М.А. Пальцев, А.А. Иванов - Межклеточные взаимодействия (1120989), страница 49
Текст из файла (страница 49)
У С5-дефицитных животных наблюдалась аналогичная картина [ЗсЬг!)тег С. е( а!., 1990[. Очевидно, хемоаттрактантные факторы комплемента не играют ведущую роль в этом процессе. Нейтрофилы могут связываться с антителами к ГБМ через Рс-рецептор. Использование Р(аЬ')т-фрагментов этих антител приводило к значительному уменьшению аккумуляции нейтрофилов, подтверждая данное предположение. Механизмы повреждения гломерулярного фильтра достаточно разнообразны, в них участвуют лизосомные ферменты, реактивноокислительные продукты нейтрофилов, прямое действие комплемента через мембранно-атакующий комплекс (С5Ь вЂ” С9) [Сгоййе! С.
е( а!., 1985[. Развивающееся повреждение приводит к активации эндотелиальных и мезангиальных клеток, продукции нми ФАТ, МСР-1, ТхАт (ЛтВх), ряда цитокинов (ИЛ-1, ИЛ-6, ФНО„ ИЛ-8) [АЬЬопо Н., 1993[. Активнрованные эндотелиальные клетки экспрессируют на своей поверхности ряд адгезивных молекул, обеспечивающих адгезию лейкоцитов к эндотелию. Уже через 2 — 4 ч после развития повреждения эндотелиальные клетки экспрессируют лиганд для 1.-селектина [Вгаду Н. и. е( а[., 1992[.
Высокий уровень экспрессии лиганда для Ь-селектина сохраняется в течение почти 24 ч. В этот промежуток времени на поверхности эндотелия появляется экспрессия другой адгезивной молекулы-- !САМ-1, что в совокупности с хемоаттрактантами моноцитов ! 98 Рис. 63. Линейное свечение антител к гломерулярной базальной мембране почечного клубочка в гетерологичной фазе анти-ГБМ-нефрита. Прямой иммунофлкюресцентный метод, Х400. Рис. 64. Экссудативно-пролнферативная реакция в гетерологичной фазе анти-ГБМ- нефрита.
МЛ вЂ” мононуклеарные лейкоциты, Энд — эндотелиальная клетка, Х4400. 199 (МСР-1, ЛтВ« ФАТ) обеспечивает смену популяции клеток, инфильтрирующих почечный клубочек 1МцП18ап г(. Р. е1 а!., 1991!. Однако использование антител к !САМ-1 или его лейкоцитарному рецептору С011/СО!8 не предотвращало развитие повреждения. Очевидно, наряду с !САМ-1 движение моноцитов в почечном клубочке регулируют и другие молекулы. К 3-му дню анти-ГБМ-нефрита инфильтрат представлен преимущественно мононуклеарными лейкоцитами (МЛ).
Увеличение моноцитарно-макрофагальной инфильтрации как в гетерологичной, так и в аутологичной фазах анти-ГБМ-нефрита усиливает повреждение гломерулярных структур. МЛ являются одним из главных источником реактивно-окисленных метаболитов, в частности перекиси водорода, нейтральных протеаз и ряда воспалительных медиаторов (ФАТ, ТхАь ИЛ-1, ФНО,). Активированные МЛ продуцнруют тканевый фактор, фосфолипопротеидный кофактор, который активирует коагуляционный каскад.
Хотя до конца неясно, какие стимулы индуцируют макрофагально-прокоагулянтную активность, в этом процессе показана роль иммуноглобулинов, иммунных комплексов, эндотоксина, ФНО„компонентов комплемента, особенно в кооперации с Т-хелперами. Развивающаяся при этом коагуляция управляется с помощью ряда лейкоцитарных рецепторов. Эти рецепторы структурно принадлежат к двух эволкхционно удаленным суперсемействам — интегринов и стероидподобных гормонов !А11!еп' О. С., 19931. Моноциты/макрофаги связываются с фибриногеном/фибрнном через специфический комплементарный мембранный рецептор для фибрнн(оген)а.
