Lenindzher Основы биохимии т.3 (1128697), страница 76
Текст из файла (страница 76)
массой 3,4.10'. Что говорит о структуре ДНК такой результат? в) При расщеплении исхолной вирусной ДНК с помощью рсстриктируюшей эндонуклеазы Нра 1 из НаетпрЫ(из рагат~- (игпгае образуются три фрагмента с мол. массами 14. 1О», 07-10* и 13 10», которые можно раздслизь геяь-алек грофорезом. При совместном действии Есо К! и Нра 1 из исходной вирусной ДНК образуются четыре фрагмента. Самый большой из них имеет мол. массу 1,3.10», а самый маленький -06-!О». Фрагменты обозначают буквами в соответствии с их размером (А -самый большой). Какова молекулярная масса двух других фрагментов, образовавшихся при совместном действии Есо К! и Нро !? г) После часгичного (т.е. неполного) расщепления вирусной ДНК обоими ферментами из электрофорезической полосы, соответствующей фрагменту с мол.
массой 1,3.10», вьщелили ДНК и подвергли ее полному расщеплению с помогцью Нро 1. В результате получили три полосы, одна из которых обладала электрофоретической подвижностью, соотаетствующеи мол. массе 1,3 10", а лвс другие полосы соответствовали двум меньшим фрпмеитам. Составьте возможную рестрикционпую карту фрагментов А, Б, В и Г вируснои ДНК и укажите точки расщепления. д) При полном расщеплении ДНК мутант- ного штамма этого же животного вируса рестриктнрующими эндонуклеазами Его К! и Нра ! образуются только три фрагмента с мол. массами 2,1 10», 06 10» и 07.10". Каково простейшее объяснение мутации, приведшей к изменению картины расщепления? 6. Фгнкцноналвлыг домены а беакак.
Есть основания считать, что белки эукариот со- стоят из функциональных доменов, т.е. из независимых областей, каждая из которых определяет какое-либо свойство белка или его функцию. Было высказано предположение, что существование таких ломенов выгодно с эволюционной точки зрения, поскольку участки ДНК. копирующие каждый домен. могут обмениваться и рекомбинировать с образованием новых генов. копирующих белки с новой комбинацией свойств и функции. Какие особенности зукариотической гранскрипции могли бы привести к возникновению таких новых генов и почему? Кяонироаапие интер(борона чг.юнака.
Ис пользуя рекам бинантные ДН К, можно значительно увеличить наработку белков, и рисутствуюших в клетке в малом количестве. Интерфероиы антивирусные, а возможно, и противораковыс агенты можно вылслить из лейкоцитов человека, однако выход иитерферона составляет всего 1 мк~ из 1 л крови, поэтому при таком вылелении он стоит очень дорого. 1ены интерферонов можно клонировать и получить их экспрессию в бактериях.
которые легко выращивать в количестве сотен и тысяч литров а) Подсчитайте, сколько интсрферона можно получить в ршультате кзюнироаания гена интерфероиа в бактериях, предполагая, что в 1 мл кувьтуры, постигшей стационарной фазы, содержится 10' бак гериальных клеток, а в каждой клетке присутствует 1О ' пг белка, 5~, которого составляет интерферон. б) Если мол. масса интерферона составляет 30000, го сколько молекул интер ферона вырабатывает одна клетка? (Подсказка: число Авогащю, т.е. число молекул в одном моле вещества, равно 602 10хэ ) в) Какое количество клонированного ннтерферона человека можно теоретически получить иэ 100 л культуры, если учесть данные, приведенные в п.
