Г. Кристиан - Аналитическая химия, том 2 (1108738), страница 90
Текст из файла (страница 90)
Измерьте времена удерживания и площади пиков. Площадь пика можно найти расчетным путем (как произведение высоты на ширину на половине высоты), по взвешиванию бумаги (вырезав пик по контуру) или электронным интегрированием (если прибор позволяет это делать и выводить результаты на печать). Пользуясь электронными таблицами, постройте градуировочный график в виде зависимости площади пика от концентрации. Анализ проб. Преподаватель предоставит вам три или более проб. Это могут быть, в частности, напитки с повышенным содержанием витамина С, виноградный напиток, апельсиновый сок и т.
д. Введите в хромато~раф по 10 мкл каждой пробы и получите хроматограммы. Каждая из них может содержать несколько пиков. Если позволяет время, снимите не менее двух хроматограмм каждой пробы. По величинам времен удерживания установите, в каких из проб содержится витамин С. Измерьте площади пиков витамина С и по градуировочному графику найдите его концентрации в соответствующих пробах. Если вы выполнили хроматографирование два или более раз, рассчитайте средние значения и (если повторных хроматограмм более двух) стандартные отклонения. Пики витамина С могут частично перекрываться с соседними.
В таких случаях экстраполируйте пик до базовой линии и измеряйте площади от базовой линии. ХРОМАТОГРАФИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ. Работа 34 Работа 34. Анализ анальгетиков методом высокоэффективной жидкостной хроматографии Основы Качественный состав анальгетиков (Вп(Тепп, Апастп, Ешртпп, таблетки аспирина под разными торговыми названиями и т, д.) устанавливают посредством сравнения их хроматограмм с хроматограммами чистых растворов аспирина, фенацетина и кофеина. Количественно содержание аспирина в каждой пробе находят путем сравнения площадей пиков для проб и стандартных растворов.
Разделение проводят на колонке с сильноосновным анионообменником, используя УФ-детектор. Реактивы и растворы 1. Имеются влаборатории '. Аспирин(ацетилсалициловая кислота), фенацетин (ацетофенетидин)„кофеин (теин, 1,3,7-триметилксантин), метанол, подвижная фаза (раствор 0,01 М бората натрия + 0,005 М нитрата аммония). Структурные формулы аспирина, фенацетина и кофеина приведены в описании работы 26. 2.
Готовят перед работой.** (а) Исходные растворы аспирина, фенацетина и кофеина. Возьмите навески фенацетина и кофеина по 50 мг с точностью до 1 мг и перенесите их в подписанные мерные колбы объемом 50 мл. Растворите вещества в метаноле и разбавьте им растворы до метки. Возьмите навеску аспирина массой 150 мг с точностью до 1 мг, перенесите в подписанную мерную колбу объемом 50 мл, растворите в метаноле и разбавьте им до метки. Растворы следует готовить в день выполнения работы. (б) Рабочие стандартные растворы аспирина. Из исходного раствора аспирина с концентрацией 300 мг/дл путем разбавления метанолом приготовьте стандартные растворы с концентрациями около 200, 100 и 50 мг/дл.
Методика 1 . Градуировка. Руководствуйтесь указаниями преподавателя о порядке работы на приборе, включая необходимую настройку для каждой пробы. В состав прибора входит колонка с сильноосновной анионообменной смолой. Для типичного давления 1000 фунтов на квадратный дюйм (-70 атм) скорость потока составляет около 0,5 мл/мин. При помощи шприца объемом 5 или 10 мкл введите аликвоты 5 мкл каждого из стандартных растворов аспирина, фенацетина и кофеина с концентрацией 100 мг/дл и получите соответствующие хроматограммы. Таким же образом снимите хроматограммы для остальных стандартных растворов аспирина (если позволит время, то по несколько повторных). * Кофеин и фенапетин можно приобрести у фирмы Зткюа-А!ог1сть Аспирин в растворах склонен к разяожению, поэтому анализ его растворов нужно выполнять по возможности сразу после их приготовления.
ПРАКТИЧЕСКИЕ РАБОТЫ Измерьте времена удерживания веществ, а для аспирина — также площади пиков. Площадь пика можно найти расчетным путем (как произведение высоты на ширину на половине высоты), по взвешиванию бумаги (вырезав пик по контуру) или электронным интегрированием (если прибор позволяет это делать и выводить результаты на печать). Пользуясь электронными таблицами, постройте градуировочный график в виде зависимости площади пика от концентрации. 2. Анализ проб.
