Г. Кристиан - Аналитическая химия, том 2 (1108738), страница 87
Текст из файла (страница 87)
Содержание и-ксилола при этом составит 45, 35 и 25'.4 (об.) соответственно. Методика Порядок работы на приборе вам объяснит преподаватель. Обращайтесь с кюветой для ИК-спектрометрии осторожно, не берите ее пальцами и не допускайте контакта ее с водой. Заполните кювету чистым м-ксилолом и запишите его спектр в диапазоне 2 — 15 мкм (убедитесь, что зарегистрирован последний пик перед значением длины волны 15 мкм, соответствующий волновому числу 692 см '). Перед каждой записью спектра устанавливайте 088 пропускания, перекрыв непрозрачной заглушкой световой поток, падающий на пробу. Затем опорожните кювету, промойте ее, заполните ее и-ксилолом и запишите его спектр.
Точно так же запишите спектр о-ксилола и всех стандартных смесей. По спектрам чистых компонентов выберите по одному пику для определения каждого из них. Для каждого вещества рассчитайте величину !я(Ро/Р), используя метод базовой линии (см. рис. 16.11). Для мета- и пара-изомеров постройте градуировочные графики в виде зависимостей ) в(Р~Р) „,, ( )ц(Р~Р),р, и 1~(РоУР) „р, 7 1д(Ро(Р)ор, от концентрации соответствующего (мета- или лара-) изомера. О создании электронных таблиц для построения градуировочных графиков с использованием внутреннего стандарта см.
гл. 20 и компакт-диск. Получите у преподавателя смесь мета- и пара-изомеров ксилола для анализа. Смешайте ее с о-ксилолом в соотношении 70: 30 по объему. Запишите спектр смеси и, используя ранее выбранные пики, методом базовой линии рассчитайте величины! я(РоУР)Ля(Р ~Р),л, для каждого нз определяемых компонентов. При помощи градуировочных графиков определите объемную долю (О4) м- и и-ксилола. Найденные величины разделите на 0,7, чтобы перейти к содержаниям в исходной смеси. Работа 28. Флуориметричеокое определение рибофлавина (витамина В2) Основы Рибофлавин обладает сильной флуоресценцией в среде 5О тй уксусной кислоты.
Для нахождения оптимальных длин волн возбуждения и регистрации флуоресценции записывают соответствующие спектры (возбуждения и испускания флуоресценции). Содержание рибофлавина находят по градуировочной зависимости. Реактивы и растворы Стандартные растворы рибофлавина. Приготовьте исходный раствор рибофлавина с концентрацией 100 ррш. Для этого возьмите точную навеску вещества ПРАКТИЧЕСКИЕ РАБОТЫ 428 массой около 50 мг, перенесите ее в мерную колбу объемом 500 мл, растворите и разбавьте до метки 5'Ъ-м (по объему) раствором уксусной кислоты. Раствор следует хранить в холодном темном месте.
Непосредственно в день эксперимента приготовьте рабочий стандартный раствор с концентрацией 10 ррш, разбавив аликвоту исходного раствора в соотношении 1: 10. Затем разбавьте аликвоты рабочего раствора 5'.4-й уксусной кислотой таким образом, чтобы получить стандартные растворы с концентрацией рибофлавина 0 (раствор контрольного опыта), 0,2, 0,4, 0,6, 0,8 и 1,0 рргп. Методика Для раствора с концентрацией рибофлавина 0,6 ррш запишите спектры возбуждения и испускания флуоресценции, чтобы определить оптимальные длины волн возбуждения и регистрации свечения. Если возможности прибора не позволяют это сделать (в случаях, когда флуориметр снабжен лишь набором светофильтров), измерьте интенсивности флуоресценции с различными первичными (входными) и вторичными (выходными) светофильтрами и найдите комбинацию, обеспечивающую максимальный сигнал.
В найденных условиях измерьте интенсивность флуоресценции раствора с концентрацией 1 ррш и примите ее за 100'~о. Измерьте интенсивности флуоресценцин остальных стандартных растворов и постройте градуировочный график. Получите анализируемый раствор в мерной колбе объемом 50 мл, разбавьте его до метки 5; о уксусной кислотой и нзмерьте интенсивность его флуоресценции. По градуировочной зависимости рассчитайте общее содержание рибофлавина (мкг) в пробе. Для расчетов используйте электронные таблицы.
