Г. Кристиан - Аналитическая химия, том 2 (1108738), страница 88
Текст из файла (страница 88)
При этом концентрация кальция в разбавленной пробе увеличивается, соответственно, на 2,5, 5,0 и 7,5 ррш !или около того, в зависимости от точного значения концентрации стандартного раствора; в диапазоне этих величин находится и само значение концентрации кальция в пробе). Изменением объема раствора можно пренебречь. Для дозировки стандартного раствора используйте подходящую шприцевую пипетку (например, пипетку ЕррепдогГ или Р)пп на 50 мкл) либо градуированную пипетку объемом 0,1 мл. Для большей точности пипетку следует откалибровать !см. гл. 2).
Установите нулевое показание прибора по дистиллированной воде, а затем распылите разбавленный раствор пробы и растворы с добавками. При этом величины оптических плотностей будут возрастать в соответствии с возрастанием концентрации кальция. При помощи электронных таблиц постройте зависимость оптической плотности от концентрации добавленного кальция !начиная с нулевой, т, е, с чистой пробы). По отсекаемому осью абсцисс отрезку найдите концентрацию кальция в разбавленной пробе. О построении градуировочцых зависимостей по методу добавок и расчете концентрации аналита в пробе см. гл. 17. Рассчитайте концентрацию кальция в исходной пробе. За счет чего применение метода добавок позволяет скомпенсировать мешающее влияние фосфатов? Для этого можно приготовить исходный !в 20 раз более концентрированный) раствор, содержащий ! 40 ммоль эквкл 24а и 4, ! ммоль эквлл К, растворив 8, ! г !4аС! и 0,2 ! г КС! в ! л воды.
Концентрации Ыа и К соответствуют их нормальному содержанию в сыворотке крови и при анализе позволяют скомпенсировать эффекты, обусловленные ионизацией. В ходе приготовления стандартных растворов разбавьте этот раствор в 20 раз. ПРАКТИЧЕСКИЕ РАБОТЫ 432 Работа 30. Определение натрия методом атомно-эмиссионной спектрометрии в пламени Основы Измеряют интенсивность испускания атомов натрия в пламени при 589,0 нм и сравнивают ее с интенсивностями испускания для стандартных растворов.
Если прибор позволяет выполнять измерения методом внутреннего стандарта, используют отношения интенсивностей испускания натрия и лития. Реактивы и растворы 1. Исходный стандартный раствор ИаС! (1000ррт Ма). Высушите около 1 г ХаС1 при 120 'С в течение 1 ч и охладите (30 мин). Взвесьте 0,254 г )ЧаС1, растворите в воде и разбавьте до 1 л. Следует принимать меры предосторожности против загрязнения растворов натрием извне — особенно из воды и посуды.
Для внесения поправки на содержание натрия в воде необходимо провести контрольный опыт. 2. Раствор внутреннего стандарта й!ХО (! 000 ррт Тг)..Нужен только при выполнении измерений методом внутреннего стандарта. При измерениях абсолютным методом этот раствор не требуется. Растворите 0,99 г Ь|)х)03 в воде и разбавьте до 100 мл. 3. Рабочие стандартные растворы." (а) Измерения абсолютных интенсивностей. Приготовьте стандартные растворы )Ча с концентрациями О, 10, 20, 30, 40 и 50 рргп разбавлением, соответственно, О, 5, 10, 15, 20 и 25 мл исходного раствора )ЧаС1 до 50 мл.
Для некоторых приборов целесообразнее использовать растворы с концентрациями в пять раз меньшими, разбавляя О, 1, 2, 3, 4 и 5 мл исходного раствора, — в этом случае градуировочный график может получиться ближе к линейному. Руководствуйтесь указаниями преподавателя. (б) Измерения относительных интенсивностей (метод внутреннего стандарта). Приготовьте серию стандартных растворов натрия, как описано выше, но в каждый раствор перед разбавлением добавьте по 5 мл исходного раствора лития. В этом случае концентрация лития во всех растворах составит 100 ррш.
Для разных приборов оптимальная концентрация Объектом анализа может служить простой раствор ЫаС! либо сыворотка крови. В последнем случае стандартные растворы следует готовить а более узком концентрационном диапазоне, непосредственно охватыаающем содержание натрия а пробе. Концентрация натрия и сыворотке крови ссстааляег около 140 ммоль экадл или 3200 ррщ.
Для анализа пробу достаточно просто разбавить а 100 (например, 0,1 мл до 10 мл) или 500 раз и зааисимости от чувствительности прибора. Можно приготовить искусственную сыаоротку крови, растворив а воде следующие вещества а указанных количествах (г) и разбавив раствор до 1 л: )чаС! 8,072 КС! 0,21 КНзр04 0,18 СаС! .2НзО 0,37 М8804 7Н О 0,25 Этот раствор содержит 138,1 ммоль экавл Ха (его содержание можно несколько изменять от пробы к пробе).
В качестве источника белка к раствору можно добавить 60 г бычьего сыаороточного атьбумина (сыаоротка содержит около бя по массе белков). 433 ХРОМАТОГРАФИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ. Рабата 31 лития может быть различной, поэтому преподаватель может предложить вам добавить другое количество лития. Подготовка к работе Высушите МаС! при 120 'С в течение 1 ч и охладите в эксикаторе.
