Ю.А. Золотов - Методы химического анализа (Основы аналитической химии, том 2) (1110130), страница 21
Текст из файла (страница 21)
а ес ентные, Чаше всего в ис ИХА пользуют изотонные, флуаресцен , иа агнитные метки, которые повышают чувствитель- ето анализа (РИА) был предложен в Ргщиоиммуиологнческии метод 1221 конце 50-х годов ХХ в. Возможность определять метку (изотоп 115 очень малых концентрациях позволила достичь высокой чувствительно. сти анализа (до пкгlмл) при высокой избирательности и экспрессности. За разработку этого метода его авторы Р. Йалоу и С. Берсон были удостоены Нобелевской премии в 1977 г. Недостатками этого метода являются огра ниченный срок жизни радиощпивной метки; относительно дорогое оборудование для регистрации радиоакпювности; возможность радиоактивного заражения окружающей среды при проведении серийных анализов. В качестве альтернативы радиоактивным меткам было предложено использовать флуоресцентные метки и ферменты.
Иммуноферментный анализ (ИФА) является в настоящее время одним из наиболее активно развивающихся направлений аналитической биохимии. В этом методе высокая чувствительность определения ферментной метки (менее 10 'з М) сочетается с уникальной специфичностью иммунохимического анализа. Достюкению высокой чувствительности ИФА способствует использование для регистрации активности ферментов различных инструментальных методов — спектрофотомегрических, флуориметрических, хеми- и биолюминесцентных, электрохимических. Использование твердых носителей для иммобилизации антител с последующим специфическим связыванием определяемого соединения на сорбеите и идентификацией образовавшихся иммунокомплексов с помощью меченных ферментами компонентов лежит в основе методов твердофазного (гетерогенного) иммуноферментного анализа.
Метод гомогенного ИФА без использования твердой фазы основан на различии каталитических свойств ферментной метки в свободном виде и в иммунном комплексе. В настоящее время термин «гомогенный иммуноанализ» применяют к любой системе иммуноанализа, в которой специфическая реакция взаимодействия аатигена с антителом и регистращщ глубины ее протекания осуществляются в гомогенном растворе. Отсутствие стадии разделения свободного и меченого определяемого соединения привело к сокращению времени проведениа щьзлиза до нескольких минут. Эго позволило разработать диагностические иммуноферментиые тест- системы для экспресс-определения биологически активных соединений в химической токсикологии, фармакологии, эндокринологни.
Иммунохимические методы, основанные на использовании меченых реагентов, широко применяют для определения биологически активных соединений самой разнообразной структуры — от низкомолекулярных гормонов до высокомолекулярных вирусов и целых клеток. Внедрение гомогенного варианта ИФА в область клинической биохимии содействовало созданию высокочувствительных методов определения гормонов, наркотических и лекарственных веществ. Большим преимуществом этого метода является возможность использования малых объемов анализируемой пробы (5 — 50 мкл) и отсутствие стадии пробоподготовки. 116 е методы анализа все активнее внедряются в ана Иммунохимические методы анели акти и используются в различных о бластях медицины, ва, й и пищевой промышленности, кого хозянства, ва, микробиологическо и объектов окружающей среды.
ри анализе Вопросы Б 9.1 модняамический, н килети" ком анализе важны и тер 1 Почему в гравимегр чески" й аспекты процесса осаждекия? его нгодаость в кач естае осаждаемой 2, Какие свой войстаа осадка опрелеляют лр формы? " б ую "оагуляпию коллоидов при получеКак обеспечить эффекгяааую и ыстр к 3. ини аморфного осадк . а? ы ение астяора на форму пояучающегос ся 4. Как влияет относительное пересыщеаие раствор осадка? о частиц и орнеятации молекул прн 6. Каково соотношение скоро агре остей гацяи ого я исгаллического осадков. получеиви аморфного кр 6.
Назовите ыаиболее эффектяв пр ные немы очистки осадк 7 ость иль оваиня осадков 7. Чем олрелеля~я скор $. Какяе примеси с наибольшей ~ероятн~~ ия, и екный добавлением к нодяту осадки: ) водят бар~, получе Р~ оар""' б) рнл с а, полученный д аале ым аоборот добавле ием а; в) су ат свинца, п к с л агу натрия и, н добавлением нитрата свинца к у агу сульфата натрия к литр яитрату свинца (в каком осадке натрия я ? 9, Какие примеси удаля н ются лри прокаливаяии осадка.
сткн осадка? 16, Всегда ли переосаждеп ение екгявяо для очистки о азовать нммовскне кристаллы: ВаБО,— 11. Какая пара соединений может образовать грнммовскне ; ВаБΠ— РЬБ04 ВаБО, — БгБО„? 12. Назовите наиболее эффективные приемы получения кр осадков оксалата кальция. ванин кристаллических и 12. Укажите основные причины р лоте ь и промывая аморфных осадков. иа осадке МБ)ЧН РО„ле влияет яа результаты 14 Почему адсорбция МБНР04 иа осадке МБ о деления магния.
? ? пре П в исугстаии алюминия. 16. Как осадип, железо (1 в пр я аммиаком следует добавги ата оксида алюминия амм 16. Почему при осаждении гидр апъ метиловын краса ыйэ етилглиоксимата никеля еля прн определении пикеля 17 Почему при осаждении диметилг кислоту? 12. Какая осаждаемая форма при определении к СаБО,, СаСОз, СаСдО, НзО, Сарг? 117 1. Какова роль кривых тнтровання7 2. В каких коордннатзх строят кривые в разных методах тнтровання? 3. Обязательно лн совпаденне точкн эквнвалентносгн н конечной точки тнтро.
