Автореферат (Способы коррекции ранних механизмов канцерогенеза в органах репродуктивной системы), страница 3

Значимых отличий массовыхкоэффициентов органов (отношение массы органа к массе тела) крыс междугруппами не было. При изучении возможного аллергенного действия прототипалекарственной формы DIM у морских свинок было доказано, что он непровоцирует анафилактического шока. Конъюнктивальные пробы, реакциииммунных комплексов и реакции дегрануляции тучных клеток были такжеотрицательными.Эксперименты по токсикометрии прототипа лекарственной формы EGCGпроводились на мышах и крысах в дозе от 500 мг/кг до 8000 мг/кг. Гибельживотных при введении препарата в дозе свыше 5000 мг/кг наблюдалась втечение 5 часов после введения препарата.

У животных, получивших дозы до5000мг/кг, отмечались заторможенность, вялость, атаксия, падение потребленияводы и корма в течение суток. В последующие дни их состояние было таким же,как у животных из контрольной группы. По результатам некропсии у выжившихособей не было макроскопических изменений внутренних органов и измененийслизистыхжелудочно-кишечноготракта.Исследованиехроническойтоксичности: препарат вводился внутрижелудочно ежедневно на протяжении 90дней в дозах 150, 750 и 1500 мг/кг. Вес животных постепенно нарастал, апотребление корма и воды практически не изменялось в течение эксперимента.Значимых различий по исследуемым показателям в по сравнению с контролемне отмечалось.

Ректальная температура не отличалась между группами. Такжебыло показано, что прототип лекарственной формы EGCG не изменяетпродолжительность гексеналового сна, то есть не подавляет детоксицирующуюфункцию печени. Влияние препарата на состояние почек определялось порезультатам анализа мочи. Значимых отклонений обнаружено не было.14Измерения величины зрачка и ширины глазной щели показали, что этипараметры значимо не менялись. В течение периода наблюдения у животных неотмечалось отечности или гиперемии слизистых.

Также было установлено, чтоисследуемый препарат вызывал достоверные снижения уровня АД и величиныЧСС, особенно на максимальной дозе. На 30-е и 90-е сутки исследования уподопытных животных отмечались достоверные изменения в крови, выходящиена максимальной дозе за пределы физиологического варьирования: снижениеуровня гемоглобина, содержания эритроцитов, лейкоцитоз, лимфопения иускорение СОЭ.

У животных опытных групп с максимальными дозами отмеченозначимое повышение уровня трансаминаз плазмы крови на дозе 1500 мг/кг через90 дней применения препарата. Некропсия после окончания экспериментапоказала отсутствие отклонений в состоянии внутренних органов и тканей.Значимых отличий в массовых коэффициентах органов не было.

Следовательно,прототип лекарственной формы EGCG имеет удовлетворительный профильдоклинической безопасности.Приизучениивозможногоаллергенногодействияпрототипалекарственной формы EGCG у морских свинок было доказано, что он непровоцирует анафилактического шока. Конъюнктивальные пробы, реакциииммунных комплексов и реакции дегрануляции тучных клеток были такжеотрицательными. Полученные данные позволяют сделать вывод, что он необладает аллергизирующим действием.Исследованиевлияниясоединений-кандидатовнамеханизмыраннего канцерогенеза на животных моделяхЭпигенетическая активность дииндолилметанаИсследование проводили на 40 крысах-самцах (по 20 в группе).

Опытнаягруппа получала прототип лекарственной формы DIM в дозе 133 мг/кг,контрольная – плацебо. У экспериментальных животных после 1 месяцавоздействия удаляли простату и гомогенизировали участок ткани. Данный15дизайн эксперимента был избран, исходя из важности изучения активностиHDAC и влияния на нее DIM в здоровой ткани простаты, поскольку процессыканцерогенеза исходно протекают в здоровых клетках.

У экспериментальныхживотных экспрессия HDAC была заметно снижена (таблица 1). Таким образом,снижение активности HDAC под влиянием DIM имеет место in vivo в тканинормальной предстательной железы.Таблица 1. Результаты исследования активности HDAC в тканипростаты крыс после лечения (относительно среднего уровня в контроле)ГруппыАктивность HDACв расчете на общеесодержание белкаГруппа 1 (опыт, n=20)0,72±0,42Группа 2 (контроль, n=20)1,00±0,31Значимостьотличий0,0215К настоящему моменту различными исследователями в экспериментах invivo было установлено, что DIM подавляет активность HDAC I класса [Li Y.,2010; Busbee P.B., 2014].

Подавление HDAC I класса без затрагиванияактивности HDAC II класса является преимуществом DIM по сравнению сдругими известными ингибиторами HDAC [Balasubramanian S., 2009; KramerO.H., 2003; Vashisht Gopal Y.N., 2006]. Это связано с тем, что экспрессия HDACII класса связывается с относительно благоприятным прогнозом для пациента.Поскольку известно, что ингибирующий эффект DIM связан в первуюочередь с HDAC класса I, можно ожидать, что данное действие будетспособствовать профилактике развития рака простаты.

