Автореферат (1154328), страница 4
Текст из файла (страница 4)
Применениепрототипа лекарственной формы DIM значимо увеличило продолжительностьжизни мышей до 67,8 дня, на 123% по сравнению с контрольной группой.Средняяпродолжительностьжизнимышейконтрольнойгруппысксенографтами рака простаты человека CRL-1435 (PC-3) составила 30,1 дня.Применение препарата увеличило продолжительность жизни мышей до 64,8 дня,на 115% по сравнению с контрольной группой.Для изучения влияния прототипа лекарственной формы DIM натуморогенность клеток опухолей в день имплантации животных разделяли нааналогичные 4 экспериментальных группы, но при этом использовалась в двараза меньшая прививочная доза – 2,5х106 клеток. Частота образования опухолейв опытной и контрольной группах представлена в таблице 5.Таблица 5. Влияние прототипа лекарственной формы DIM на частотуимплантации опухолей рака простаты человека при перевивке у мышейЛиния клетокПрививочная дозаВоздействиеК-во мышей спальпируемойопухольюЧастотаперевивкиопухолей, %2,5x106 клетокрастворитель1890,02,5x106 клетокDIM,133 мг/кг1155,0*2,5x106 клетокрастворитель1995,02,5x106 клетокDIM,133 мг/кг1365,0*CRL-1740(LNcaP)CRL-1435(PC-3)* — значимые отличия от контроля21Полученные результаты указывают на способность препарата снижатьтуморогенность клеток линий рака простаты человека CRL-1740 (LNCaP) и CRL1435 (PC-3).
Таким образом, в результате проведенных исследований можносделать следующие основные выводы:1. DIM обладает способностью снижать туморогенность клеток линийрака простаты человека.2. DIM in vivo подавляет рост ксенографтов рака простаты человека умышей.3. Данные эффекты не зависят от наличия либо отсутствиягормончувствительности клеток, что свидетельствует о том, что вподавлении туморогенности не задействованы гормональныемеханизмы.Механизмы противоопухолевой активности дииндолилметана in vitroДля экспериментов были использованы клетки линий рака простатыкрысы CRL-2376 (MAT-Ly-Lu) и рака простаты человека CRL-1740 (LNCaP) иCRL-1435 (PC-3).
Выживаемость опухолевых клеток после 48 часов инкубациис DIM оценивали с помощью МТТ-теста, выражая в процентах от контроля.Графикивыживаемостиклетокпредставленынарисунках2-4.Экспоненциальный регрессионный анализ позволил определить зависимостьвыживаемости клеток (в %) от концентрации препарата, которая составила дляклеток CRL-1740 (LNCaP), CRL-1435 (PC-3) и CRL-2376 (MAT-Ly-Lu)соответственно:выживаемость = 115,39е-0,025Свыживаемость = 101,5е-0,018Свыживаемость = 100,35е-0,011Сгде С – концентрация препарата.22Выживаемость опухолевых клеток, %100908070605040302010y = 115,39e-0,025x00255075100C, мкМРисунок 2. Влияние DIM на выживаемость клеток рака простаты человекаВыживаемость опухолевых клеток, %CRL-1740 (LNCaP).1009080706050403020y = 101,5e-0,018x1000255075100C, мкМРисунок 3.
Влияние DIM на выживаемость клеток рака простаты человекаCRL-1435 (PC-3).23Выживаемость опухолевых клеток, %100908070605040y = 100,35e-0,011x30201000255075100C, мкМРисунок 4. Влияние DIM на выживаемость клеток рака простаты крысыCRL-2376 (MAT-Ly-Lu).Определенная по данным формулам IC50 для опухолевых клеток ракапростаты человека CRL-1740 (LNCaP) составила 33,5 мкМ, CRL-1435 (PC-3) –39,3 мкМ, и для опухолевых клеток рака простаты крысы CRL-2376 (MAT-LyLu) – 63,3 мкМ.Для исключения влияния цитотоксического воздействия препарата наклеточные линии в аликвотах внеклеточной жидкости определялась степеньнекроза клеток по активности лактатдегидрогеназы (ЛДГ). Некроз клеток ненаблюдался ни в одном из экспериментов. Поэтому можно сделатьпредположение о том, что препарат подавляет выживаемость опухолевых клетокпутем стимуляции апоптоза.По данным литературы [Chen D., 2012] известна способность DIMвызывать апоптоз линий клеток рака простаты.
Была зарегистрирована гибельпутем апоптоза 80-90% клеток при обработке клеток DIM в концентрации25 мкМ.ТакжецитостатическиеэффектыDIMбылипоказанынаэндометриальных клетках человека [Leong H., 2001]. В концентрации до 50 мкМ24DIM проявляет антипролиферативные эффекты путем подавления роста клеток.В концентрации свыше 50 мкМ уже наблюдалась индукция апоптоза. Такимобразом, наши данные подтверждают на примере новой фармкомпозицииизвестные ранее данные о том, что DIM может вызывать апоптоз клеток ракапростаты [Nachshon-Kedmi M., 2003].Такимобразом,изучаемыеактивныесубстанцииобладаютвозможностью подавлять ряд механизмов раннего канцерогенеза, что делает ихперспективными для последующего создания средств химиопрофилактики.Однако, изученные на животных моделях механизмы, и, соответственно,способы их коррекции, требуют подтверждения их значимости у человека.Исследование механизмов раннего канцерогенеза и способов ихкоррекции у человекаДляцелейопределенияролиизучаемыхмеханизмовраннегоканцерогенеза в развитии онкологических заболеваний был изучен рядмолекулярных маркеров этого процесса у пациентов (при фоновых ипредраковыхзаболеваниях).Приэтомкритериемзначимостивкладаконкретного механизма в канцерогенез была реверсия предраковых изменений вткани при подавлении данного механизма (факторы роста в тканяхпредстательной железы, метилирование генов-онкосупрессоров в эндометрии ишейке матки, канцерогенные метаболиты эстрогенов при дисплазии молочнойжелезы).
