Главная » Просмотр файлов » А.И. Нетрусов, М.А. Егоров - Практикум по микробиологии

А.И. Нетрусов, М.А. Егоров - Практикум по микробиологии (1125598), страница 93

Файл №1125598 А.И. Нетрусов, М.А. Егоров - Практикум по микробиологии (А.И. Нетрусов, М.А. Егоров - Практикум по микробиологии) 93 страницаА.И. Нетрусов, М.А. Егоров - Практикум по микробиологии (1125598) страница 932019-05-11СтудИзба
Просмтор этого файла доступен только зарегистрированным пользователям. Но у нас супер быстрая регистрация: достаточно только электронной почты!

Текст из файла (страница 93)

Реактивы для определения: ТХУ вЂ” 4%-й раствор; ВаС1г-желатийг 0,5 г желатина растворяют в 100 мл горячей воды (60 — 70'С), вылерживают 6 ч; 0,5 г ВаС1г 2 — 3 ч растворяют в желатиновом растворе, затем фильтруют а горячем состоянии, раствор стабилен в холодильнике 3 — 4 дня. На основании полученных данных строят калибровочную кривую: по оси абсцисс откладывают концентрацию БО4" (мкг/мл), по оси ординат — оптическую ггглотность растворов. Данные определений заносят также в таблицу.

Оформление результатов. Рассчитанные значения количества ВО»~, содержащиеся в культуральной жидкости, вносят в табл. 24.1. 317 Т а б л и ц а 24. 1 Образование сульфата тионовьвин бактериями Делают вывод о проводимом культурами тиобацилл процессе и сравнивают скорости процесса у разных культур в пересчете на биомассу. Материалы, оборудование, посуда, реактивы Микроскоп; фазоао-контрастное устройство; мерные колбы на 100 мл — 2; на 50 мл — 2; чашки Петри — 5; пипетки на 1 — 2 мл (стерильные) — 18; шпатель — 1; пробирки — 30; реактивы для приготовления сред и определения количества сульфата, грэк.

План выполнения задачи На выполнение задачи требуется 25 — 30 ч. Занятие 1. Приготовление и стерилизация сред„стерилизация посуды. Занятие 2. Посев культур тионовых бактерий, отбор начальных точек, построение калибровочной кривой по сульфату, определение начальной биомассы и содержания сульфатов.

Занятна 3, 4, 5. Микроскопироаание„определение рН, оптической плотности лвух-, трех- и пятисуточной культуры, приготовление реактивов и определение сульфатов, оформление и обсуждение результатов. ЗАДАЧА 2. ОКИСЛЕНИЕ СОЕДИНЕНИЙ АЗОТА. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ПРОДУКТОВ ЭНЕРГЕТИЧЕСКОГО МЕТАБОЛИЗМА НИТРИФИЦИРУЮЩИХ БАКТЕРИЙ Нитрифицирующие бактерии относятся к группе хемолитоавтотрофов, получающих энергию для своего роста за счет окисления неорганических соединений азота. Хемолитоавтотрофы образуют клеточньгй материал из СОи а необходимую для этого энергию и восстановительные эквиваленты в виде НАД(Ф)Н извлекают при окислении строго определенного для каждой группы субстрата. 318 Процесс нитрификации, который протекает в почве, навозе, воде и приводит к окислению аммиака до ЫО, н затем до 1чОз, с давнего времени известен в сельскохозяйственной практике и в процессе приготовления селитры для изготовления пороха.

Ло середины Х!Х в., т.е. до работ Л. Пасгера, эти превращения объясняли чисто химическими явлениями. Пастер предположил участие в них микроорганизмов. К бактериям, осуществляющим 1 фазу нитрификации, относятся представители четырех родов: %««озотоиаз, !т!Г«озозр!«а, «/!Г«озососслз, М~«ого!оЬаг.

