,23*кортизол/инсулинсыворотки кровиСоотношение2,25±2,2512,89±5,21цАМФ/цГМФ сывороткикровиУровень эндотелиальной1481,01±524,65393,14±107,67синтазы окиси азота влизате эритроцитов, пг/млАДФ эритроцитов,315,29±4,96*300,55±4,06*мкмоль/л2,3ДФГ эритроцитов,6,08±0,13**6,64±0,13**мкмоль/млДНК: отрицательный2,40±1,28*9,75±2,62*контроль, количествоповреждённых клеток, %Примечание.
Достоверность различий оценивали по t-критерию Стьюдента *p<0,05; **p<0,01; ***p<0,001.Таблица 6.2.Влияние триметазидина на митохондрии человекаАктивирует митохондрии,Угнетает митохондрии,n=27n=29Флюоресценция267,99/463,56/митохондрий, окраска249,20 (181,10; 338,90)***437,00 (367,25; 517,65)***пиреном, усл.ед.ДНК: отрицательный0,03/0,14/контроль, индекс ДНК0,06 (0,00; 0,49)*0,14 (0,03; 0,43)*кометПримечание.
Числитель - среднее арифметическое, знаменатель - медиана, 25% и 75% квартиль.Достоверность различий оценивали по U-критерию Манна-Уитни *p<0,05; ***p<0,001.ПоказательОбнаружили следующие условия активации митохондрий под влияниемтриметазидина: нормальная функция печени и почек, средний уровень калия в222крови,нормальныйвольтажнаЭКГ,низкиезначениясоотношенийкортизол/инсулин и цАМФ/цГМФ в сыворотке крови, высокий уровеньэндотелиальной синтазы окиси азота в лизате эритроцитов, исходно низкаяактивность митохондрий, наличие признаков гипоэргоза при достаточномколичестве энергетических субстратов (АДФ), небольшая степень тканевойгипоксии по значению 2,3ДФГ эритроцитов и небольшая повреждённость ДНКв исходном статусе.
Введение триметазидина влечёт за собой угнетениемитохондрий при условии: нарушения функции печени и почек, тенденции кповышению уровня калия в крови, наличия признаков миокардиодистрофии наЭКГ, высоких показателей соотношений кортизол/инсулин и цАМФ/цГМФ всыворотке крови, низкого уровня эндотелиальной синтазы окиси азота в лизатеэритроцитов, исходно высокой активности митохондрий с отсутствиемпризнаков гипоэргоза, выраженной тканевой гипоксии по значению 2,3ДФГэритроцитов и высокой степени повреждённости ДНК в исходном статусе.Таблица 6.3.Влияние мельдония на митохондрии человекаПоказательАктивируетУгнетает митохондрии,митохондрии, n=26n=30Микроальбуминурия, г/л0,015±0,006***0,175±0,015***Креатинин крови ммоль/л85,48±3,0695,29±4,34АСТ, МЕ23,60±1,22**31,00±1,21**Суммарный вольтаж зубца R в19,42±1,5115,40±1,69стандартных отведениях, ммКАГ: ПМЖА, уровень35,83±9,49*70,00±9,89*стенозирования, %Кортизол/инсулин сыворотки крови0,37±0,110,99±0,23цАМФ/цГМФ сыворотки крови3,11±1,5614,91±6,20Уровень эндотелиальной синтазы1876,92±726,56440,01±94,59окиси азота в лизате эритроцитов,пг/млАДФ эритроцитов, мкмоль/л312,83±4,95302,25±4,442,3ДФГ эритроцитов, мкмоль/мл6,17±0,14*6,55±0,11*ДНК: отрицательный контроль,2,40±1,28*9,75±2,62*количество повреждённых клеток, %Примечание.
