Маркеры, характеризующие гликемический статус и развитие нейрональных нарушений у пациентов с сахарным диабетом 1-го типа (1091720), страница 19
Текст из файла (страница 19)
Сравнение уровней аАТ в опытной и контрольнойгруппах по U-критерию Манна-Уитни показало, что в опытной группе достоверноувеличивается содержание антител к белкам ГФКБ и ФРН на 5-ый день после индуцированиядиабета (p=0.0041 и p=0,017 соответственно) (рис. 49 А и Б). В содержании аАТ к белкам S100 иОБМ в опытной группе достоверных изменений по сравнению с контрольной группой необнаружено (рис. 49 В и Г ).Рисунок 49.
Относительный уровень аАТ к ГФКБ (А), ФРН (Б), ОБМ (В), S100 (Г) в сыворотке крови крысопытной (1) и контрольной (2) групп.Достоверность различий в уровне нейрональных аАТ между группами «диабет» и контрольной (понепараметрическому U-критерию Манна-Уитни):- между уровнями аАТ к ГФКБ на 5-ый день после введения STZ р= 0,004;- между уровнями аАТ к ФРН на 5-ый день после введения STZ p= 0,017;- остальные различия недостоверны.Различные нейрональные белки имеют специфическую локализацию в клеткахнервной ткани, и их повышенная концентрация в биологических жидкостях является маркеромсоответствующего повреждения.
Так, ГФКБ является компонентом астроцитов, ФРН –нейротрофический белок, который содержится в нейронах центральной и периферической93нервной системы, S100 находится преимущественно в глиальных клетках мозга ипериферических нервах, ОБМ является одним из основных белков миелиновой оболочки исодержится в олигодендроцитах, астроцитах, шванновских клетках. Появление аАТ к белкамнервной ткани в крови свидетельствует о том, что целостность нервных волокон быланарушена, нейрональные белки (в данном случае – ГФКБ, ОБМ, ФРН и S100) поступили вкровеносное русло и вызвали иммунологическую реакцию.
Повышенное содержаниенейроспецифических белков и аАТ к ним в крови наблюдалось при травмах мозга, рассеянномсклерозе в стадии обострения и ишемических инсультах [212]. ГФКБ и НСЕ появлялись в кровиуже на 1-е сутки после ишемического инсульта [213], а аАТ к белкам S100, ГФКБ и ФРН упациентов с острым нарушением мозгового кровообращения, наблюдали на 5-ый день послеинцендента [214].
В экспериментах, моделирующих повреждения головного мозга (окклюзиясредней мозговой артерии, вызывающая ишемический инсульт) пиковые концентрациинейрональных белков в сыворотке крови крыс приходились на 1-ые и 14-ые суткиэксперимента, при этом повышение уровня маркеров повреждения нейронов (НСЕ) и глии(ОБМ и ГФКБ) происходило одновременно [212].При изучении механизмов развития сахарного диабета 1-го типа в организме человекадонастоящеговременинебылопроведеносистематическихисследованийуровнянейроспецифичных белков и аАТ к ним.
Только в отдельных исследованиях было показаноизменение содержания некоторых нейротропных факторов [82], нейроспецифичных белков(NSE, S100) и аАТ к ним [83], а также аАТ к ОБМ [215]. На модели экспериментальногодиабета, индуцированного введением крысам СТЗ, было показано, что наряду с нарушениямифункций поджелудочной железы (гипергликемия, гипоинсулинемия, наличие специфическихостровковых антител) уже в первую неделю заболевания наблюдаются также функциональноструктурные изменения в ЦНС [34], но исследования уровня нейрональных антител в этихусловиях не проводились.В наших исследованиях на модели экспериментального диабета впервые былоустановлено одновременное повышение аАТ к инсулину и к нейрональным белкам. Это можетсвидетельствовать том, что два патогенетических процесса – гибель β-клеток и клеток нервнойсистемы – идут одновременно и, следовательно, нейро аАТ можно рассматривать в качествепредвестников развития ДПН.94V.
Заключение1. Было показано, что при инкубации альбумина в течение трёх недель в присутствии 5мМ глюкозы, в отличие от 50 мМ, увеличения количества кетоамина не происходит. Воксиальбумине образуется большее количество кетоамина, чем в меркаптоальбумине. Снижениеинтенсивностифлуоресценцииальбумина(т.е.изменениеегоструктурывследствиегликирования) происходит при наличии в молекуле белка выше 0,4 молекул кетоамина намолекулу белка. Это значение превышает норму и характерно при хронической гипергликемии.При нормальном содержании кетоамина (0,2 – 0,3 М/М) интенсивность флуоресценцииальбумина не изменяется.