Дальнейшее окисление Г4О~ до 1чОз, выполняют нитритокисгиющне бактерии: А!!«аюою, Ау!«оЬасге«, Л!г«ососсик Бактерии обеих фаз представляют собой грамстрнцательные, довольно мелкие микроорганизмьь Морфологическое изучение нитрификаторов проводится с использованием фазово-контрастной и электронной микроскопии. Метаболизм нитрифицирующих бактерий характеризуется способностью бактерий использовать лля конструктивных процессов СОз как единственный источник углерода; ассимиляция углекислоты илет через фосфорилированные продукты рибулозодифосфатного цикла, синтез мономсров — через цикл трикарбоновых кислот, который у них, как и у многих облигатных хемоавтотрофов, не замкнут.

Особенности регуляции обмена мономеров обусловливают токсическое действие ряда органических веществ на нитрифицирующие бактерии. Синтез НАДН и получение энергии, необходимой для ассимиляции СОъ происходят в результате окисления неорганических доноров электронов 14Нд и 1ЧО~. При этом, поскольку место входа электронов в дыхательную цепь находится на уровне цитохрома с у аммонийокисляющих и цитохрома а, — нитритокисляюших бактерий, часть аккумулированной бактериями энергии используется на осуществление обратного транспорта электронов против тсрмодинамического градиента для восстановления НАД'. Стандартный окислительно-восстановительный позенциал пары НЛДН/НАД вЂ” 0,32 В, тогда как сгандартные потенциалы пар 1ЧО,/1ЧН,ОН и 1ЧО,/1ЧО, равны соответственно + 0,0бб В и «0„42 В, поэтому для восстановления 1 моль НАД' такими донорами с высоким окислительно-восстановительным потенциалом необходимо затратить энергию около 75 и 143 кДж — это может бьггь достигнуто за счет гидролиза 3 и 5 молекул АТФ соответственно.

В связи с тем что в бактериях имеется всего один пункт генерирования энергии, значительная часть которой используется лля восстановления НАД' против термодинамического градиента, клетки нитрификаторов растут довольно медленно, минимальное время их удвоения — около 24 ч. Г~д~б~: г Р«р ф ы Рш~ ~ Р дуктов энергетического метаболизма нитрифнцирующих бактерий н наблюдение динамики роста клеток.

Ход выполнения задачи Микроорганизмы и их культивирование. В работе используют двух представителей нитрификаторов 1 фазы — Аг!гпиотопиз зр. и М!«озозр!«а ар. и одного представителя 11 фазы — !т!г«обасге«твоя«асЫсу!. Энергетическим субстратом и источником азота для ннтрифнцирующих бактерий 1 фазы является )х1Нм Эти микроорганизмы культивирукп в среде Виноградского (для ! фазы — среда 1) или на среде Сориано и Уокера (среда 2). Среда ! (г/л): (1чН4)тБО4 — 2,01 КтНРО4 — 1,0 (стерилнзуют отдельно); МВБО4 7НзΠ— 0,5; 1КаС! — 2,0; ГеБ΄— 0,05; СаСОз — 5,0; среда 2 (г/л): (1Х(Н4)зБО4 — 0,5; КНзРО4 — 0,2 (стерилизуют отдельно); СаС1г 2НзΠ— 0,04; МВБО„7НзΠ— 0,04; Ге-лнмоннокислый — 0,0005 (стерилизучот отдельно); 1 мл 0,05%-го раствора фенслового красного.

Среды стерилизуют при 1 атн, после чего 319 рН в них доводят до 7,5 — 7,8 с помощью 5%-го раствора 1чаНСО„а в среду 2 вносят также 1 мл стерильного раствора микроэлементов (по Пфеннигу и Липперту, см. приложение 4). Как видно при сравнении сред 1 и 2, они включают одни и те же основные компоненты: фосфор, магний, железо, кальций, однако кальций, введенный в среду 1 в видс карбоната, определяет мутность этой среды (среда 2 прозрачна) и регулирует постоянно меняющийся в процессе культивирования рН. При выращивании нитрификаторов на среде Сориано и Уокера происходит быстрое полкисление среды за счет образования возрастающих количеств нитритов. Уменьшение рН в этом случае можно отметить с помощью универсального индикатора.