Используя нейтрализующие моноклональные антитела, некоторые исследователи независимо друг от друга показали, что фнбриногеновый рецептор на лейкоцитах представляет собой дифференцировочный антнген 1С1)11Ь/СР18 (Мас-1, СЗЬ>- рецептор комплемента)1, относящийся к !)г-интегринам. Фибриногеновый рецептор, экспрессируемый на эндотелиальных клетках, относится к ВрПЬ/П!а (1)>-интегринам). В связи с этим становится ясно, что используемый около 30 лет термин «коагуляционный каскад» не совсем точно отражает суть процесса. Более правильной следует считать концепцию «ограниченного протеолиза», согласно которой коагулопротеолитические механизмы сосредоточиваются на мембранных рецепторах лейкоцитов и эндотелия, координируя баланс между активацией и ингибированием этих рецепторов.
В результате действия медиаторов МЛ и интракапиллярных отложений фибрина происходит повреждение клеток гломерулярного фильтра и в первую очередь эндотелия. Особенно ярко этот процесс протекает в аутологичной фазе анти-ГБМ-нефрита, когда МЛ контактируют непосредственно с оголенной ГБМ, проникая под отслоившийся эндотели>> (рис. б5). В местах отслойки часто видны скопления фибринподобных масс (рис. бб). Повреждение ГБМ индуцирует активацию синтеза компонентов ЗЦМ как подоцитами, так и МК.
Этот процесс контролируется ТФРь количе- 200 Рис. 65. Контакт мононуклеарного лейкоцита (МЛ) с оголенной гломерулярной бааальной мембраной (ГБМ) а аутологичной фазе анти-ГБМ-нефрита. Знд -- эндотелиальная клетка, Х7100. Рис. бб. Скопление фибрннподобнмх масс (Фб) в местах отслойки эндотелия (Энд), Х7100. 20! Рис. 67. Скопление мембраноподобного вещества (МВ) на субзпитвлнальной поверхнсктн гломерулярной базальной мембраны (ГБМ> в аутологичной фазе анти- ГБМ-нефрита, Х2! 000. Рис.
68. Первичная культура почечного клубочка крыс при анти-ГБМ-нефрите. Окраска азур П, метиленовым синим и фуксином, Х320. МЛ вЂ” мононуклеарные лейкоциты, МК --мезаягиальные клетки. 202 нмп Гмнн 1О 50 ЭО Э5 $ ЭО й 15 10 Б 5 Э5 ЗО 16 15 12 р 6 3 О анкн-Гвмк анка.ГБМа ) Мононтклаарнма каакочнкм «рмсм Безоконна зн.кнмнрнна Рис.
69. Соотношение оролиферативной активности мезангнальных клеток и коли- чества моноиуклеарных лейкоцитов в гетерологичной (анти-ГБМГ> н аутологичной (анти-Гвма) фазах анти-ГБМ-нефрита. К вЂ” контроль. 203 ство которого резко возрастает в аутологичной фазе (Со!шЬга Т. е! а)м 1991]. На субэпителиальной поверхности ГВМ при этом обнаруживаются очаги скопления мембраноподобного вещества (рис. 67). Источником ТФРО могут быть как МЛ, так и активированные МК.
Несмотря на активацию МК, продукция МК такого митогена, как ТцФР, в этой модели не выражена. Изучение продукции цитокинов и других аутокоидов наиболее эффективно при использовании культуры МК. При проведении исследования гетерологичной и аутологичной фаз анти-ГВМ-нефрита гломерулярная культура была представлена двумя популяциями клеток — МК гладкомышечного типа и МЛ (рис.
68). Число МЛ в обеих фазах было значительно выше, чем в контроле (рис. 69). Этому соответствовало усиление пролиферативной активности МК. Однако, несмотря на примерно одинаковое число МЛ, пролиферативная активность МК в гетерологичной фазе была более выраженной, чем в аутологичной, что коррелировало с морфологической картиной !и у!уо. Анализ супернатанта показал, что данное расхождение вызвано качественными и количественными изменениями спектра медиаторов, продуцируемых МЛ и МК (рис. 70). Пролиферативная активность МК, без сомнения, вызвана увеличением продукции ИЛ-1 и ФНО,. С помощью тотального облучения в сублетальных дозах показано, что источником этих факторов служат МЛ. В аутологичной фазе уровень этих циэокинов, особенно ФНО, выше, чем в гетерологичной фазе.