Данные органы и ткани – предстательная железа, эндометрий, шейкаматки, молочная железа – характеризуются наличием хорошо изученныхнозологическихпроцессовформ,раннегоотражающихканцерогенеза.последовательноеПоэтомупрогрессированиегиперпластическиеинеопластические процессы в них могут служить оптимальной моделью дляизучения раннего канцерогенеза у человека.25Роль баланса факторов роста в канцерогенезе в предстательной железеДля оценки влияния DIM на баланс факторов роста был использованметаболический предшественник DIM – индол-3-карбинол (I3C).
По имеющимсяданным, при попадании в желудок он практически полностью метаболизируетсяв кислой среде до дииндолилметана [Reed G.A., 2006]. Под наблюдениемнаходилось 34 пациента с простатической интраэпителиальной неоплазией(ПИН), которые были разделены на 2 группы. Группа 1 (18 пациентов)принимала индол-3-карбинол (400 мг/сут) и EGCG (160 мг/сут), группа 2 (16пациентов) принимала плацебо. C помощью иммуногистохимического анализаизучалась экспрессия факторов роста – IGF (инсулиноподобного фактора роста),EGF (эпидермального фактора роста), а также регулирующего фактора TGF-b(трансформирующий ростовой фактор-бета).
Уровень экспрессии изучаемыхростовых факторов определялся в процентах, и вычислялись его измененияпосле 12 месяцев терапии (рисунок 5).Изменение экспрессии после лечения, %15105I3C + EGCG0плацебо-5-10-15IGFEGFTGF-bРисунок 5. Данные изменения экспрессии факторов роста по даннымиммуногистохимического анализа после терапии у пациентов с ПИН.26Было выявлено значимое снижение экспрессии IGF на 5,7% (p=0,004) иEGF на 11,8% (p=0,002), а также повышение уровня экспрессии TGF-b на 6,9%(p=0,047) в группе пациентов, принимавших активный препарат. При этом вгруппе контроля значимых изменений экспрессии не проявлялось.
Полученныеданные значимых изменений экспрессии ростовых факторов IGF, EGF и TGF-bв ходе терапии I3C и EGCG свидетельствуют об их влиянии на значимыесигнальные механизмы регулировки клеточной пролиферации. Выявленныеизменения,по-видимому,являютсясущественныммеханизмомантинеопластического действия I3C и EGCG у больных с ПИН.Роль метилирования генов-онкосупрессоров в предраковых процессах вэндометрии и шейке маткиИсследование включало в себя 102 пациентки в репродуктивном возрастес фоновыми и предраковыми заболеваниями шейки матки (CIN I-II) [СидороваИ.С., 2014]. Данные пациентки входили также в более крупное исследованиевлияния метилирования генов на риск развития рака шейки матки [Евтина И.П.,2011; Сидорова И.С., 2011].
Все женщины были распределены на 3 группы взависимости от вида патологии шейки матки (таблица 6).Таблица 6. Число пациенток в группахГруппаК-во пациентокГруппа 1 - Доброкачественные процессы42Группа 2 - CIN I33Группа 3 - CIN II27Все пациентки в процессе комплексной терапии, после применениядеструктивных методов лечения, принимали EGCG в дозировке 180 мг/сут напротяжении 6 месяцев. Уровень метилирования генов-онкосупрессоров27определялся до начала лечения и через 6 месяцев после окончания терапииEGCG (таблицы 7-9).Таблица 7. Частота выявления метилирования генов-онкосупрессоров убольных группы 1 (через 1 год после начала терапии).ГенДо лечения (n=42) После лечения (n=42)[Евтина И.П., 2011]MLH112,4%-HIC112,4%-N 3337,1%24,8%12,4%-CDH1--RASSF1АMGMT-Значимых отличий в доле пациенток с метилированием геновонкосупрессоров при сравнении с величиной до лечения в первой группе невыявлено. Данный факт представляется очевидным, учитывая низкий уровеньисходного метилирования.Таблица 8.
Частота выявления метилирования генов-онкосупрессоров убольных группы 2 (через 1 год после начала терапии).ГенДо лечения (n=33)[Евтина И.П., 2011]После лечения(n=33)MLH139,1%618,2%-HIC11*3,0%28RASSF1А1133,3%MGMT13,0%-N 33CDH11*3,0%-* - различие значимоеТаблица 9. Частота выявления метилирования генов-онкосупрессоров убольных группы 3 (через 1 год после начала терапии).ГенДо лечения (n=27)[Евтина И.П., 2011]После лечения(n=27)MLH1933,3%2*6,1%HIC11659,3%2*6,1%RASSF1А1244,4%2*6,1%-MGMT26,1%N 33414,8%CDH1* - различие значимое-*-У пациенток групп 2 и 3 выявлено значимое снижение уровняметилирования генов HIC1, RASSF1А и N33 после проведения лечения. Важноподчеркнуть, что оно имело место спустя 6 месяцев после окончания терапииEGCG, что указывает на стабильный характер достигнутого эффекта.Данныеозначимомснижениичастотыметилированиягенов-онкосупрессоров после терапии с применением EGCG у пациенток с CINподдерживаютиспользованиеданного29препаратадляподавленияонкологическойтрансформацииубольныхсдоброкачественнымиипредраковыми процессами шейки матки.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
