Маркеры, характеризующие гликемический статус и развитие нейрональных нарушений у пациентов с сахарным диабетом 1-го типа (1091720), страница 16
Текст из файла (страница 16)
Такая же картина наблюдалась на всеххроматограммах, полученных нами для выделенного альбумина. Т.е. визуально заметноеувеличение пика II можно получить только в модельных условиях – при значительномокислении или гликировании. Однако нас интересовал коэффициент отношения площадейфлуоресцентных пиков AI/AII.
Для этого альбумин был выделен из сыворотки крови детей состажем СД1 (5 человек), с впервые выявленным СД1 (5 человек) и из контрольной группы (5человек) и анализирован методом ВЭЖХ. Далее рассчитывали отношение площадей пиков,полученных при флуоресцентной детекции. Результаты средних значений представлены нарисунке 40. Цифровые значения приведены в таблице 10.76Рисунок 40. Отношение площадей флуоресцентных пиков ЧСА (AI/AII), выделенного из сывороткикрови детей (три группы).Таблица 10.
Средние значения коэффициента отношения площадей флуоресцентных пиков ЧСА вразличных группах детей.AI/AIIСД1 длительностьзаболевания более 1 годаСД1 вп/вконтроль6.197.139.12Из рисунка 40 и таблицы 10 следует, что хотя коэффициент отношения изменяетсянедостоверно, однако имеет тенденцию к увеличению от группы СД1 со стажем до контрольнойгруппы. Следовательно, у детей с продолжительным сроком заболевания СД1 альбумин сильнееподвержен окислению и гликированию, чем у впервые выявленных, а у детей безметаболического синдрома это влияние ещё менее выражено.При определении количества сульфгидрильных групп получили, что в группе со стажемих содержится в среднем 0,6 ± 0,2 М/М белка; в группе с впервые выявленным диабетом – 0,74± 0,15 М/М белка; а в контрольной группе – 0,73 ± 0,10 М/М белка. Корреляционный анализмежду содержанием SH-групп и коэффициентом отношения площадей пиков AI/AII показалположительную корреляцию r = 0,60.
К сожалению, группы были немногочисленны, и поэтомуничего нельзя сказать о достоверности корреляции. Этот вопрос ещё требует дальнейшегоисследования.Определение кетоамина в ЧСАНа сегодняшний момент большое коммерческое распространение получили методыопределения кетоамина с помощью ELIBA или ТНС.
Первый позволяет определить процентгликированного альбумина от общего его количества, а с помощью второго возможно провести77количественное определение общего кетоамина в крови, но оба метода не дают представления околичестве молекул глюкозы, приходящихся на молекулу альбумина. Таким образом,следующей нашей задачей стало определение кетоамина в альбумине, выделенном изсыворотки, и общего кетоамина, приведенного к единице белка. Также мы провеликорреляционный анализ между этими параметрами и процентным содержанием HbAlc.
Вработе использовали сыворотку крови детей с впервые выявленным СД1 (13 чел.), со срокомзаболевания более 1 года (11 чел.) и контрольную группу (6 чел.). Альбумин выделяли методомаффинной хроматографии, кетоамин определяли с помощью ТНС. «Общий» кетоамин вычисленв единицах мкМ/г общего белка в сыворотке, кетоамин альбумина – в мкМ/г альбумина и, длянаглядности, в М/М альбумина. Концентрацию общего белка и альбумина определяли методомБредфорда. Результаты представлены в таблице 11.Таблица 11. Значения кетоамина в ЧСА, общего кетоамина и HbAlc у детей в трёх группах.контроль«общий» кетоаминмкМ /г белка2.53Кетоамин ЧСАмкМ /г ЧСА2.71Кетоамин ЧСАМ /М альбумина0.18контроль3.212.630.174.7контроль3.351.010.075.7контроль2.772.530.174.6контроль2.882.550.174.9контроль3.242.640.185.22.992.350.165.17.024.880.328.8СД1 вп/в5.391.950.1311.0СД1 вп/в1.505.700.3810.7СД1 вп/в8.686.040.4010.2СД1 вп/в8.917.010.4715.5СД1 вп/в6.265.380.3610.8СД1 вп/в6.073.720.2511.4СД1 вп/в11.145.300.3512.3СД1 вп/в7.824.860.328.7СД1 вп/в3.682.440.168.3СД1 вп/в9.974.970.3310.2СД1 вп/в5.633.900.268.8СД1 вп/в9.644.700.3113.27.054.680.3110.86.933.140.218.1СД1 стаж4.122.500.176.9СД1 стаж4.493.630.249.2группаСредниезначенияСД1 вп/вСредниезначенияСД1 стажHbalc, %5.378СД1 стаж3.692.440.166.8СД1 стаж3.522.020.137.0СД1 стаж5.953.410.23СД1 стаж5.932.670.189.6СД1 стаж5.505.690.389.5СД1 стаж6.344.740.3111.8СД1 стаж1.776.030.409.9СД1 стаж4.683.480.239.0Средниезначения4.813.610.248.78Из таблицы 11 видно, что значение HbAlc у детей из контрольной группы находится внорме, в отличие от детей с СД1, что говорит о корректности выбранных групп.