Существеннее всего интенсивность флуоресценции снижается воксиальбумине. Судя по тому, что наибольшая интенсивность флуоресценции пентозидинаотмечена в оксиальбумине, содержащем 1 М/М кетоамина, можно сделать вывод, чтопентозидин образуется в течение 3-х недельной реакции оксиальбумина с глюкозой вповышенной концентрации.Разработанный в нашей лаборатории метод анализа альбумина с помощью анионобменной хроматографии позволил разделить альбумин на две фракции (пики I и II).Предложенный коэффициент отношения площадей этих пиков (AI/AII) можно рассматриватькак параметр, отражающий окислительно-гликированный статус альбумина: чем меньшекоэффициент, тем сильнее окислен или гликирован альбумин.2. В результате анализа продуктов трипсинового гидролиза гликированных in vitroобразцов ЧСА с помощью ВЭЖХ/МС и идентификации в системе Mascot обнаружили, чтоколичество остатков лизинов, связанных с остатком глюкозы в меркаптоальбумине равно 24, а воксиальбумине – 35, что подтверждает предположение о преимущественном гликированиибелка, содержащего меньшее количество SH-групп.3.
Нами был модифицирован метод выделения альбумина из сыворотки крови спомощью аффи-голубого геля. Был рассчитан коэффициент отношения площадей пиков,полученных при анион-обменной ВЭЖХ (АI/АII) для 3-х групп детей: в контрольной группе онбыл наибольшим, в группе впервые выявленных детей с СД1 снижался и самым низкимоказался в группе с продолжительным СД1 (стаж более года). В выделенном альбумине былопределен кетоамин, количество которого приведено к количеству белка. Содержание кетоаминаувеличивалось от группы к группе: контроль – компенсированный СД1 – декомпенсированныйСД1 – впервые выявленный СД1. Корреляционный анализ между содержанием кетоамина ипроцентом HbAlc показал достоверную положительную корреляцию, что говорит окорректности выполненного метода и, следовательно,клинической практике.возможности использования его в954.
Проведенное в данной работе определение содержания гормона проинсулина(предшественника инсулина) показало, что у 5% детей с диагнозом СД1 отмечаетсяповышенное содержание проинсулина. Это означает, что у этого контингента больных снижениесодержания инсулина обусловлено не аутоиммунной деструкцией β-клеток. Одной из причинэтой ситуации может быть мутация в гене, кодирующем проинсулин, в результате чего аргининв положении 65 заменяется гистидином, и расщепления проинсулина не происходит. Другойпричиной может быть нарушение активности фермента, гидролизующего проинсулин протеинконвертазы.
Определение проинсулина в клинической практике позволит выявитьслучаи, отличные от аутоиммунного диабета, и, возможно, применить иную тактику лечения.5. Было установлено, что субклинические признаки ДПН встречаются с высокойчастотой (более 70 %) на самых ранних стадиях заболевания СД1, в том числе на стадияхнарушения толерантности к глюкозе и манифестации. С началом инсулинотерапии частьнейрофизиологических показателей нормализуются (в моторных частях малоберцового ибольшеберцовом нервов), однако, некоторые из них не зависят от степени компенсацииуглеводного обмена. Учитывая полученные результаты о развитии ДПН на самых раннихсроках заболевания СД1, следует своевременно назначать соответствующую терапию.6. Было обнаружено, что повышенный уровень аутоантител к нейрональным белкамS100, ГФКБ, ФРН и ОБМ встречается с высокой частотой (более 30%) как у детей со срокомзаболевания до 1 года (в т.ч.
и впервые выявленные), так и у детей со стажем. Таким образом,структурные изменения периферических нервов происходят уже на стадии манифестациисахарного диабета и продолжаются с течением времени. Нейрональные аАТ не исчезают изкровотока в отличие от аАТ к компонентам β-клеток имогут служить маркерами раннейдиагностики ДПН.7. На модели экспериментального диабета было показано одновременное повышениеаАТ к нейрональным белкам и инсулину. Это свидетельствует том, что два патогенетическихпроцесса – гибель β-клеток и клеток нервной системы – идут одновременно и, следовательно,нейро аАТ можно рассматривать как маркеры развития ДПН.96VI.
Выводы1. Методами колориметрии и LC/MS было показано, что человеческий сывороточныйальбумин, в котором сульфгидрильные группы частично окислены, гликируется вбольшей степени, чем тот, в котором нормальное содержание SH-групп;2. Был предложен параметр, характеризующий глико-окислительный статус человеческогосывороточного альбумина: коэффициент отношения площадей пиков полученных прианион-обменной ВЭЖХ (АI/АII), и показано, что этот параметр коррелирует ссодержанием сульфгидрильных групп и кетоамина в ЧСА детей;3. Было показано, что содержание кетоамина в ЧСА, выделенном из сыворотки кровидетей с СД1 и из контрольной группы, положительно коррелирует с содержаниемгликированного гемоглобина;4.
Определение проинсулина в клинической практике позволит выявить случаи, отличныеот аутоиммунного диабета, и, возможно, применить иную тактику лечения5. Было установлено, что дистальная полинейропатия развивается одновременно сдиабетом и не все нейрофизиологические показатели зависят углеводного обмена;6. В сыворотке крови детей с СД1 был зафиксирован повышенный уровень аутоантител кнейрональным белками S100, ГФКБ, ОБМ и ФРН как при манифестации, так и припродолжительном СД1;7.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