Более того, добавленный при посеве индикатор феполовый красный вызывает при подкислении среды изменение цвета культуральной жидкости от сиреневатых до желтоватых оттенков. Аммонийокисляклцие бактерии чувствительны к подкислению среды, поэтому лля сохранения их дальнейшего роста на среде Сориано и Уокера следует с помощью 0,1%-го ХаНСО, ежедневно поддерживать рН в нужных пределах (7,5 — 7,8). Энергетическим субстратом и источником азота для возбудителя П фазы нитрификации является !ЧО~. Для культивирования !ггг оЬасгег гггггоИгагЫгуг, предстаигякпцего эту группу микроорганизмов, используются также среда Виноградского (для П фазы — среда 3) и среда Ватсона и Вотербари (среда 4), Среда 3 (г/л): ХаХОг — 1,0; КзНРО4 — 0,5 (стерилизукзт отдельно); МИИОг 7НгΠ— 0,5; ХаС! — 0,5; Ге804 7НзΠ— 0,005; ХагСОз — 1,0. Среди 4(г/л): !х!а!х!Оз — 0,07, МИКО„.

7НзΠ— 0,1; СаС!з. 6НзΠ— 0,0006; КН,РОг — 0,02 (стерилизуют отдельно). Среды стерилизукгт при 1 ати 30 мин, после стерилизации рН сред доводят до 7,5 с помощью 5%-го !х!аНСОз, а в среду 4 вносят 1 мл стерильного раствора микроэлементов (по Пфеннигу и Липперту). Клетки )ггггоЬасгег к гггаИгисЫгуг', культивируемые в этих средах как представители П фазы нитрификации, в отличие от аммонийокисляющих бактерий не производят при росте заметного сдвига рН среды.

Приготовленные среды разливают по 100 мл в качалочные колбы на 750 мл, стерилпзуют, вносят по !0 мл соответствующей бактериальной суспензии 5— 7-суточного возраста и выращивают на качалке. Некоторое количество среды всех вариантов оставляют незасеянной для определения исходного количества субстратов. Микроорганизмы культивируют на качалке при 30 'С в течение 5 — 7 сут. Жидкие культуры нитрпфицирующих бактерий поддерживают в темноте при 15 С и пересевают каждые 4 — 6 мес. Для аммонийокисляющих бактерий используют среду, содержащую 0,001%-й индикатор феноловый красный, 0,5 М НЕРЕИ- буфера (рН 7,8 — 8,0) и соответствующие соли. Через 6 — 8 нед цвет среды изменится с красного на желтый, указывая на окисление большей части аммония, поэтому в среду вносят дополшггельное количество аммония и доводят рН до нужного значении.

При поддержании нитритокислякгщих бактерий периодически анализируют содержание нитритов и при уменьшении их количества в среду вносят новую порцию Ха!х!О, до нужного уровня. Перед засевом в опыт культуру инкубируют при 25'С в течение нескольких дней на свежей среде. В процессе роста культур изучают динамику окисления бактериями неорганических энергодаюших субстратов. Регистрируют изменение рН в случае нитрификаторов 1 фазы.

320 Определяют сначала наличие (качественные реакции), а при получении положительного ответа — количество )х(Н; и НО! у бактерий 1 фазы окисления, у бактерий П фазы— НО! и )ч Ои Изучение показателей энергетического обмена нитрификаторов проводят в культуральной жидкости после отделения клеток центрифугированием при 6 тыс. я. Полученные данные сравнивают с исходными уровнями окисляемых субстратов, которые определяют в средах, не содержащих посевного материала. Морфологическое изучение нитрифицирующих бактерий проводят с использованием фазово-контрастной микроскопии. ху!гговапхапав вр. — это мелкая, овальная палочка, почти кокковидная; ее размеры 0,6 — 1 х 0,9 — 2 мкм, размножается делением пополам.