б)? 8. Рекомбинация кох»новых ДНК. Предполо- жим, у вас есп две кольценые двухцепочечные ДНК - одна болыпая, другая маленькая, которые иапо объединить в один кольцевой дуплекс. У вас есть рестриктирующая эндонуклеаза, которая может расщепить каждую ДНК лишь в одной точке с образованием в месте разрыва выступающих концов. а) Каким образом вы осуществите соединение болыпой и малой ДНК в одно кольцо большего размера? б) Укюките структуру основных побочных продуктон рекомбинации. ПРИЛОЖЕНИЕ А ОБОЗНАЧЕНИЯ ЕДИНИЦ, ПРИСТАВКИ, КОНСТАНТЫ И КОЭФФИЦИЕНТЫ ПЕРЕСЧЕТА А А Кл кал Ки см имп/мин раси./мин г ч Дж ккал кДж К к )и Ампер Ангстрем Атмосфера Кулон Калория Кюри Сантиметр Число импульсов в минуту Дециметр Число распадов в минуту Грамм Час Джоуль Килокаиория Килоюкоуль Кельвин Константа равновесия Литр Натуральный логарифм (по осно- ванию е) Десятичный логарифм (по оснона- нию 10) Микрометр Микромоль Молирная концентрвпия Моляльная концентрация Метр Миллиграмм Минута Миллилитр Миллиметр .Миллиметры ртутного столба Милливольт Нормальная концентрация Нанометр -18~Н'~ Оборот Секунда Сведберг Вольт мкм мк моль М м мин мм рт.
ст МВ н. нм рН рК об с 8 В Порядок Приставка Обозначение 10з Гбз 10 !О М к д с мега кило деци свити Некоторые приставки, используемые в Ме- ждународной системе единиц Приставка Порядок Обозначение 10 10 * 1О 10 милли микро нано пико М мк н Некоторые физические константы 602. 10зз молекул 3,70. 10!е ./с 166!.10 '4 г Математические константы Некоторые коэффипненты пересчета 1 ем= 10 мм 10е мкм= = 10' нм = 1Ов А 0,394 дюйма; 1 дюйм= 2,54 см ГΠ— з зо = Гбз ьл.
= 10е мкг 3,53. !О з унции; 1 унция=28,3 г С= 5/9 ('Р-32); К= "С+ + 273 1Д =!Отаре=0,239к ',1 кап=4,184 Дж 1 торр = 1 мм рч. от. =- = 1,32.10 з атм; 1 атм = 760.торр Длина Температура Энергия Давление Число Авогадро (Аз) Кюри (Ки) Единица атомной массы (Дальтон) Число Фарадея (г! Универсальная гаювая постоянная (К) Постоянная Планка (6) к = 3,1416 е 2,718 )п(1ой,)х = 2,303 18х 23 062 кал/(В.
моль! 96485 Кл/моль 1,987 кал/(моль. К) 8,314 Дж/(моль. К) 1,584 10 зе кал с 6,626 10 зе Дж с ПРИЛОЖЕНИЕ Б АТОМНАЯ МАССА ЭЛЕМЕНТОВ Атем- Снм- вел Атом- ввя мессе Элемент Элемент Атом- ный не" мер Сим- вол А юмнвя масса ныа не мер Нб ые ьв 74Ь Бп Рд Р1 Рг Ра ка кп ке кь НВ Азот Алюминий Аргон Барий Бериллий Бор Бром Ва адий Висмут Водород ВольФрам Галолнний Галлий ГаФний Г й Германий Гольмий Диспрозий Европий Железо Золото и й Иод Ир л й Иттербий Иттрий Кадмий Калий Кальций Кислорол Кобальт Кремний Криптон Ксенон Лантан Литий Лютеций Магний Марганец Медь Молнблен Мыпгьвк Натрий Н А! Аг Ва Ве в Вг У В! Н От! Оа Н1 Не Ое Но 13у Еп Ре Ап 1п 1 1г уь У Сд к Са О Со Гй Кг Хе 1.