ванна? 4. Назовите факторы, влняющне на внд кривой тнгровання (велнчнна скачка, положенне точки эквивалентности, наклон ветвей). 5. Можно лн отгнтровать в водном растворе прямым способом борную кислоту, солн аммоння, ацетат-нон? 6. Сколько скачков на кривых тнзровання щавелевой, серной„этнленднамннтетрауксусной, угольной н фосфорной кислот гндроксндом натрия; карбоната натрня, фосфата натрия н гидразина соляной кнслотой? 7. Почему скачок тнтровання борной кислоты увеличивается в присутствии глнцернна? 8.
Укажнте на крнвых титровання области буферного действия, а также точку с максимальной буферной емкостью. 9. Как отгнтровать угольную кислоту по второй ступени, фосфорную кислоту по третьей ступени? 10. Какие приемы нспользуют для тнтровання кислот н оснований с констюпвмн менее !Ом? 11. Какие приемы используют для тнтровання смеси злекгролнтов с блнзкнмн консгантамн7 12. Приведите примеры снмметричных н асимметричных кривых окнслнтельновосстановнтельного тнтровання.
13. Назоввте окнслителн н восстановнтелн, прнменяемые для предварительного окисления н восстановлению тнтруемых веществ. 14. Обьясннте роль защитных смесей прн титрованнн железа (Щ перманганатом калия в присутствии хлорид-нона 15. Почему ноднд калия нельзя использовать для прямого тнтровання меди? 16. Напншиге реакцнн, протекающие прн тнтрюиегрнческом определении: а) белильной нзвестн, нитратов, железа (1П), пероксида водорода, брома, хлора, хрома (У1), хрома (П1), сульфндов, сульфнтов иодометрнческн; б) перокснда водорода, нитратов, диоксида марганца, кальция (П), марганца (П) перманганатометрнчески. 17. Как повысить селектнвносп, комплексонометрнческого титровання? 18. Почему в комплексонометрнн столь большое значение имеет РН раствора7 19. Как определить сульфат- н оксалат-ноны, нспользуя ЭДТА? 20.
В каких случаях крнвая осалнтельного тнтровання симметрична, в каких— асимметрична? 21. Как связана велнчнна РК, адсорбцнонного индикатора с нятервалом РН осалительного тнтровання? 22. Почему теоретические н экспернментальные крнвые тнтровання не всегда совпадают? 23. В каких случаях применяют обратное тнгрованне? ы специфических индикатоРов. й нлн вос- 24, ПР~~~ е„ьное ппрованне окнслнтеле н какнх с словнях возможно Разд 25. Р сгановнтелен " в смесн? нтрованнн оксалат-нонов нео д бхо н- и манганатометрнческом титро 26 Почему прн пер МО еванне раствора? нть и манганатометрнческн е н яре(11) н Т1(1П) в е н7 27.
„1 но лн определять ер вать тносульфат натрня дн н нхроматом калия прямым 28. П чему нельзя отгнтр~ сносе м? сешгг-нон нОдомегрнческн ' ? овнях определяют арсенат-нон н арсен 29. В каких условнях опре е еленин меди (П) необходим избыток 30. Почему п п н нодомезрнческом определении меди ноднда калня. я? нй П аствором ЭДТА с эрнохромовым нельзя отппровать кальций (П) раствором 31, Почему нельзя черным? тов кальция, никеля, молибдена (У1)? ехном ня комплексонатов кальция, минна проводят методом 33.
Почему комплексонометрнчес титро кое ванне алюминия обратного титр овання? ечать в комплексомегрнн. ни, которым должны отвечать титржпы 34. Назовите кр й способности комплексонов. 35. Объясните пр нчнны высокой реакционном снос н тнтрантов в комплексо- 36, Какова роль к оль констант дяссоцнацнн в ар х акт нстнке титр номегрнн7 способа вання? 37. Что определяет выбор спосо титро ексоно нческого тятровання по сра о вненню 38.
Назовите преимущества комплексонометр с комплексометрнческнм. онов н комплексонато в используют при вы- 39. Какие характеристики комплексоно боре оптимальных условий титровання? твтровання? в на о~пимальные условна твтро 40. Как влияют свойства металлоннднкаторо елнчн скачка на крнвон компл ексометрн- 41. Назовнте факторы, влияющие на величину ческого тнтровання. ного аствора на результаты комплексономег- 42. Как влияют состав н РН буферного раствора на реву рнческого тнтровання.
7 й 9.3 в «ову книетнческнх методов в нх катюш 1. К овы прннцнпы, положенные лаптах? тнческом и некаталнтнческом вар вляемые к индикаторным Рц~~~ П ечнслнте требования, предъя наблюдечаще в сего в кннетнческнх методах для на 3 Какие способы используют ння за скоростью ннднкатор Р като ной реакции? и фнкснров — тангенсов, фиксированного времени и н ванной концентрацнн — является самым: а точным; для автоматизации? 118 119 5. Каковы преимущества и и недостатки кинетических методов в их каталвт ском в иекатазигнческом вариантах? каталвтиче- 6.
Каковы области вм пр енеяия кинетических методов? Приве использования. ряведвте примеры щ ядава 10. Эдектрохимические методы б 9.4 1. Что является акал итяческвм сигяалом в биохимических нето ? 2. Каковы особен ности деиствяя фермента как каталязато а? одах 3. Какие компоненты ф м ора. фермевтатввцого процесса могут быль олре ел ф меитатцвиым методом? определены фер- Ч Чем ограничены нижняя и верхняя границы определяемых содержаний субстрата, фермента и вигибвтора? 5. Какойлрви ппсл 6.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