Достоверность различий оценивали по t-критерию Стьюдента *p<0,05;** p<0,01; ***p<0,001.223Таблица 6.4.Влияние мельдония на митохондрии человекаПоказательАктивирует митохондрии,Угнетает митохондрии,n=26n=30Стадия ХСН1,52/1,11/2,00 (1,00; 2,00)1,50 (0,00; 2,00)ФК ХСН по NYHA2,12/1,32/3,00 (1,50; 3,00)**2,00 (0,00; 2,00)**Флюоресценция митохондрий,286,32/441,16/окраска пиреном, усл.ед.268,85 (180,25; 379,93)***435,55 (333,13; 517,18)***ДНК: отрицательный контроль,0,03/0,14/индекс ДНК-комет0,08 (0,00; 0,48)*0,12 (0,03; 0,37)*Примечание. Числитель - среднее арифметическое, знаменатель - медиана, 25% и 75% квартиль.Достоверность различий оценивали по U-критерию Манна-Уитни *p<0,05; ** p<0,01;***p<0,001.Обнаружили следующие условия активации митохондрий под действиеммилдроната:наличиепрогрессирующейхроническойсердечнойнедостаточности, нормальная функция печени и почек, нормальный вольтаж наЭКГ (отсутствие миокардиодистрофии), небольшая степень стеноза коронарныхартерий, низкие значения соотношений кортизол/инсулин и цАМФ/цГМФ всыворотке крови, высокий уровень эндотелиальной синтазы окиси азота влизате эритроцитов, исходно низкая активность митохондрий, наличиепризнаков гипоэргоза при достаточном количестве энергетических субстратов(АДФ),небольшаястепеньтканевойгипоксиипозначению2,3ДФГэритроцитов и небольшая повреждённость ДНК в исходном статусе.
Мельдонийспособен угнетать митохондрии в тестах in vitro при наличии следующихусловий: начальные стадии ХСН, тенденция к нарушению функции печени ипочек,тенденциясущественнаякразвитиюстепеньмиокардиодистрофиинамиокардиодистрофии постенозаЭКГ,коронарныхвысокиеданнымартерий,показателиЭКГ,признакисоотношенийкортизол/инсулин и цАМФ/цГМФ в сыворотке крови, низкий уровеньэндотелиальной синтазы окиси азота в лизате эритроцитов, исходно высокаяактивность митохондрий с отсутствием признаков гипоэргоза, выраженная224тканевая гипоксия по значению 2,3ДФГ эритроцитов и высокая степеньповреждённости ДНК в исходном статусе.Таблица 6.5Влияние фосфокреатина на митохондрии человекаПоказательАктивируетУгнетаетмитохондрии, n=27митохондрии, n=29Курение: количество сигарет в сутки1,90±0,90**5,48±1,86**Микроальбуминурия, г/л0,05±0,030,16±0,03Креатинин крови ммоль/л81,64±3,64**97,17±3,44**ЭхоКГ: КСО ЛЖ, мл49,18±7,49*78,31±10,83*ЭхоКГ: КДО ЛЖ, мл120,40±8,31146,60±11,84ЭхоКГ: ФВ, %62,28±2,45*53,22±3,22*ЭКГ: смещение ST на … мм0,83±0,15*1,57±0,32*КАГ: ПМЖА, уровень стенозирования, %32,00±8,41*67,86±9,93*КАГ: средняя степень стеноза коронарных20,22±5,9937,05±6,79артерий, %Задержка дыхания на вдохе, сек.38,05±4,46*26,10±2,72*Уровень эндотелиальной синтазы окиси1486,58±554,96454,51±104,04азота в лизате эритроцитов, пг/млУровень индуцибельной синтазы окиси8,94±6,30*30,83±3,38*азота в лизате эритроцитов, нг/млДНК: отрицательный контроль,2,83±1,14*11,33±2,96*%количество повреждённых клеток, %Примечание.
Достоверность различий оценивали по t-критерию Стьюдента *p<0,05; **p<0,01; ***p<0,001.Таблица 6.6Влияние фосфокреатина на митохондрии человекаПоказательАктивирует митохондрии,Угнетает митохондрии,n=27n=29ЭхоКГ: нарушение локальной0,26/1,13/сократимости, баллы0,00 (0,00; 0,00)**1,00 (0,00; 2,75)**СОККН, усл. ед.2,47/3,42/0,38 (1,46; 3,31)*3,35 (2,00; 4,83)*Флюоресценция митохондрий,281,86/450,64/окраска пиреном, усл.ед.261,80 (181,10; 372,80)*** 434,10 (340,45; 517,65)***ДНК: отрицательный контроль,0,04/0,15/индекс ДНК-комет0,06 (0,02; 0,46)*0,10 (0,03; 0,40)*Примечание. Числитель - среднее арифметическое, знаменатель - медиана, 25% и 75% квартиль.Достоверность различий оценивали по U-критерию Манна-Уитни *p<0,05; ** p<0,01;***p<0,001.Условиями активации митохондрий под влиянием фосфокреатинаявились: отсутствие фактора курения, нормальная функция почек, сохранное225морфофункциональное состояние миокарда по данным ЭхоКГ, небольшаястепень ишемии миокарда, достаточно высокая стойкость организма ккислородной недостаточности,высокий уровень эндотелиальной синтазыокиси азота и низкий уровень индуцибельной синтазы окиси азота в лизатеклеток, исходно низкая активность митохондрий и невысокая степеньповреждённости ДНК.
