Автореферат (1154328), страница 2
Текст из файла (страница 2)
Фролова медицинскогоинститута РУДН, 2017 г.ПубликацииПо тематике диссертации опубликовано 36 научных работ, в том числе 27статей в периодических изданиях, рекомендуемых ВАК министерстваобразования и науки РФ для публикации основных результатов диссертаций насоисканиеучёнойстепенидокторанаук.6статейопубликовановмеждународных изданиях, индексируемых в библиографических базах данныхScopus и Medline. Получены патенты Российской Федерации: 2 патента наизобретения и 1 патент на полезную модель.8Внедрение результатов работы в практикуРезультаты исследований включены в учебный процесс на кафедре общейпатологии патологической физиологии имени В.А.
Фролова Медицинскогоинститута РУДН. Данные, полученные при проведении доклиническихисследованийбезопасностииэффективностипрепаратовИнфемин(дииндолилметан) и Каспазол (эпигаллокатехин), включены в соответствующиеразделы досье препаратов. Данные клинического исследования препаратаИндинолФорто(индолкарбинол)включенывотчетоклиническихисследованиях. Получено разрешение на использование лекарственногосредствавмедицинскойпрактике:ИндинолФорто,Регистрационноеудостоверение Минздрава РФ № ЛП-002010 от20.02.2013 г.Структура и объем диссертацииДиссертация изложена на 218 страницах машинописного текста и состоитиз введения, обзора литературы, собственных исследований и их обсуждения,представленныхв6главах,выводов,практическихрекомендаций,библиографического указателя литературы, включающего 44 отечественных и283 иностранных научных источников. Диссертация иллюстрирована 61таблицей и 6 рисунками.СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫМатериалы и методы исследованийДля экспериментов использованы активные вещества и фармацевтическиепрепараты: эпигалокатехин-3-галлат (EGCG), 3,3’-диндолилметан (DIM);прототипы пероральных лекарственных форм DIM «Инфемин» и EGCG«Каспазол»;лекарственноесредство«Индинол Форто»(индолкарбинол)(«МираксБиоФарма», Россия).Токсикологические исследования были проведены на белых нелинейныхмышах и крысах (самцы и самки).
Исследования включали токсикометрию,9оценкудетоксицирующейфункциипеченипопродолжительностигексеналового сна, офтальмологическое исследование, регистрацию ЭКГ,артериальногодавления,ректальнойтемпературы,гематологическиеибиохимические исследования. Патоморфологические исследования включалинекропсию и макроскопическое исследование внутренних органов.В исследованиях аллергизирующего действия препаратов 3 группыморских свинок (по 6 животных) получали две дозы препарата или воду.Введение препарата осуществлялось внутрижелудочно в течение 5 дней.Проводилось изучение реакции иммунных комплексов, конъюнктивальнаяпроба, реакции общей анафилаксии, реакции непрямой дегрануляции тучныхклеток.Исследования препаратов in vitro проводились на опухолевых клеткахлиний рака простаты крысы CRL-2376 (MAT-Ly-Lu) и рака простаты человекаCRL-1740 (LNCaP) и CRL-1435 (PC-3), а также рака эндометрия человека CRL1622 (KLE) и HTB-113 (HEC-1-B).
МТТ-тест был применен для оценкивыживаемости опухолевых клеток. Величину IC50 определяли по графикузависимости выживаемости клеток от концентрации DIM. Исследованиеактивности гистондеацетилазы проводили на 40 крысах-самцах (по 20 в группе).Интегральная активность HDAC изучалась колориметрическим методом.Исследование метилирования генов проводили на 40 нелинейных крысах-самках(по 20 в экспериментальной и контрольной группах) с индуцированнымгиперметилированием генов внутримышечной инъекцией суспензии Ni3S2. Висследованиях гормональных механизмов канцерогенеза были использованы 50мышей линии Balb/c-nude с перевитыми клетками линии CRL-1622 (ракаэндометрия человека).
Определяли соотношение метаболитов эстрогенов 2ОНЕ1/16α-ОНЕ1 в моче с помощью иммуноферментного анализа.Клиническое исследование баланса факторов роста в канцерогенезе впредстательной железе проводилось на базе НИИ урологии (г. Москва) какдвойное слепое плацебо-контролируемое. Под наблюдением находилось 3410пациента с простатической интраэпителиальной неоплазией (ПИН), которыебыли разделены на 2 группы. Группа 1 (18 пациентов) принимала индол-3карбинол (400 мг/сут) и EGCG (160 мг/сут), группа 2 (16 пациентов) принималаплацебо.
Уровень экспрессии ростовых факторов IGF, EGF и TGF-b определялсяв процентах экспрессирующих клеток и вычислялись его изменения к концукурса применения препарата.Клиническое исследование метилирования генов-онкосупрессоров вэпителии шейки матки проводилось на базе кафедры акушерства и гинекологии№1 ГОУ ВПО ПМГМУ им. И.М.Сеченова (г. Москва), и включало в себя 102пациентки с доброкачественными процессами шейки матки и CIN. Исследованиепроведено как открытое когортное в 3 параллельных группах.