а Ь1 1.п Мв Мп Сп Мо Аа ыа 7 !з !в 56 4 5 35 гз 83 1 74 64 31 72 2 32 67 66 63 26 79 49 53 77 70 З9 48 19 го в 27 14 Зб 54 57 3 71 12 25 29 42 зз 11 !4,0! 26,98 39,55 137,34 9,01 !0,В! 79,90 50;94 208,98 1,008 183,85 157,25 69,72 178,49 4,00 72,59 164,93 162,50 151,96 55,84 196,97 114,82 126,91 192,22 173,04 88,91 пг,40 39,09 40,08 16,00 58,93 28,09 ВЗ,В0 1З1,З0 138,9! 6,94 174,97 24,31 54,94 63,55 95,94 74,92 Неолим Неон Никель Ниобий Олово Осмнй Пвлладнй Платина Празеодим Протактиний Раций Радон Реник Ролий Ртуть Рубидий Рутений Самарий Свинец Селен Сера Серебро Сканлий Стронций Сурьма Тал ий Тантал Теллур Тербнй Титан Торий Тулнй Углерод Уран Фосфор Фтор Хлор Хром Цезий Цернй Цинк Цирконий Эрбнй кь кн Бгл РЬ Бе Б АВ Бс Бг БЬ 'П Та Те ть Тг ть Тгц с Р Р С1 Сг Ся Се Еп Ег Ег 60 ГВ 28 4! 50 76 46 78 59 91 88 86 75 45 80 37 44 62 Вг 34 16 47 21 зв 51 в! 73 52 65 22 90 69 6 92 15 9 17 г4 55 58 Зо 40 68 144,27 В1:,18 58,71 92,91 118,69 190,2 106,4 195,09 140,91 231,04 226,03 222 18е,г 102,91 200,59 85,47 !01,07 150,43 207,21 78„96 Зг,об 107,87 87,62 ! 21,75 204,39 180,95 !27,ГУ0 158,93 47,90 232,04 169.93 12,01 2ЗВ,03 19,00 35,45 52,00 132,9! 140,!г 65,38 91,22 167,26 ПРИЛОЖЕНИЕ В ЛОГАРИФМЫ о 1О 11 12 1З 14 15 16 17 18 19 го 21 22 гз 24 25 26 27 26 го зо З1 зг зз 34 Зб 36 З7 зв Зо 4О 41 42 4З 44 45 46 47 48 49 50 51 52 5З 54 оооо 0414 0792 Изо 1461 1761 го41 гзо4 2553 2766 ЗО1О зггг 3424 ЗИ7 3802 3979 4150 4314 4472 4624 47Л 4914 5ОИ 5185 5315 5441 5563 5682 5798 5911 бог1 81гб 6232 6335 6435 ббзг 6628 6721 661г 6902 699О 7076 7160 7г4з 7324 ОО4З 0453 0828 1173 1492 1790 2068 гззо 2577 гв10 ЗОЗВ 3243 З444 3636 звго З997 4166 4330 4487 4639 4786 4928 5065 5198 5328 5453 5575 5694 5809 5922 ВОЗ1 6138 бг4з 8345 6444 6542 66З7 6730 ббг1 6911 6998 7084 7168 7251 7ззг Оабб 0492 ОВ64 1206 1523 1818 гооб 2355 2601 гбэз ЗО54 3263 З484 3655 ЗВЗВ 4014 4183 4346 45аг 4654 4800 4942 5079 5211 5340 5465 5587 5)05 5821 59ЗЗ 6042 6149 6253 6355 6454 6551 6646 6739 ВВЗО бого 7007 7ОВЗ 7177 7259 7340 0128 ОВЗ1 0699 1239 1553 1847 игг гзво 2625 2856 3075 3284 3463 3674 3856 4ОЗ1 4200 4362 4518 4669 4814 4955 5092 5224 5353 5476 5599 5717 безг 5944 6053 6160 6263 6365 6464 6561 6658 6749 6839 6928 7016 ЛО1 7165 7267 7348 0170 0569 0934 12Л 1564 1875 2148 2405 2646 2878 3096 3304 3502 због З874 4048 4216 4378 4533 466Э 4829 4969 5105 бгз7 5366 5490 5611 5729 5843 5955 6064 6170 6274 6375 6474 6571 6665 6758 6848 6937 7024 7110 7193 7275 7ЗВВ ог1г ОВО7 0969 1ЗОЗ 1614 19ОЗ 