Значение HbAlcв группе с впервые выявленным диабетом также превышает таковое у группы со стажем,поскольку последняя получает инсулинотерапию, а дети с манифестацией заболеванияпоступают в отделение чаще всего в состоянии острой декомпенсации. Кроме того, группа состажем СД1 была разделена на две подгруппы. В одной из них, условно названной«компенсация», были дети с хорошим гликемическим контролем, которые регулярно получаютнеобходимые дозы инсулина, соблюдают диету и т.д.; среднее значение HbAlc 7,6%. В другойгруппе, условно названной «декомпенсация», у детей наблюдается плохой гликемическийконтроль, т.к. инсулин вводится нерегулярно, диета не соблюдается; среднее значение HbAlc9.96%.
Для наглядности средние значения кетоамина изображены на рисунке 41.Как следует из рисунка 41 и таблицы 11, самое низкое содержание кетоамина в ЧСА,выраженное в М на 1 М белка, наблюдается в контрольной группе (0,16 М/М). Дети с впервыевыявленным диабетом, поступающие в отделение в самом тяжелом состоянии, имеют самыевысокие значения этого показателя (0,31 М/М).
Интересно, что значения кетоамина в ЧСА (рис.41 Б и В) для детей с компенсацией диабета достоверно ниже, чем у детей вдекомпенсированном состоянии (0,19 М/М и 0,30 М/М соответственно), но выше, чем вконтрольной группе. Что же касается «общего» кетоамина (рис. 41А), его показатели такжелогичны для контрольной группы, групп с манифестацией и стажем. Однако, эти значенияодинаковы в группах «компенсация» и «декомпенсация», что, по всей вероятности, отражаетгликирование других белков крови, помимо альбумина, и говорит в пользу необходимостивыделения альбумина из сыворотки.79Рисунок 41. Средние значения кетоамина в различных группах детей: А – содержание «общего»кетоамина в сыворотке, мкМ/г белка; Б – кетоамин в ЧСА, мкМ/ г ЧСА; В – кетоамин в ЧСА, М/М.Далее проводили корреляционный анализ между содержанием кетоамина и HbAlc.
Врезультате получили следующие значения коэффициента корреляции: для кетоамина всыворотке (мкМ/г) r = 0,67; для кетоамина в ЧСА (мкМ/г) r = 0,72; для кетоамина в ЧСА (М/М)r = 0,72. Во всех случаях корреляция была положительной и достоверной. Хорошая корреляциякетоамина в ЧСА и HbAlc говорит о том, что метод выполнен корректно и может использоватьсяв клинике.804.
Выявление дистальной полинейропатии у детей с диабетом 1-го типаДистальная полинейропатия (ДПН) – наиболее распространенное осложнение диабета– характеризуется нарушением структуры и функции периферических нервов.Приэлектромиографическом исследовании наблюдается снижение скорости распространениянервного импульса по аксону.