Этот эффект наиболееважен в ситуации, когда происходит активация протоонкогенов, связанная счрезмерной активностью HDAC, на ранних стадиях канцерогенеза в простате.16Эпигенетическая активность EGCGИсследование проводили на 40 крысах-самках (по 20 в группе) синдуцированным гиперметилированием генов инъекцией суспензии Ni3S2.Опытная группа получала прототип лекарственной формы EGCG в дозе 133мг/кг, контрольная – плацебо. У экспериментальных животных после 3 месяцеввоздействия удаляли матку и выполняли соскобы эндометрия и эпителия шейкиматки из нескольких точек, после чего проводили исследование методом метилчувствительной ПЦР. Применение экспериментального препарата приводило кдеметилированию (в объеме ткани в целом) генов RASSF1 и MLH1 после 3месяцев применения (таблица 2).Таблица 2.

Частота метилирования генов-онкосупрессоров у крыс послетерапииГенопытRASSF1MLH16,7%0RASSF1MLH16,7%0контрольшейка матки33,3%13,3%эндометрий26,7%20,0%значимостьотличий0,0350,0910,0890,035Полученные данные подтверждают ранее известную способностькатехинов к снижению метилирования генов in vitro [Lee W. J., 2005; Fang M.,2003]. Полученные нами данные продемонстрировали значимость данногомеханизма действия EGCG и на модели лабораторных животных in vivo.Влияние соединений индольного ряда на гормональные механизмыраннего канцерогенезаИсследование проведено на модели мышей линии Balb/c-nude сперевитыми клетками линии рака эндометрия (50 животных).

Прототип17лекарственной формы DIM вводился животным экспериментальной группы вдозе 133 мг/кг/сут на протяжении 30 дней. Контрольная группа получалаплацебо. У животных определялось соотношение метаболитов эстрогенов 2ОНЕ1/16α-ОНЕ1 в моче в ходе эксперимента (рисунок 1).54,5среднее соотношение 2-ОНЕ1/16-ОНЕ143,532,521,510,500123456789 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30день экспериментаопытная группаконтрольная группаРисунок 1.Соотношение 2-ОНЕ1/16α-ОНЕ1 в моче у мышей, получающих DIM.У мышей в опытной группе наблюдается увеличение соотношения 2ОНЕ1/16α-ОНЕ1, тогда как в контрольной группе оно не меняется. По окончанииэксперимента соотношение 2-ОНЕ1/16α-ОНЕ1 в экспериментальной группевыросло до 3,8±0,91, тогда как в контрольной оно осталось столь же низким, каки до начала эксперимента – 0,84±0,36.

Данное изменение в группе мышей,получающих DIM, свидетельствует о благоприятном изменении метаболизмаэстрогенов. Полученные нами результаты позволяют доказать в качествезначимого механизма действия DIM в отношении торможения ростаксенографтов опухолей влияние на метаболизм эстрогенов и эстрогеновую18регуляцию пролиферации путем стимуляции преимущественного образования2-ОНЕ1, обладающего антипролиферативным действием.Влияниедииндолилметананатуморогенностьклетоклинийзлокачественных опухолей и раннее развитие опухолиЭксперименты состояли из проверки прямого противоопухолевогодействия на ранних стадиях развития злокачественного новообразования ипроверки влияния на туморогенность опухолевых клеток линии рака простатычеловека.

В работе использовались клетки рака простаты человека CRL-1740(LNCaP) и CRL-1435 (PC-3). В исследовании влияния DIM на ксенографтыопухолей через 3 дня после имплантации раковых клеток животных разделялина 4 экспериментальных группы, по 30 животных в каждой, и начинали лечениеисследуемым препаратом (контрольные группы получали плацебо).Как было установлено, с 31-го по 42-й дни после перевивки опухолипрототип лекарственной формы DIM оказывал подавляющий эффект на развитиерака простаты человека CRL-1740 (LNCaP); значение торможения роста опухолисоставляло 55,5% и 16,9% (таблица 3).Таблица 3. Влияние прототипа лекарственной формы DIM на размеропухоли рака простаты человека CRL-1740 (LNCaP) в различные дни послеперевивкиСредний объем опухолей, мм3День исследования1214171920222528T/CПлацебоИнфемин%022.726.326.323.425.326.232.71125.824.422,925.921.818.723.5113.4%92.8%87.1%110.8%86.0%71.3%71.9%19Значимостьотличий(p<0,05)3151.13390.937180.939330.642572.3* — значимые отличия от контроля28.330.136.355.596.755.5%33.1%20.1%16.8%16.9%*****В эксперименте с линией CRL-1435 (PC-3) также было установлено(таблица 4), что с 33-го по 42-й дни после перевивки DIM проявлял значимыйподавляющий эффект на рост ксенографтов рака простаты человека CRL-1435(PC-3); значение торможения роста опухоли составляло 69,3% и 26,0%.Таблица 4.

Влияние прототипа лекарственной формы DIM на размеропухоли рака простаты человека CRL-1435 (PC-3) в различные дни послеперевивкиСредний объем опухолей, мм3День исследованияПлацебоИнфемин%821.226.829.230.431.029.738.344.990.1120.2199.3220.688,9%90,2%90,5%97,0%94,4%103,7%88,9%103,8%76,4%69,3%60,6%44,6%26,0%1291423.51729.61930.12032.22229.92533.42836.93158.833130.137198.539446.442848.5* — значимые отличия от контроляПротивоопухолевоепродолжительностивоздействиежизниT/Cпрепаратаэкспериментальных20Значимостьотличий(p<0,05)отразилосьживотных.****такженаСредняяпродолжительность жизни животных в контрольной группе с ксенографтамирака простаты человека CRL-1740 (LNCaP) составила 30,4 дня.