Osnovy_biokhimii_Nelson_i_Kokh_tom_3 (1123315), страница 23
Текст из файла (страница 23)
Глава 9 1. а) (5') — — — С(3') и (5')ААТТС вЂ” — — (3') (3') — — — СТТАА(5') (3')Π— — — (5') б) (5')- — — ОААТТ(3') и (5')ААТТС вЂ” — -(3') (3') - — — СТТАА(5') (3')ТТААС вЂ” — — (5') в) (5') — — — ОААТТААТТС вЂ” — — (3') (3') — — — СТТААТТААΠ— — — (5') г) (5') — — — О(3') и (5')С вЂ” — — (3') (3') -- - — С(5') (3')О - — - (5') д) (5') — — — ОААТТС вЂ” — — (3') (3') — — — С ТТА АΠ— — — (5') е) (5') — — — САО(3') и (5')СТΠ— — — (3') (3') — — — СТС(5') (3')САС вЂ” — — (5') ж) (5') — — — САСААТТС вЂ” — — (3') (3') — — — СТСТТААΠ— — — (5') з) Метод 1: расщепить ДНК рестриктазой ЕсоКЕ как в пункте (а), обработать, как в пункте (б) или (г), а затем лигировать синтетический фрагмент с двумя тупыми концами с послсловатсльностью узнанания рестриктазы ВаглН!.
Метод 2 (болсе эффективный): синтезировать фрагмент ДНК со следующей структурой: (5')ААТТОСАТСС(3') (3') ССТАОСТТАА(5') Этот фрагмент эффективно лигируется с липкими концами фрагментов, образующихся в результате расщепления рсстриктазой ЕсоК1. Так можно встроить сайт узнавания лля рестриктазы ВатН1, но при этом сайт узнавания ЕсоР,! исчезает. Краткие решения задач и ответы на вопросы !ап. ! и) Эти четыре фрагмента (в том же порядке, в кото- ром они упомянуты в вопросе) следующие (Х— любой нуклеотил): (5')ААТТСХХХХСТОСА(3') (3')ОХХХХО(5') (5')ААТТСХХХХОТОСА(3') (3') ОХХХХ С(5') (5')ААТТОХХХХСТОСА(3') (3')СХХХХО(5') (5')ААТТСХХХХСТССА(3') (3')СХХХХС(5') 2.
ДНК фага Л может быть угшкована в инфекцион- цые фаговые частицы только в том случае, сели ее размер составляет от 40 000 ло 53 000 и. и. Поскольку векторы на основе бактериофагов обычно содержат около 30 000 и. и., они це могут образонывать фаговые частицы, если в них не встраивается Ло- полн ительная ДН К необходимой длины (от 10 000 ло 23 000 и. и.).
3. а) Восстановленные цлазмилы рВК322 без вставки чужеродной ДНК, они сохраняют устойчивость к ампициллину. Кроме того, лве или более молекул рВК322 могут смыкаться в кольцо как содержащее, так и це содержицее вставки. б) На дорожках 1 и 2 разделены образцы, содержащие вставку ДНК в разной ориентации. На дорожку 3 нанесен образец, содержащий лва фрагмеип а ДНК, встроенных таким обратом, что соединенными оксюались проксималь- ные концы, образующиеся нри расщеплении ЕсоК!. 4.
Обратим ннимание на аминокислоты, лля которых существует минимальное число колонов; Мег и Тгр. Лучше всего охватить последовательность от колона лля нервов» Тгр ло первых двух нуклеотилов кодона лля 1!е. Такой зонд имеет следующую последовательность: (5')ЦСС()А((//С)ЦС(()/С)А(!ОСА(()/С)(1ООА() Синтезировать нужно так, чтобы в кажлой из ука- ванных позиций стоял либо (), либо С, в результате чего получится смесь из восьми 20-нуклеотилных зонпов, различающихся только цо одной или не- скольким из укатанных позиций. 5. Понадобятся ДНК-праймеры, термостабильная ДНК-полимераза, лезоксинуклеозилтрифосфаты и тсрмоциклер (аппарат лля проведения ПЦР).
Праймеры нужно синтезировать так, чтобы оци охватывали участок ДНК с повтором САО. На рисунке изображена колирующая нить, ориентированная слева направо в направлении 5' 3'. Левый праймср должен быть идентичен любой последовательности из 25 нуклеотилов, нахолящихся слева от повтора САО. Правый цраймер должен быть 1зпх! Приложение Б 10. Триацилглицерины в составе животного жира (сала) гилрализуются пал действием ХаОН с образованием мыла (омьщение), которые гораздо лучше растваримо в воле, чем исходные саелинения. 11. Эз.а мажет быть только сфингалипил (сфингомиелин). 12.
О СН,Π— С О СН вЂ” Π— С О СН« — Π— Р— Π— СН« — СН вЂ” 1>)Нз О СОО Фосфатиднлсерин 13. Длинныс цепи насыщенных углевалоролов, практически твсрлыс при температуре окружающей среды, образуют на поверхности листьев гидрофобный слой, через который такие полярные соеаипсния, как вода, проникать не могут. 14. а) Свободная ОН-группа у атома С2 и фосфахолиновая головка у атома СЗ являются гидрофильными; жирная кислота у атома С1 лизолсцитипа является гилрафобпай. 6) Некоторые стероилы, такие как преднизон, ипгибируют действие фасфалипазы Аг, блокируя отщепление арахилацавай кислоты от атома С2. Арахиланавая кислота явля<шея исходным сасяинепием Лля множества эйкозаноилов, некоторые из них вызывают боль и воспаление. в) Фосфолипаза Аг высвабожласт арахилоповуи> кислоту — предшественник лругих эйкозанаилов, выполняющих важпь>с защитныс функции в организме.