EGCG назначалсявсем пациенткам в дозировке 180 мг/сут в течение 6 месяцев. Частотаметилирования генов-онкосупрессоров в эпителии шейки матки определялась долечения и через 6 месяцев после его окончания. Для обнаружения CpG-островковметилированных генов использовался метод метилчувствительной ПЦР.Клиническое исследование метилирования генов-онкосупрессоров вэндометрии проводилось на базе кафедры акушерства и гинекологии №1 ГОУВПО ПМГМУ им. И.М.Сеченова (г.
Москва). В исследование было включено153 пациентки с различной степенью неопластических изменений эндометрия.Исследование проведено как открытое когортное в 3 параллельных группах.EGCG назначался в дозировке 180 мг/сут в течение 6 месяцев. Использовалсяметод метилчувствительной ПЦР.Клиническое исследование метаболизма эстрогенов при фоновых ипредраковых процессах в молочной железе проведено как многоцентровоедвойное слепое плацебо-контролируемое исследование в двух параллельныхгруппах. Был использован метаболический предшественник DIM – индол-3карбинол.
В исследование включено 44 пациентки в возрасте 20-45 лет. Группынаблюдения: группа 1 – прием индолкарбинола по 200 мг 2 раза в сутки (2211пациентки); группа 2 – прием плацебо по 1 капсуле 2 раза в сутки (22 пациентки).Проводился анализ мочи на метаболиты эстрогенов – 2-ОНЕ1 и 16α-ОНЕ1.При анализе интервальных показателей с нормальным распределениемиспользовались параметрические методы (двусторонний t-критерий Стьюдента).Сравнение для показателей с бинарным типом шкалы проводили с помощьюкритерия 2, расчет 95% доверительных интервалов для них произведен поКлопперу-Пирсону.Результаты собственных исследованийОтбор соединений для последующего изучения процессов раннегоканцерогенеза и создания средств их коррекцииКак показал анализ доступной медицинской литературы, наиболееперспективными в настоящее время для целей химиопрофилактики можнопризнать соединения индольного ряда (индол-3-карбинол и DIM) и катехиновогоряда (эпигаллокатехин-3-галлат).
При этом известно, что индол-3-карбинолметаболизируется в организме человека, преимущественно образуя DIM,обладающий сходным спектром биологической активности. В большинствеслучаев DIM более активен, за исключением способности индуцироватьферменты цитохромоксидазной системы печени, осуществляющие, в частности,метаболизм эстрогенов. В связи с этим, в исследованиях гормональногоканцерогенеза оптимально использование индол-3-карбинола, тогда как дляцелей практического применения более приемлемым может оказаться DIM,обладающий большей удельной активностью. Изучение процессов раннегоканцерогенеза в настоящее время практически полностью проводится наживотных моделях, причем в большинстве случаев in vitro. Между тем, переносполученных данных на человека сопряжен с трудностями, поскольку процессыканцерогенеза могут отличаться у людей рядом особенностей.
В соответствии споставленными задачами исследования, был запланирован отбор соединений,12перспективных с точки зрения возможности их применения как на лабораторныхживотных, так и в ходе клинических исследований на людях.Кроме того, детальное изучение общей и специфической токсичностиперспективных лекарственных средств является необходимым элементом ихразработки. Поскольку в клинических исследованиях допустимо использованиетолькоготовыхприемлемостилекарственныхпрототиповформ,первымлекарственныхформэтапомявилосьподтвержденияизучениеихтоксических свойств.Токсикологические исследования прототипов лекарственных формDIM и EGCGОбъем токсикологических исследований определялся необходимостьюпоследующего применения прототипов лекарственных форм в ходе клиническихисследований.Исследованный диапазон доз прототипа лекарственной формы DIM притоксикометрии составил от 100 мг/кг до 5000 мг/кг на крысах, на мышах – до1000 мг/кг.
Гибели животных при внутрижелудочном введении в дозах до 5000мг/кг не отмечалось. Животные, получавшие препарат, по данным осмотра неотличались от здоровых животных. Половых различий в ходе исследования незарегистрировано. Исследование хронической токсичности: препарат вводилсявнутрижелудочно ежедневно на протяжении 90 дней в дозах 10, 100 и 1000 мг/кг.Вес животных постепенно нарастал, а потребление корма и воды практически неизменялось в течение эксперимента.
Значимых различий по исследуемымпоказателям в по сравнению с контролем не отмечалось. Ректальная температуране отличалась между группами. Также было показано, что прототиплекарственной формы DIM не изменяет продолжительность гексеналового сна,то есть не подавляет детоксицирующую функцию печени. Влияние препарата насостояние почек определялось по результатам анализа мочи. Значимыхотклонений обнаружено не было. Измерения величины зрачка и ширины глазной13щели показали, что эти параметры значимо не менялись в группах. Также былоустановлено, что у крыс отсутствовало изменение артериального давления, ЧСС,характера ЭКГ, гематологических показателей и биохимического статуса.Некропсия была проведена после окончания эксперимента и показала отсутствиеотклонений в состоянии внутренних органов.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
