Osnovy_biokhimii_Nelson_i_Kokh_tom_3 (1123315), страница 22
Текст из файла (страница 22)
(3) Фолдинг многих белков происходит сщс в процессе синтеза на рибосамах, по данный белок складывается только посла завсршсния синтеза. (4) Ьслки, синтезирусмые на риб<комах, могут взаимодействовать с рибосомами в процессе фолдинга, но для данного белка зто невозможна. (5) Состав питозоля сложное состава буфера, который использовался в данном исследовании, а для фолднига некоторых белков могут требоваться спсцифичсгкис и нсизвсгтпыс пока белки.
(6) Для правильного сворачивания некоторым белкам трсбуются шапсроны, которых в буфсрс нот.(7) В клетках ВИЧ-протсаза синтезируется как часть более длинной цепи, которая затсм подвергается протсолитичсскому процес- сингу, а бслок в данном исслслованни был синтезирован как единая молекула. в) Поскольку фермент оказался функциональным даже при замене Суз на АЬа, видимо, дисульфидныс связи нс играют важной роли в формировании ВИЧ-протсазы.
г) Модель 1: укладка, как в 1.-протсазс. Аргумент «зак ковалснтная структура белков одинаковая (за исключснисм хиральности), поэтому и уклалка буг<ст такой жс, Аргумент «лротивм хираль- ность — важное свойство, трехмерная структура играет ключевую роль в биологической активности молскул. Поэтому синтетический фермент нс может укладываться таким жс образом, как Е-протсаза. Модель 2: образуется зеркальное отражснис Е-протсазь<. Аргумент «зак поскольку отдельные алсмспты синтетического и природного белков являются зеркальными отражениями друг друга, целая молскула синтстичсскаго белка тоже примет структуру зеркального отражения природного белка.
Аргумент «против<с фолдинг белка обсспсчивают очень сложные взаимодействия, так что синтетический белок, вероятно, примет иную структуру. Модель 3: иная укладка. Аргумент «зам фолдинг белка обеспечивают очснь сложные взаимодействия, так что синтетический белок, вероятно, примет какую-то иную структуру. Аргумент «иротивк поскольку отдсльньк структуры синтетического и природного белков являются зеркальными отражениями друг друга, целая молекула синтетического белка тоже примет структуру зеркального отражения природного белка. д) Модель 1: Фермент оказался активным по отно- шснию к знантиомсру природного субстрата и ингибирустся энантиомсром природного ингибитора.
Это означает, что О-протсаза является зеркальным отражением 1.-протсазы. е) Краситсль Эванса — ахиральная молекула и связывается с обоими формами фермента. ж) Нет. Химотрипсин нс ра<- щспляст О-протсазу, поскольку пр<>гаазы содержат только Е-аминокислоты и распознают только Е-псцтиды, з) Нс всегда. В зависимости от особенностей фермента при его синтезе могут возникать различимо проблемы, перечислен ныс в пункте (б), в результате чего фермент может оказаться неактивным.
Глава 5 1. Белок В обладает болсс высоким сродством к лиганду Х: лля него полунасьпцспис достигастся при значительно меньшей концсптрапии Х, чем для белка Л. Для белка Л К, — — 10в М ', для бслка В К,=10вМ '. 2. Во всех трех случаях пп < 1. При связывании лиганла кажущук>ся отрицатсльнук> кооперативность можно объяснить наличием в белке центров связывания двух или нескольких типов с разным сродством к лиганду или присутствием нескольких белков в растворе, Кажущаяся отрицательная кооперативность часто наблюдается в гетерогенных белковых образцах. Примеров истинной отрицательной кооперативности известно совсем немного. 3.
а) Снижается; б) повышается; в) снижается; г) снижается. 4. 4г.= 8,9 10 ' с '. 5. Коопсративногть связывания кислорода гсмоглобином обусловлена взаимолсйствиями между субъсдиницами этого белка. 6. а) Тот факт, чта гемоглобин А (НЬА, гемоглобин матери) при рО, = 4 кПа насыщен примерно на 60;т тогда как гемоглобин Г (НЬГ, гемоглобин плода) в тех жс условиях насыщен более чем на 90>ь, указывает на более высокое сродство НЬГ к Ог по сравнению с НЬА, б) Более высокое сродство НЬГ к кислороду обеспечивает перемещение кислорода из материнской крови в кровь плода через плацснту.
Кровь плода близка к насыщению кислородом за счет сравнительно низкого сродства НЬА к кислороду в) Тот факт, что кривая насыщения НЬА кислородом при связывании БФГ сдвигается сильнее, чем кривая насыщения НЬГ, говорит о том, что НЬА связывает БФГ прочнее, чем НЬГ, Различие в связывании БФГ двумя типами гемоглобина может определять их различнос сродство к Ог. [300[ Приложение Б рик/БНММ (без шарнира) движется, полтверждает справедливость модели 51.
е) При низкой плотности связывания молекул миозина шарики время от времени были бы отсоелинены от актина. Шарики передвигались бы мелленно, поскольку после отсоединения олной молекулы миознна требуется время для присоединения следующей. При высокой плотности связывания миозина после отсоединения одной молекулы сразу же связывается вторая, и движение происхолит быстрее. ж) Выше определенной плотности молекул миозина скорость перемещения шариков начинает определяться скоростью, с которой молекулы миозина способны перемещать шарики. Поскольку молекулы мнозица движутся с максимальной скоростью, добавление новых молекул не приводит к увеличению скорости.