Методика Получите у преподавателя мерную колбу объемом 100 мл, содержащую анализируемый раствор. 1. Измерения абсолютных интенсивностей. Разбавьте анализируемый раствор водой до метки. При работе на приборе следуйте указаниям преподавателя.
Иногда для работы можно использовать атомно-абсорбционный спектрометр, поскольку некоторые из них позволяют измерять интенсивность испускания света. Распылите в пламя горелки дистиллированную воду (раствор контрольного опыта) и установите нулевое показание прибора. Затем распылите стандартные растворы и измерьте для них интенсивности испускания. Для некоторых приборов требуется установить 100огтное значение интенсивности по самому концентрированному стандартному раствору. Пользуясь электронными таблицами, постройте зависимость интенсивности испускания от концентрации натрия в стандартных растворах и найдите концентрацию натрия в пробе по градуировочному графику.
Из полученного значения рассчитайте общее содержание (мкг) натрия в пробе (при анализе воды) или концентрацию его в исходной пробе в ррш или ммоль эквдл (при анализе сыворотки крови; см. сноску на стр. 432 стр.). 2. Измерения методом внутреннего стандарта. Добавьте к пробе то же количество раствора лития, что и к стандартным растворам, и разбавьте водой до метки.
При работе на приборе следуйте указаниям преподавателя. Линия испускания лития наблюдается при 670,8 нм. Постройте градуировочный график в виде зависимости отношения интенсивностей линий испускания Тча и Ь! от концентрации натрия. Определите концентрацию натрия в анализируемом растворе и рассчитайте общее содержание (мкг) натрия в пробе (при анализе воды) или концентрацию его в исходной пробе в ррш или ммоль эквул !при анализе сыворотки крови; см. сноску на стр.
432). При расчетах пользуйтесь электронными таблицами (см. гл. 20: построение градуировочного графика методом внутреннего стандарта и соответствующие расчеты). Хроматографические методы Работа 31. Разделение аминокислот при помощи тонкослойной хроматографии Основы Аминокислоты разделяют на пластинке для тонкослойной хроматографии (ТСХ) — например, с силикагелем, — используя одну из двух подвижных фаз на выбор.
В качестве проявляющего реагента применяют нингидрин. ПРАКТИЧЕСКИЕ РАБОТЫ 434 Реактивы и растворы Имеются в лаборатории (в) Подвижные фазы: № 1, смесь бутанола, уксусной кислоты и воды (80; 20: 20 по объему); № 2, смесь пропанола и воды (7: 3 по объему). (б) Проявляющий реагент: 0,30~о-й раствор нингидрина (1,2,3-трикетогидринден, Еаэипап № 2495) в бутаноле, содержащем 3',4 ледяной уксусной кислоты.
Хромвтсгрвфическое оборудование Пластинки для ТСХ из комплекта Е1злег Бс(епййс Т1.С Кй А ((зпр:дизчтч. Взйегебп,сош) или аналогичные, распылитель (для опрыскивания раствором проявляющего реагента), хроматографическая камера (напрнмер, из комплекта Е(зЬег Бс)еппйс ТЕС Кй А илн аналогичная). Методика Получите у преподавателя для анализа раствор смеси аминокислот, содержащий приблизительно 1 мг каждой аминокислоты в 1 мл 0,5 М спиртового раствора НС! (см.
комментарии ниже). Нанесите -1 мкл этого раствора в виде пятнышка на хроматографическую пластинку на расстоянии около 2 см от нижнего края. Предварительная обработка пластинки не требуется. Аминокислоты, содержащиеся в пробе, по крайней мере для одной из предлагаемых подвижных фаз значительно различаются по величинам параметра лу, поэтому их легко можно будет разделить. Чтобы отличить аминокислоты, содержащиеся в пробе, от других с близкими значениями Я, одновременно с пробой проведите хроматографнрование некоторых растворов чистых аминокислот (преподаватель укажет вам, каких именно).
После нанесения пробы оставьте пластинку сушиться в течение 15 — 20 мин до полного удаления паров НС1. Выберите одну из двух подвижных фаз и выполните хроматографирование пробы на пластинке так, чтобы фронт подвижной фазы прошел расстояние около 10 см (это должно занять около 90 мин).
При выборе подвижной фазы руководствуйтесь приведенными ниже в таблице величинами Аг аминокислот и указаниями преподавателя. Высушите хроматографическую пластинку, опрысните ее раствором нингидрина и осторожно подогрейте несколько минут до отчетливого проявления отдельных хроматографических зон. Идентификация аминокислот Ниже приведена таблица с приблизительными значениями л 13 различных аминокислот для двух подвижных фаз. Пользуясь этой таблицей и принимая во внимание результаты хроматографирования индивидуальных аминокислот, установите, какие аминокислоты содержатся в анализируемой смеси. Комментарии Ввиду ограниченной растворимости многих аминокислот в спирте приготовлению анализируемой смеси следует уделить особое внимание.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