Характеристики

Тип файла
DJVU-файл
Размер
7,05 Mb
Тип материала
Высшее учебное заведение

Список файлов книги

Свежие статьи
Популярно сейчас
Как Вы думаете, сколько людей до Вас делали точно такое же задание? 99% студентов выполняют точно такие же задания, как и их предшественники год назад. Найдите нужный учебный материал на СтудИзбе!
Ответы на популярные вопросы
Да! Наши авторы собирают и выкладывают те работы, которые сдаются в Вашем учебном заведении ежегодно и уже проверены преподавателями.
Да! У нас любой человек может выложить любую учебную работу и зарабатывать на её продажах! Но каждый учебный материал публикуется только после тщательной проверки администрацией.
Вернём деньги! А если быть более точными, то автору даётся немного времени на исправление, а если не исправит или выйдет время, то вернём деньги в полном объёме!
Да! На равне с готовыми студенческими работами у нас продаются услуги. Цены на услуги видны сразу, то есть Вам нужно только указать параметры и сразу можно оплачивать.
Отзывы студентов
Ставлю 10/10
Все нравится, очень удобный сайт, помогает в учебе. Кроме этого, можно заработать самому, выставляя готовые учебные материалы на продажу здесь. Рейтинги и отзывы на преподавателей очень помогают сориентироваться в начале нового семестра. Спасибо за такую функцию. Ставлю максимальную оценку.
Лучшая платформа для успешной сдачи сессии
Познакомился со СтудИзбой благодаря своему другу, очень нравится интерфейс, количество доступных файлов, цена, в общем, все прекрасно. Даже сам продаю какие-то свои работы.
Студизба ван лав ❤
Очень офигенный сайт для студентов. Много полезных учебных материалов. Пользуюсь студизбой с октября 2021 года. Серьёзных нареканий нет. Хотелось бы, что бы ввели подписочную модель и сделали материалы дешевле 300 рублей в рамках подписки бесплатными.
Отличный сайт
Лично меня всё устраивает - и покупка, и продажа; и цены, и возможность предпросмотра куска файла, и обилие бесплатных файлов (в подборках по авторам, читай, ВУЗам и факультетам). Есть определённые баги, но всё решаемо, да и администраторы реагируют в течение суток.
Маленький отзыв о большом помощнике!
Студизба спасает в те моменты, когда сроки горят, а работ накопилось достаточно. Довольно удобный сайт с простой навигацией и огромным количеством материалов.
Студ. Изба как крупнейший сборник работ для студентов
Тут дофига бывает всего полезного. Печально, что бывают предметы по которым даже одного бесплатного решения нет, но это скорее вопрос к студентам. В остальном всё здорово.
Спасательный островок
Если уже не успеваешь разобраться или застрял на каком-то задание поможет тебе быстро и недорого решить твою проблему.
Всё и так отлично
Всё очень удобно. Особенно круто, что есть система бонусов и можно выводить остатки денег. Очень много качественных бесплатных файлов.
Отзыв о системе "Студизба"
Отличная платформа для распространения работ, востребованных студентами. Хорошо налаженная и качественная работа сайта, огромная база заданий и аудитория.
Отличный помощник
Отличный сайт с кучей полезных файлов, позволяющий найти много методичек / учебников / отзывов о вузах и преподователях.
Отлично помогает студентам в любой момент для решения трудных и незамедлительных задач
Хотелось бы больше конкретной информации о преподавателях. А так в принципе хороший сайт, всегда им пользуюсь и ни разу не было желания прекратить. Хороший сайт для помощи студентам, удобный и приятный интерфейс. Из недостатков можно выделить только отсутствия небольшого количества файлов.
Спасибо за шикарный сайт
Великолепный сайт на котором студент за не большие деньги может найти помощь с дз, проектами курсовыми, лабораторными, а также узнать отзывы на преподавателей и бесплатно скачать пособия.
Популярные преподаватели
Добавляйте материалы
и зарабатывайте!
Продажи идут автоматически
6418
Авторов
на СтудИзбе
307
Средний доход
с одного платного файла
Обучение Подробнее