Условиями угнетения митохондрий под влияниемфосфокреатина в тестах in vitro явились следующие: наличие фактора курения,тенденция к нарушению функции почек, расширение полостей сердца,тенденция к снижению фракции выброса левого желудочка, более выраженнаяишемиямиокарда,недостаточности,снижениестойкостиорганизмаккислороднойнизкий уровень эндотелиальной синтазы окиси азота ивысокий уровень индуцибельной синтазы окиси азота в лизате клеток, исходновысокая активность митохондрий и высокая степень повреждённости ДНК.Таблица 6.7Влияние цитофлавина на митохондрии человекаПоказательСуммарный вольтаж зубца R встандартных отведениях, ммКортизол/инсулин сыворотки кровицАМФ/цГМФ сыворотки кровиУровень эндотелиальной синтазыокиси азота в лизате эритроцитов,пг/млАДФ эритроцитов, мкмоль/л2,3ДФГ эритроцитов, мкмоль/млДНК: отрицательный контроль,количество повреждённых клеток, %Активируетмитохондрии, n=1522,75±2,79**Угнетает митохондрии,n=3314,71±1,160,25±0,09*2,25±2,251959,17±773,660,96±0,23*12,89±5,21395,72±90,55315,77±6,24*6,16±0,15*10,00±3,75*300,39±3,78*6,61±0,12*21,65±4,37*Примечание.
Достоверность различий оценивали по t-критерию Стьюдента *p<0,05; **p<0,01; ***p<0,001.226Таблица 6.8Влияние цитофлавина на митохондрии человекаПоказательАктивирует митохондрии,Угнетает митохондрии,n=15n=33ЭКГ: наличие признаков0,32/0,57/гипертрофии ЛЖ, баллы0,00 (0,00; 0,63)0,00 (0,00; 1,00)Флюоресценция митохондрий,242,15/430,32/окраска пиреном, усл.ед.234,60 (177,70; 319,60)***413,80 (330,95; 474,35)***Примечание. Числитель - среднее арифметическое, знаменатель - медиана, 25% и 75% квартиль.Достоверность различий оценивали по U-критерию Манна-Уитни *p<0,05; ** p<0,01;***p<0,001.Условиями активации митохондрий под влиянием цитофлавина в тестахin vitro явились: нормальный вольтаж на ЭКГ, низкие значения соотношенийкортизол/инсулин и цАМФ/цГМФ в сыворотке крови, высокий уровеньэндотелиальной синтазы окиси азота в лизате эритроцитов, исходно низкаяактивность митохондрий, наличие признаков гипоэргоза при достаточномколичестве энергетических субстратов (АДФ), небольшая степень тканевойгипоксии по значению 2,3ДФГ эритроцитов и небольшая повреждённость ДНКв исходном статусе.
Условиями угнетения митохондрий под влияниемцитофлавина явились: признаки миокардиодистрофии по данным ЭКГ, высокиепоказатели соотношений кортизол/инсулин и цАМФ/цГМФ в сыворотке крови,низкий уровень эндотелиальной синтазы окиси азота в лизате эритроцитов,исходно высокая активность митохондрий с отсутствием признаков гипоэргоза,выраженная тканевая гипоксия по значению 2,3ДФГ эритроцитов и высокаястепень повреждённости ДНК в исходном статусе.Исследование индивидуальной чувствительности генома пациентов кметаболическим корректорам в тестах in vitro показало наличие потенциальнойспособностиупрепаратовоказыватькакгенопротекторный,такигенотоксический эффекты. Критерием определения характера изменения ДНКявился показатель прироста индекса ДНК-комет: при его значении >0 делаливывод о генотоксичности препарата, т.е.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