ФНО нг/мл (1(ЗЗЕ] 10 Рнс. 70, Продукция меднаторов, секретнруемых в первичной культуре гломерулярных клеток в гетерологнчной н аутологнчной фазах ентн-ГБМ-нефрнта. 1 можно считать ведущим цито- кином аутологичной фазы анти-ГБМ-нефрита. Кроме того, в аутологичной фазе усиливается продукция ИПРФ-!, фактора прогрессии, поддерживающего 15 Время (сугкн1 пролиферацию МК.
Уменьшение пролнферативной активности МК в аутологичной фазе, очевидно, обусловлено высокой 1 концентрацией ФНО. и увеличением количества мРНК для синтеза ТФРе и самого белка в активной форме (Со!аЬга Т. е( а!., !991!. Кроме того, нельзя не учитывать, что одновременно г ИЛ-1 МЛ продуцнруют антагонист рецептора для ИЛ-1. Количество последнего резко возрастает в процессе формирования иммунных комплексов (П!пагейо С., 1992!. Однако ведущую роль в антнпролиферативном влиянии на МК, видимо, 1 играет ТФРя, так как в аутологичной фазе наряду с уменьшением пролиферативной активности МК возрастает продукция 0,1 компонентов ЭЦМ !СоггйЬга Т. е( а!ч 1991).
Аугологнчная фаза Косвенным подтверждением действия ТФРз в культуре служит проявление в аутологичной фазе МК звездчатой формы, характерной только для клеток со сниженной пролиферативной активностью (рнс. 71). Подобные же клетки обнаружены в скоплениях МК, образующих «хиллоки», которые расцениваются многими исследователями как зоны развития склероза. Для оценки роли клеточного и гуморального иммунитета был использован ряд иммуномодуляторов. Метилпреднизолон (МП), иммуносупрессант, влияющий преимущественно на клеточное звено иммунитета, ингибнровал инфильтрацию почечного клубочка МЛ, мало влияя на развитие антнтельного повреждения гломе- 0,1 9 12 10 Контроль 0,1 9 12 15 10 Гетерояогнчная фаза 9 12 15 Рис.
7!. Мезангнальные клетки звездчатой формы в первичной гломерулярной культуре аугологичной фазы знтн-ГБМ-нефрита. Окраска азур !1, метиленовым синим и фуксином, Х320. Рис. 72. Мелкогранулярное свечение крьыиного !йб вдоль гломерулярной базальной мембраны а аутологичной фазе анти-ГБМ-нефрита на фоне действия метилпреднизолона. Прямой иммунофлыоресцентный метод Х400. 205 имп /мап «105 Я5 55 зо 15 з ш о зато-Гвы . мп С", ""] моаоаттааарнма паеаоамм наны Вгломаае зн .тамамтаа оно„ 1е 19 ФР-1 0,5 5 9 12 9 12 15 Звана (о(п) Дны-Гзи+метнлпралннзалон рулярного фильтра в аутологичной фазе анти-ГБМ-нефрита (рис. 72).
Действие МП на пролиферацию МК и МЛ было дозозависимым. Высокие дозы МП более эффективно ингибировали инфильтрацию почечного клубочка, подавляя продукцию ИЛ-1 и ФНО и, как следствие, уменьшая пролиферативную активность МК (рис. 73). Пролиферация МК в культуре осуществлялась, по-видимому, за счет продукции ИПРФ-1 МК. Подавление синтеза ИЛ-1 и ФНО„в МЛ предупреждало экспрессию адгезивных молекул, таких как )САМ-1 на поверхности эндотелиальных клеток. 206 нг/мп р(езт) ай з 2,5 г 3,5 5 2,5 1Л 1 од о Рнс. 25.
Влнвнне метнлпредннтолона (МЩ на аутологнчнуш фазу анан-гвм-нефрнта. а — пролнфератнвназ активность мезангнальнык клеток н соотногпенне количества мононуклеарнык лейкоцитов; б — продукцнз меднаторов, секретнруемык клеткамн первичной гломерулврной культуры. Рис. 74. Мезангиальные клетки звездчатой формы в первичной гломерулярной культуре в аутологнчной фазе анти-ГБМ-нефрита на фоне действия метилпред- низолона. Окраска азур и, метиленовым синим и фуксином, Х320.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
