Диссертация (Изучение гипотензивных эффектов антагонистов кальция у солечувствительных больных артериальной гипертонией), страница 9

Стандартная ультразвуковая методика позволяетвизуализировать анатомические особенности сосудов и прилегающихтканей в черно - белом изображении. Во время исследования проводилисьфункциональныепробы:задержкадыхания,глубокийвдохилифорсированный выдох.Исследование скорости распространения пульсовой волны(СРПВ)проводилоськомпанией«АМДТ»,аппаратомРоссия.«Тонокард»,Вработекоторыйприбораразработаниспользовалисьвысокочувствительные датчики тонов Короткова, которые располагались впроекции плечевой артерии и артерии предплечья.

Точно измеренноерасстояние между датчиками (L) вводится в компьютер. Пульсовая волнапроходилаэторасстояниезавремя(∆t),котороеопределялосьавтоматически. Измерение СРПВ проводилось в положении сидя, натощак.51В протокол вносились данные средних 4 - 6 значений и стандартныхотклоненийСРПВпорезультатамисследований.ИзмерениеАДпроизводилось трехкратно на другой руке через 2 - 3 мин послепроведения исследования (Таблица 2).Таблица 2.

Клиническая интерпретация показателя СРПВВозрастснижена НормаповышенаРезко повышена25 - 40<7,17,1 - 8,88,9 - 11,5>11,541 - 50<7,47,4 - 9,29,3 - 12>12КлиническаяинтерпретацияНизкоеАДЭластичФункциональностьное нарушениеартерий в эндотелиянормеартерийЦентральное артериальное давление (ЦАД).ОрганическоепоражениеэндотелияартерийВ артериальномрусле наблюдаются сложные гемодинамические явления, приводящие кпоявлениютакназываемых≪отраженных≫пульсовыхволнпреимущественно от резистивных сосудов, и их суммации с основной(прямой) пульсовой волной, возникающей при выбросе крови из сердца.Суммация прямой и отраженных волн в фазу систолы приводит кформированию феномена ≪аугментации≫ (усиления) САД. Сумма прямойи отраженных волн отличается на разных сосудах, в результате АД (впервую очередь САД) отличается в различных магистральных сосудах и несовпадает с измеренным на плече.

Поэтому большое прогностическоезначение имеет АД в восходящей или центральной части аорты или«ЦАД». Существуют специальные методики (например, апланационнаятонометрия лучевой или сонной артерии), которые позволяют исходя изколичественной сфигмограммы и АД, измеренного на плече, рассчитыватьЦАД.

Исследования показали, что это расчетное ЦАД в аорте можетоказаться ценным при оценке эффективности проводимой терапии ипозволитвыявитьдополнительнуюгруппупациентовс52≪псевдогипертонией≫, у которых имеет место нормальное ЦАД, ноповышенное АД на плече из-за аномально высокой суммы прямой иотраженной волн давления в верхних конечностях. Применяли прибордиагностический для анализа показателей гемодинамики SphygmoCor Pх спринадлежностями», АтКор Медикал Пти. Лтд, Австралия.Лодыжечно - плечевой индекс систолического давления (ЛПИ) –это параметр, который позволяет оценить адекватность артериальногокровотока в нижних конечностях. Он отражает отношение систолическогоартериального давления (САД) между нижними и верхними конечностями,являясь маркѐром риска ССО.

В норме САД верхних конечностей всегданиже, чем САД нижних, а ЛПИ больше единицы. Снижение САД вобласти лодыжек ниже САД области плеча свидетельствует о сужениипросвета сосуда, к чему в 98% случаев приводит атеросклероз. Измерениепроводилось классическим механическим тонометром Little Doctor LD 70NR с игольчатым воздушным клапаном. Во время определения ЛПИпациенту измерялось АД в проксимальном отделе плеча левой руки и вдистальном отделе обеих лодыжек, накладывая манжету на 5 см вышещиколоткилодыжки.Верхниеинижниеконечностивовремяисследования находились на уровне сердца. Расчѐт величины лодыжечно плечевого индекса: ЛПИ = САД на лодыжке / САД на плече.

Показатель,равный 0,99 - 1,29 соответствует норме. Значимые нарушения баланса АДнаконечностяхрассматриваются,какбиологическиймаркератеротромботических поражений ССС. [16,17].2.4.6. Генетическое исследованиеГеномная ДНК выделялась из лимфоцитов цельной периферическойкрови по стандартному протоколу с использованием набора реагентовПроба – ГС - Генетика (КардиоГенетика Гипертония)РУ2010/08414(производство компании ООО «НПО ДНК - Технология») для определения53полиморфизмы генов AGT (Т704C), AGT (С521T), AGTR1 (A1166C), AGTR2(G1675A), ADD1 (G1378T), CYP11B2 (C344T),GNB3 (C825T), NOS3(T786C), NOS3 (G894T). Генотипирование генов методом ПЦР проводилив "Клинике новых медицинских технологий АрхиМед" в лабораториигенетики и ПЦР - диагностики на амплификаторах с детекцией результатовв режиме реального времени (приборы серии ДТ производства ООО «НПОДНК-Технология»): ДТлайт и ДТ - 96.Принцип метода детекции полиморфных вариантов: амплификацияискомойпоследовательностиДНК;гибридизацияампликоновсолигонуклеотидами (пробами), мечеными флуорофорами; образованиекомплементарных и частично комплементарных дуплексов; плавление(денатурация) дуплексов; детекция флуоресценции с последующимпостроением и анализом кривых плавления.Для определения нуклеотидной последовательности, образовавшейсяв процессе амплификации, используют метод примыкающих проб (kissingprobes или резонансный перенос энергии).