К(х>ме того, фермент расщепляет поступающие с пищей глицерафасфолипилы. 15. Группу крови определяет олигосахарид головной группы мембранного сфинголипила(см. рис. 10-15, т. 1, с. 503). Этот же олигосахарид соединен с некоторыми мембранными гликопротеинами, которые также служат участками узнавания лля антител, распознающих группу крови. 16.Диацилглицерин — эта гидрафобное вещество, к<>тарос остается в мембране. Инозит-1,4,5-трифосфат — полярное и очень хорошо растворимое в воде вещество, которое гораздо легче лиффунлирует в цитозоль. Оба вещества выполняют функцию вторичных посреяников.
17. Волорастваримые витамины быстро выводятся с мочой и не накапливаются в организме. Жирорастворимые витамины очень плохо растворяются в воде и запасаются в организме в составе липилав. 18. а) Глицерин и натриевые соли пальмитиновой и стеариновой кислот', б) Р-глицерин-3-фосфохолин и натриевые соли пэльмитиновой и олсиновой кислот. 19. Растворимость в воле; моноацилглицерин > диацилглицерин > триапилглнцерин. 20. Вещества сходят с колонки в следующем порядке: халестерилпальмитат и триацилглицерин; холестерин и и-тетралеканал; фосфатилилхолин и фасфатилилэтаналамин; сфингомиелин; фосфатилнлсерин и пальмитат.
21. а) Следует подвергнуть продукты кислотного гиЛролиза кажпаго сае><имения храматографическому разделению (газажилкостная хроматография или топкослойная хроматография на силикагеле) и сравнить результаты с известными стандартами. Гидролизат сфингоииелина: сфингазип, жирные кислоты, фасфохалин, холин и фасфат; гидролизат цереброзида: сфингазин, жирные кислоты, сахара, на не фосфаты. б) Снльпащелачной гилралнз сфингомислина приводит к появлению сфингозина, при гипролиэе фосфатилилхолица вылелястся глицерин.
Состав продуктов гилролиза можно проанализировать меп>Лом танкослойнай хроматографии путем сравнения со гтанпартпыми ве<пествами или с помощью реакции с РР)<>В (окрашенный пролукт образуется только в реакции са сфингозином). Свобалныс жирные кислоты вылсляк>тся при абработкс фосфолипазой А, или Аг только ф<юфатиаилхолина, но не сфинп>миелина. 22. Фосфатилилэтаноламин и фосфатилилсерип.
23. а) СМ! и глабозид. И глюкоза, и галактозаотносятся к гексазам, так чта «гексоза» соответствует эквималярной смеси глюкоза «галактаза. Малярные с<>- отношения для четырех ганглиозилов следующие: СМ1 — 1: 3: 1: 1, СМ2 — 1: 2: 1: 1, СМЗ вЂ” 1: 2: 0: 1, глобозил — 1: 3: 1: О. б) Да, соответствует; при болезни Тея — Сакса накапливается СМ2 (1: 2: 1: 1; см. т, 1, лоп. 1-2, рис. 1). в) Этот мета>< анализа аналогичен тому, что был использован Сснгером лля определения аминакислотной последовательности инсулина.
Анализ каждого фрагмента позволяет найти только ега состав, но ие последаватвг<ьнасть, но поскольку каждый фрагмент отличается от предыдущего лишь на олин остаток сахара, можно определить последовательность звеньев. Структура нормального асиалоганглиозила: церамил-глюкоза-пьзактоза-гвлактазамин-газ акгоза (чта соответствует паслелавательнасти, изображенной в дополнении 10-2 (т. 1), за исключением удаленного в результате гидрализа остатка Хеп5Ас). г) Асиалоганглиозил при болезни Тея — Сакса имеет послеловательность церамид-глюкоза-галактоза-галактозамин, что соответствует данным, представленным краткие решения задач и ответы на вопросы ) зо!>) в лоп. 10-2 (т. 1). д) Строение нормального асиалоганглиозила ОМ1 следующее: церами>) — гл>окова (2 ОН-группы участвуют в образовании гликозилиых связей, 1 ОН-группа задействована в кольце, 3 ОН-группы (2,3,6) свободны и подвергаются метилированию) — галактоза (2 ОН вЂ” в гликозилных связях, 1 ОН вЂ” в кольце, 3 ОН (2,4,6) свободны лля метилироваиия) -га>гактозаиин (2 ОН вЂ” в гликозилиых связях, 1 ОН .— в кольце, 1 1>)Н> (вместо ОН) и 2 ОН (4,6) своболны лля метилирования)— галактоза (1 ОН вЂ” в гликозилной связи, 1 ОН— в кольце и 4 ОН (2,3,4,6) свободны лля метилировапия).
е) Не хватает следующих данных: (1) какой связью соединены между собой звенья и (2) глс присоединена)>>ец5Ас? Глава 11 1. Зная количество липила, его молекулярную массу и пло>цзяь поверхности монослоя (определенную, как показано иа рисунке), можно рассчитать площадь поверхности одной молекулы. 2. Данные указывают на существование двойного липилпого слоя в эритропитах собаки: единичная клетка с площзлью поверхности 98 мкмг окружена мопослоем липилов плошадью 200 мкмг.
В случае овпы и человека данные укззывают на то, что клетки покрыты це двойным, а одицариым липидцым слоем. Эти ранние эксперименты были выполнены с довольно низкой точностью, более поздние экспсримс>пы подтвердили существование лвойиого липияпого слоя во всех случаях.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