Методы атомной опектрометрии Работа 29. Определение кальция методом атомно-абсорбционной спектрометрии Основы В ходе работы предстоит изучить влияние инструментальных параметров, а также фосфатов и алюминия на величину оптической плотности атомного пара кальция (см., например, [%. Ноз!с!пз е! а!., Х СЬет. Ей., 54 (1977) 1281). Содержание кальция в искусственной пробе или сыворотке крови определяют по градуировочной зависимости.
Реактивы и растворы Растворы Са (50 ррш), 8гС! (4',4-й), )ЧаС! (2000 рр|п), фосфатов (! 00 ррш), этанол. 1. Имеются в лаборатории: этанол, 4;ий (масса: объем) раствор 8гС!з, исходный раствор, содержащий 140 ммоль эквУл )Ча и 4,1 ммоль эквйл К— см.
сноску на стр. 431. МЕТОДЫ АТОМНОЙ СПЕКТРОМЕТРИИ. Работа Ез 429 2. Готовят перед работой. (а) Исходный раствор Са, 500 ррпь Растворяют точную навеску 1,834 г СаС!з . 2НзО в воде и разбавляют до 1 л в мерной колбе. Разбавлением полученного раствора в соотношении 1: 10 готовят раствор с концентрацией 50 ррш. Из последнего готовят все остальные необходимые в работе растворы кальция (см. ниже). В качестве исходного можно использовать также имеющийся в продаже стандартный раствор Саз с концентрацией 1000 ррш.
(б) Исходный раствор 1ь)а, 2000 ррш. Растворяют 0,51 г ХаС1 в 1 л воды. (в) Раствор фосфатов, 100 ррш. Растворяют 0,15 г ХазНРОв в 1 л воды. (г) Исходный раствор А1, 100 ррщ. Растворяют 0,18 г А!з(80л)з Кз804 24НзО в 100 мл воды. Можно использовать и А1С1, но при добавлении к нему воды будьте осторожны. Изучение влияния инструментальных параметров При работе с прибором следуйте указаниям преподавателя. Для однолучевых приборов лампу с полым катодом перед измерениями необходимо прогреть 30 мин. При использовании двухлучевого прибора достаточно несколько минут. Для работы необходимо воздушно-ацетиленовое пламя и горелка с камерой предварительного смешения.
1. Влияние высоты пламени. Отрегулируйте потоки горючего газа и воздуха так, чтобы пламя имело почти стехиометрический состав (бледно-желтый оттенок). Затем увеличьте подачу так, чтобы пламя стало ярко-желтым (такое пламя называется обогащенным). Это свечение обусловлено наличием частиц углерода — продуктов неполного сгорания. Если же пламя образуется при избытке воздуха (обедненное), то оно имеет голубой цвет. Приготовьте раствор кальция с концентрацией 5 ррш и распылите его в пламя, установив длину волны монохроматора 422,67 нм.
Затем точно отрегулируйте длину волны монохроматора так, чтобы добиться максимального значения оптической плотности. Установите горелку так, чтобы луч света проходил через самое основание пламени. Распылите в пламя дистиллированную воду и установите показание оптической плотности, равное нулю. Затем распылите раствор кальция (5 ррш) и измерьте величину оптической плотности. Последовательно 6 — 8 раз опускайте горелку и измеряйте оптическую плотность в каждом положении. Постройте зависимость оптической плотности от высоты наблюдения в пламени и выберите оптимальную высоту. 2. Влияние соотношения горючий газ: воздух. При постоянном расходе воздуха пошагово изменяйте расход горючего газа, начиная от самого большого (сильно обогащенное пламя) до самого маленького (обедненное). Запишите величины оптической плотности для раствора Са (5 ррш) при каждом значении расхода газа.
Выберите и установите оптимальный расход горючего газа и изменяйте расход воздуха таким же способом. Постройте зависимости оптической плотности от расхода как горючего газа, так и воздуха (при постоянном ПРАКТИЧЕСКИЕ РАБОТЫ 430 Изучение мешающего влияния посторонних компонентов Определение концентрации кальция в пробе Вместо методики, описанной далее, можно использовать методику, основанную на способе добавок. 1. 2. 3.