В его основе лежитиспользование двух типов олигонуклеотидов (проб), гибридизующихся наматрицу при низкой температуре в непосредственной близости друг отдруга. Один из олигонуклеотидов метят флуоресцентным донором, другой–акцептором(гасителем).Идентификациянуклеотиднойпоследовательности образца осуществляется в процессе плавлениядуплексов(результатгибридизациифрагментовДНКиолигонуклеотидных зондов), что происходит при последовательномувеличенииспецифическиетемпературыфлуорофоры,реакционнойснижающиесмеси.рискПрименяютсядетектированиянеспецифических продуктов амплификации.Использование Taq - полимеразы, блокированной специфическимиантителами, на этапе амплификации искомого участка ДНК с праймерами,общими для обоих вариантов последовательности даѐт возможность:реализации «горячего старта» без применения парафина; предотвращение54неспецифическогоотжигакомплектов реагентов.праймеров;повышениечувствительностиДля повышения надежности типированияиспользовалась модификация метода примыкающих проб: сиквенс специфичныетипирующиегибридизациясдвумяолигонуклеотиды;альтернативнымиодновременнаятипирующимизондами,меченными различными флуорофорами, что позволило определять обаварианта искомой последовательности в одной пробирке.Автоматическое генотипирование и интерпретация результатов врежимереальноговременипроводилосьсиспользованиемспециализированного программного обеспечения ООО «НПО ДНКТехнология».2.4.7.

Статистическая обработка результатовЭлектронная база данных исследуемых пациентов составлена вформате Microsoft Excel 2003. Результаты исследования обработаны сиспользованиемкомплекснойсистемыанализаданных(пакетаприкладных программ для научно - технических расчѐтов) STATISTICA10.0. Нормальность распределения определялась с помощью критерияШапиро - Уилка и критерия Колмогорова – Смирнова. Данныепредставлены в виде M (медиана) , 25% процентиль – 75% процентиль.Для оценки достоверности различий между группами использовалиськритерии Манна – Уитни. Для оценки достоверностивнутри группыиспользовались критерии Уилкоксона.

Различия считались достовернымипри p < 0,05 [51]. Для сравнения частот аллелей и генотипов исследуемыхполиморфных маркеров в группах с наличием и отсутствием заболеваниянами использовался критерий χ2. Достоверными считали различия приp < 0,05. Критерий χ2 позволял оценить статистическую достоверностьразличий между двумя группами по частотам аллелей или генотипов.Использовалась матрица частот аллелей и генотипов размером 2хN для55удобства при расчете значений уровня значимости. Нулевой гипотезойсчиталось предположение об отсутствии различий между группами,альтернативной – об их наличии.

Под отсутствием различий понималосьпроисхождение двух исследуемых выборок из одной популяции [143].Корректность проведения теста χ2 определялось двумя условиями:ожидаемые частоты менее 5 должны встречались не более чем в 20 %полей таблицы; суммы по строкам и столбцам всегда были больше нуля.Метод Монте - Карло позволял отказаться от требования к ожидаемымчастотам и от каких-либо допущений о характере распределения выборки[181].

Рассчитанные по методуМонте - Карло значения уровнейзначимости для критерия χ2 несущественно отличались от таковых,рассчитанных по методу точного критерия Фишера, что позволялоизбежать необходимости использовать попарное сложение генотипов,поправкуБонферронидлячислааллелейбольшедвухималораспространенные модификации точного критерия Фишера длятаблиц размерностью 2х3 и более. В исследованиях «случай - контроль»относительный риск развития заболевания оценивался с помощьюпоказателяотношения шансов (odds ratio, OR), которое вычисляли спомощью программы Calculator for confidence intervals of odds ratio(http://www.

hutchon.net / ConfidOR. htm). В программу вводили значенияA, B, C, D, где А – число лиц с наличием и В – с отсутствием данногоаллеля (генотипа) среди больныхпациентов, С и D – число лиц,соответственно, с наличием и отсутствием данного аллеля (генотипа)среди здоровых лиц. OR = 1 рассматривали как отсутствие ассоциации; OR> 1 как положительную ассоциацию ("фактор предрасположенности"), OR< 1 – как отрицательную ассоциацию аллеля или генотипа с заболеванием("фактор устойчивости").

Доверительный интервал (CI, confidence interval)- интервал значений, в пределах которого с вероятностью 95 % находитсяожидаемое значение рассматриваемого некоего параметра; в данномслучае - это значение OR [20, 41, 51].56ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ3.1. Изучение особенностей питания, распространенности ожирения иартериальной гипертонии в г. Москве по данным анкетированияПри анализе данных анкетирования среди населения, обратившегосяза помощью в поликлиники г. Москвы, из 1422 человек, средний возрасткоторых составил 57 лет было выявлено, что у 360 человек (25,3%) нормальный ИМТ, 593 человек (41,7%) имеют избыточную массу тела, а469 человек (33%) – ОЖ различной степени (Рисунок 3).Индекс массы тела25%33%Нормальный ИМТИзбыточная массателаОжирение42%Рисунок 3. Распространенность лишнего весаРезультаты измерения АД у пациентов, обратившихся в поликлинику,за медицинской помощью выявило: давление ниже 140/90 мм рт.