Клинически наблюдается снижение чувствительности, боли вконечностях и др. При плохом гликемическом контроле приводит к инвалидности. Показано,что ДПН встречается практически у 100% пациентов [65] и проявляется уже в первый годзаболевания [67].В клинической практике принято проводить электромиографическое исследование натретий год после манифестации СД1 [202]. Целью нашего исследования было выявить признакиДПН на самых ранних сроках заболевания СД1, а также установить зависимость междуизменениями параметров ЭМГ и гликированным гемоглобином.
Кроме того, данноеисследование необходимо для дальнейшего изучения нейрональных антител, рассматриваемыхв качестве диагностических маркеров нейропатии. Для ЭМГ исследования были сформированыгруппы детей с продолжительностью диабета от манифестации до 1 года (группа 1, 19 чел.) и состажем более 1 года (группа 2, 43 чел.). Клинические данные обследуемых детей приведены втаблице 12.Таблица 12. Характеристики групп детей с СД1.Группа 119 чел: Д – 10, М – 9Среднее значение ± ДиапазонSDзначенийВозраст (лет)Срок заболевания (лет)Гликированный гемоглобинHbAlc (%)Уровень глюкозы (ммоль/л)Потребность в инсулине(ед/кг)Холестерин (ммоль/л)Триацилглицериды(ммоль/л)* p < 0.058,0 ± 2,60,47 ± 0,462,7 – 13,00,0 – 1,1Группа 243 чел: Д – 19, М – 24СреднееДиапазонзначение ±значенийSD12,1 ± 3,93,0 – 17,05,7 ± 3,12,0 – 13,08,7 ± 2,85,7 – 14,08,7 ± 1,85,1 – 14,80.597,8 ± 2,83,0 – 13,97,3 ± 2,82,8 – 14,00,5 ± 0,30,03 – 1,10,9 ± 0,30,4 – 1,44,9 ± 0,83,2 – 6,34,2 ± 0,72,7 – 5,60.530.000028*0.0030*1,12 ± 0,690,19 – 2,690,79 ± 0,640,21 – 3,850.0598p0.0002*0.0000*Достоверные различия между группами пациентов, помеченные звездочкой, былинайдены по таким параметрам, как потребность в инсулине и содержание холестерина.При проведении ЭМГ определяли следующие параметры: в двигательных нервах –амплитуду М-ответа и скорость распространения возбуждения (СРВ), в чувствительных –амплитуду потенциала действия (ПД) и СРВ.
Для выявления субклинической стадии ДПН81пользовались литературными данными о нормах показателей ЭМГ [203, 204]. Расположениеисследуемых нервов изображено на рисунке 42. Параметры, определяемые с помощью ЭМГ,перечислены в таблице 13.Рисунок 42. Нервы, исследуемые при ЭМГ.Таблица 13. Параметры, определяемые с помощью ЭМГ.исследуемыепоказателиИсследуемые нервыМоторная часть нерваСенсорная часть нерва1) Амплитуда М-ответа1) Амплитуда потенциала действия (ПД)2) Скорость распространениявозбуждения2) Скорость распространениявозбуждениямалоберцовый нервикроножный нервn. peroneusn.
suralisбольшеберцовый нервn. tibialisсрединный нервсрединный нервn. medianusn. medianusУстановили, что частота выявления признаков ДПН в группе I составила 74%, в группеII – 72% (рис.43). Следует отметить, что в группу обследованных с ранним сроком заболевания82были включены семь детей с впервые выявленным диабетом и у всех семи пациентов выявилисубклинические признаки ДПН. Кроме того, были обследованы два ребенка, у которых не былоСД1, но которые имели отягощенную наследственность по СД1 и нарушение толерантности кглюкозе.
ЭМГ выявило у одного из этих детей субклинические признаки ДПН. Следовательно,наглядно показано, что ДПН встречается с высокой частотой на самых ранних стадияхзаболевания СД1.Рисунок 43. Частота встречаемости дистальной полинейропатии в группах детей с СД1 взависимости от срока заболевания, выявленная при электромиографическом обследовании.В дальнейшем сравнение показателей ЭМГ проводили между группами детей ссубклиническими признаками ДПН и без ДПН. Группа детей с ДПН, была разделена на двеподгруппы по сроку заболевания СД1 (группа ДПН I – дети, болеющие СД1 менее года и группаДПН II – дети, болеющие СД1 более года).
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