Преподаватель предоставит вам 5 — 6 таблеток: Вц)тепп, Апас)п, Етр)пп, аспирин от фирмы Вауег и 1 — 2 таблетки аспирина других производителей. Приготовьте раствор каждого препарата в метаноле. Для этого измельчите таблетку пестиком в ступке, возьмите навеску около 175 мг с точностью до О,1 мг, перенесите в мерную колбу объемом 50 мл, растворите в метаноле и разбавьте до метки. Хорошо перемешайте растворы и, если присутствует нерастворившийся остаток, дайте ему осесть в течение 10 мин.
Затем снимите хроматограммы, как описано выше, вводя аликвоты объемом 5 мкл. Если позволяет время, получите по две хроматограммы каясдого образца (запись каждой хроматограммы длится 10 — 15 мин). По временам удерживания идентифицируйте компоненты каждого анальгетика. Измерьте площади пиков аспирина и определите его содержание в каждой таблетке при помощи градуировочного графика. Если пик аспирина перекрывается с другим пиком, экстраполируйте его до базовой линии и измеряйте площадь пика от базовой линии.
Для образцов, для которых было записано по две хроматограммы, рассчитайте средние значения. Кинетические методы анализа Работа 35. Ферментативное определение глюкозы в крови * Основы Проба объемом 0,5 мкл представляет собой фильтрат цельной крови, сыворотки или плазмы, освобожденный от белков осаждением гидроксидом цинка. Глюкоза, содержащаяся в аликвоте пробы, взаимодействует со смесью ферментов глюкозооксидазы и пероксидазы хрена. Выделяющийся при этом пероксид водорода взаимодействует с о-дианизидином, образуя окрашенный продукт с максимумом поглощения при 540 нм.
Уравнения реакций глюкозооксилаза г ° ° о, н,о ° « ° н,о, пероксзщаза хрена н,о,+,.~~ р ~ р о (максимум поглощения при 540 им) Об искусственных пробах см. первую сноску на стр. 442. КИНЕТИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ АНАЛИЗА. Работа 35 Реактивы и растворы* Имеются в лаборатории. (а) 2,2%-й раствор сульфата цинка Хп804 7Н О 3 М Н ЯОа. (б] Раствор гидроксида бария, насыщенный. Добавьте приблизительно 80 г Ва(ОН)з 8НзО к 1 л кипящей воды.
Затем прекратите нагревание, закройте сосуд пробкой с хлоркапьциевой трубкой, заполненной патронной известью, тщательно перемешайте раствор и оставыпе его на несколько дней до полного оседания осадка. При 25 'С концентрация раствора составляет около 0,22 М. (в) Раствор гидроксида бария, 0,06 М. Разбавьте 270 мл насыщенного раствора гидроксида бария до 1 л водой, не содержащей СО (прокипяченной и охлажденной). На нейтрализацию 10,00 мл раствора сульфата цинка должно пойти 9,00 ь 0,10 мл этого раствора.
Проверьте это, поместив 10,00 мл раствора сульфата цинка в коническую колбу объемом 100 мл, добавив 25 мл воды и 2 капли 0,2%-го спиртового раствора фенолфталеина и титруя раствором гидроксида бария до появления устойчивого бледно-розового окрашивания. При необходимости разбавьте один или другой раствор так, чтобы достичь требуемого соотношения эквивалентных объемов. Готовят перед работой.
[а) Глицериновый буферный раствор с рН 7,0. Растворите 0,35 г Ха НР04 и 0,21 г КНтР04 в 60 мл воды и добавьте 40 мл химически чистого глицерина. (б) Ферментный реактив. В чистой сухой ступке разотрите 250 мг глюкозооксидазы и 5 мг пероксидазы хрена с 1 мл глицеринового буферного раствора. Смойте кашицу глицериновым буферным раствором в мерный цилиндр объемом 100 мл и доведите буферным раствором до 100 мл. Профильтруйте содержимое цилиндра в чистую сухую колбу. Для ускорения процесса фильтруйте через воронку Бюхнера при слабом отсасывании.
Растворите 10 мг о-дианизидина в 1,0 мл абсолютного метанола при периодическом встряхивании. Перенесите раствор в сосуд из темного стекла и добавьте профильтрованный раствор ферментов. Первую порцию раствора прибавляйте быстро, чтобы избежать выпадения о-дианизидина в осадок. При хранении в холодильнике раствор устойчив 3 недели. Можно нспольэовать имеющиеся в продаже растворы реактивов. В этом случае необходимость прнготовлення соответствующнх растворов отпадает. ПРАКТИЧЕСКИЕ РАБОТЫ (в) Стандартные растворы глюкозы. Приготовьте исходный 1%-й раствор, растворив в воде точную навеску химически чистой глюкозы (предварительно высушенной в сушильном шкафу при 110 'С в течение 1 ч) и разбавив до метки в мерной колбе объемом 100 мл 0,25%-м раствором бензойной кислоты, используемой как консервант.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