2175 г4зо 2672 гооо 3118 ззг4 3522 3711 звог 4065 4гзг 4393 4548 4698 464З 4983 5119 5250 5З76 5502 5623 5740 5855 5966 6075 иво бгв4 6385 6484 6580 8675 8767 6857 6946 7ОЗЗ 7118 ггог 7264 7З64 025Э 0645 1004 1335 1644 1931 гго1 2455 2695 гогз 3139 3345 3541 3729 3909 4062 4249 4409 4564 4713 4857 4997 изг 5263 5391 5514 5635 5752 5866 5977 6085 ии 6294 6395 6493 6590 6664 6776 6886 6955 7042 лге 7ИО 7292 7372 о294 обег 1ОЗВ 1З67 1673 1959 ггг7 248о глб 2945 3160 3365 3560 З747 3927 4099 4265 4425 4579 4728 4871 5011 5145 5276 5403 5527 5647 5763 5877 5988 6096 Вго1 ВЗ04 6405 6503 6599 6693 6785 6875 6964 7050 71З5 7218 7300 7380 0334 ОЛВ 1072 1З99 1703 1987 2253 2504 2742 г987 З181 3385 3579 З766 3945 4116 4261 4440 4594 4742 4686 5024 5159 5269 5416 5539 5658 5775 5888 5999 ИО7 биг 6314 6415 без 6609 6702 6794 6684 6972 7ОВВ 7143 7ггб 7ЗОВ 7388 ОЗ74 0755 Лаб 1430 1732 2014 гг79 г529 2765 2989 3201 3404 3598 3764 3962 41ЗЗ 4298 4456 4609 4757 4900 5038 5172 5302 5428 5551 5670 5766 5899 6010 6117 6222 6325 6425 Вбгг 6618 6712 ВВОЗ 6893 6981 7067 7152 7гзб 7З18 7З96 8169 8176 8235 8241 818г 8248 8189 8254 8299 83БЗ взаб ВЗ7О 8312 6376 ВЗ1Ч ВЗВ2 8426 8432 8445 9315 9320 9365 9370 9330 9335 9360 9385 934а 9390 9325 9375 9566 9571 55 56 57 58 59 60 61 62 БЗ 64 65 66 67 БВ 69 70 71 72 7З 74 75 и 77 78 79 80 61 62 ВЗ 64 85 ВБ 67 БВ 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 7404 7462 7559 76З4 7709 77вг 7853 7924 7993 8062 6129 8195 вгбг 8325 ВЗВВ 8451 8513 8573 ВБЗЗ Ббаг 6751 ВВОВ 8865 6921 6976 аозт 9085 9138 9191 9243 9294 9345 9395 9445 9494 9542 9590 9638 9665 9731 9777 9623 МБВ 991 г 9956 7412 749О 7566 7642 7716 7789 7660 7931 ваоо 8069 8136 вгог 6267 ВЗЗ1 ВЗ95 8457 8519 8579 8639 8698 8756 8814 8871 8927 8962 903Б ааао 9143 9196 9248 9299 ОЗБО 9400 945О 9499 9547 9595 9643 9669 97ЗБ 9782 9827 9872 М17 9961 7419 7497 7574 7Б49 7723 7796 7866 7938 8007 8075 6142 8209 вг74 ВЗЗВ 8401 8463 8525 8585 8645 8704 6762 ваго 8876 8932 6987 9042 9ОМ 9149 9201 9253 9304 9З55 9405 9455 9504 9552 9600 9647 9694 9741 9786 9832 9877 9921 99Б5 7427 7505 7582 7657 7731 78ОЗ 7875 7945 8014 вовг 6149 8215 Вгба 8344 8407 847О 8531 6591 8651 871О ВИВ 8825 8862 ВОЗВ вмз 9047 9101 9154 Огаб 9256 ОЗОО 9360 941О 9460 9509 9557 9605 9652 9699 9745 9791 мзе 9881 9926 9969 7435 7513 7589 7664 7738 781О 7682 7952 ВО21 ВОВЧ 815Б Вггг 8287 8351 8414 8476 8537 8597 8657 8716 8774 ВВЗ1 6867 894З ВЮВ 9053 91ОБ 9159 9212 9263 9415 9465 9513 Мбг Маа 9657 9703 9750 9795 9841 9886 юза 9974 7443 7520 7597 7672 7745 7816 7889 7959 вагв 8096 8162 8228 Вгаз 8357.