з) Поскольку лвпжущая сила формируется в «головке» Я1, повреждение »головки» вполне могло инактивировать молекулу, н БНММ мог потерять способность перемещать шарики. и) Скорее всего, формирование »головки» 51 обеспечивают нековалентные взаи- молействия н этого вполне достаточно для сохра- нения функциональности этого фрагмента. Глава б 1. При нагревании теряетсяакгивностьфермента, превращающего сахар в крахмал. 2.2,4 10 вМ.
3. 9,5 10" лет. 4. Фермент-субстратный комплекс устойчивее свободного фермента. 5. а) 190 А; б) при фолдинге белка эти аминокислотные остатки сближаются. 6. Скорость реакпии можно определить по уменьшению поглощения г)ЛРН при 340 нм в процессе реакции. Сначала определяем Км. При концентрации субстрата» Км измеряем начальную скорость реакции (скорость расходования ТЛРН, определяется с помощью спектрофотометра) при нескольких концентрациях фермента и строим график зависимости начальной скорости от концентрации фермента. График должен быть линейным, а угол его наклона является мерой активности ЛДГ. 7.
(6), (д), (ж). 8. а) 1,7 10 з М; б) 0,33; 0,67; 0,91; в) верхняя кривая соответствует ферменту В (лля этого фермента [Х[ > К»,), а нижняя кривая — ферменту Л. 9. а) 400 с'; б) 10 мкМ; в) а = 2, а' = 3; г) смешанный тип ингибирования. 10. а) 24 нМ; б) 4 мкМ (гй 'Л $~,„»„ так что[ Л[ = Км); в) 40 мкМ (о, = ',~, (г„».„,так что [Л] = 10 К», в присутствии ингибитора); г) не достигает; /г,„,~К»1 = = 0,33/(4 10 в М ' с ') = 8,25 10" М ' с ', что значительно ниже лиффузнонно контролируемого предела. СЕ 'г»,„„.
- 140 мкМ/мни, Км - 1 10 "' М. 12. а) г»».„= 51,5 мМ/мин, Км = 0,59 мМ; б) конкурентное ипгибирование. 13. Км = 2,2 мМ, (г»»,„= 0,50 мкМ/миш 14. Кривая Л. 15.4,а = 2,0 10з мин '. 16. Сохраняются те же приближения, что н при выводе уравнения Михаэлиса — Ментен. Реакция находится в стационарном состоянии, поэтому скорость реакции описывается уравнением о» = йз[Е5[. Запишем все известные нам соотношения для определения [ЕЗ[: [Е,[ = [Е[ + [ЕБ[» [ЕЦ и [Е1[ = [Е [[1[/К, [Е] можно определить, гюльзуясь уравненном 6-19. Д;пес следует идти тем же путем, что и прн выволс уравнения Михаэлнса-Ментеп.
17. Минимальное значение М, = 29 000. 18. Лктнвность фермента простаты определяется как общая активность фосфатазы в крови за вычетом активности фосфатазы в присутствии достаточного количества тартрата, специфически и полностью ингибирующего зту форму фермента. 19. Смешанный тип ингибирования.
Поскольку значение Км практически не изменяется, это может быть примером особого случая смешанного ингибирования, называемого неконкурентным ингибированием. 20. Значение [5[, при котором гв = $'»»,„'2а', можно найти из правой части уравнения 6-30: [5[/(аК»1 + а'[Я) = ',~з а'. 21. Оптимум ферментативной активности достигается, когда остаток С[е ж протонирован, а остаток Лзрзз лепротонирован.
22. а) Увеличится в 1,96 раз; э„ = 50 мкМ с ', увеличится в 1,048 раз; б) Когда а = 2,0, кривая сдвигается вправо, поскольку Км увеличивается в 2 раза. Когла а' = 3,0, асимптота кривой (значение Е »„) снижается в 3 раза. Котла а - 2,0, а сх'= 3,0, кривая круто поднимается по отношению к кривой, лля которой а = а' = 1,0, из-за уменьшения Км. Однако асимптота кривой низкая, поскольку 1' »„уменьшается в 3 раза. в) Когда а = 2,0, точка пересечения кривой с оськ> х сдвигается вправо. Когда а = 2,0, а а'= 3,0, точка пересечения с осью х смещается влево. г) Для справедливости этого утверждения должны выполняться три условия. (1) А=Т; данные таблицы показывают, что во всех случаях отношение А: Т близко к единице. Очевидно, что вариации этого соотношения значительно слабее, чем вариации отношений А: О и Т: С. (2) О=С; опять же, отношение О: С близко к единице, а лругие отношения варьируют сильнее.
(3) (А + О) - (Т + С); это соотношение пуринов к пиримилинам, которое также близко к единице, д) Разные фракции «ядра» соответствуют разным участкам ДНК нроростков пшеницы. Если бы ДНК представляла собой монотонно повторяющуюся последовательность, нуклеотилный состав всех участков был бы одинаковым. То, что разные фракции «ялра» имеют разньш состав, говорит о более сложном характере последовательности.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