1. 2. расходе другого компонента). Выберите оптимальные значения расходов горючего газа и воздуха. Является ли такое пламя обогащенным, стехио- метрическим или обедненным? Влияние фосфатов. Приготовьте раствор, содержащий 5 ррш Са и 10 ррш фосфатов. В оптимальных условиях, найденных ранее, измерьте и запишите величину оптической плотности и сравните ее с оптической плотностью для чистого раствора Са 5 ррш. Объясните полученные результаты. Приготовьте раствор, содержащий 5 ррш Са, 10 ррш фосфатов и 1ЧБ ЗгС1 . Приготовьте также раствор, содержащий только 5 ррш Са и 1'4 ЗгС! . Измерьте и запишите оптические плотности для этих растворов. Сравните эти величины с полученными ранее.
Объясните результаты. Влияние натрия. Приготовьте раствор, содержащий 5 ррш Са и 1000 ррш )Ча. Измерьте величину оптической плотности и сравните ее с величиной для чистого раствора Са 5 ррш. Объясните причину различия. Влияние алюминия. Приготовьте раствор, содержащий 5 ррш Са н 10 ррш А1. Измерьте величину оптической плотности и сравните ее с величиной для чистого раствора Са 5 ррш. Приведите возможное уравнение реакции, позволяющее объяснить полученные результаты. Анализ искусственного раствора. Получите у преподавателя раствор для анализа и разбавьте его так, чтобы концентрация Са в нем составляла 5 — 15 ррш.
Из раствора кальция с концентрацией 50 ррш приготовьте серию стандартных растворов с концентрациями О, 2,5, 5, 7,5, 1О и 15 ррш. Если проба содержит фосфаты, к пробе и ко всем стандартным растворам добавьте бгС1 в таком количестве, чтобы его конечная концентрация составила 1%. Запишите значения оптических плотностей (либо величин пропускания или поглощения, которые затем следует пересчитать в оптические плотности) для этих растворов и постройте градуировочный график в вцде зависимости оптической плотности от концентрации.
Определите концентрацию кальция в пробе, пользуясь стандартными приемами. Анализ сыворотки крови. В настоящей или искусственной сыворотке крови (приготовление последней описано в сноске на стр. 432) кальций определяют после разбавления пробы Р'-м раствором бгС! в соотношении 1: 20. В норме содержание кальция в сыворотке составляет около 100 ррш, таким образом разбавленный раствор будет содержать около 5 ррга Са.
К стандартным растворам необходимо добавить натрий и калий в таких количествах, чтобы их концентрации примерно совпадали с концентрациями в пробе. Поместите 0,5 мл настоящей или искусственной сыворотки крови в мерную колбу объемом 10 мл и разбавьте до метки !',4-м раствором ЗгС1г МЕТОДЫ АТОМНОЙ СПЕКТРОМЕТРИИ, Работа 29 431 Если вместо обычной градуировки или для сравнения с ней используется метод добавок, то 2,5 мл пробы раэбавьте 1еге-м раствором ЯгС! до 50 мл. Приготовьте стандартные растворы с концентрациями Са, равными О, 3, 4, 5, 6 и 8 РРш, каждый из котоРых содеРжит также 1еде ЯгС12, 6,9 ммоль эквУл )ь)а и 0,21 ммоль эквУл К *.
По величинам оптических плотностей, измеренных для стандартных растворов, постройте градуировочный график и при его помощи определите концентрацию кальция в пробе. Пользуйтесь электронными таблицами. Метод добавок Для анализа пробы можно использовать данную методику вместо предыдущей. Она иллюстрирует целесообразность применения метода добавок для устранения матричных эффектов. Разбавьте пробу, как описано выше, дистиллированной водой, чтобы получить раствор с концентрацией Са приблизительно 5 рргл !для сыворотки крови это разбавление составит 1: 20; например, можно разбавить 2,5 мл до 50 мл). Аликвоты разбавленной пробы объемом 10,0 мл перенесите пипеткой в три отдельные чистые и сухие пробирки или колбы. Затем добавьте в них, соответственно, 50,0, 100 и 150 мкл стандартного раствора Са с концентрацией 500 ррш !или 25,0, 50,0 и 75,0 мкл раствора Са с концентрацией 1000 ррш, если имеется).
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
