Диссертация (Клиническое значение определения сывороточного маркера активации нейтрофилов – алармина S100A12 при аутовоспалительных заболеваниях), страница 9

[231]. Диагноз саркоидозабыл установлен на основании типичных клинических проявлений и порезультатам гистологического исследования ткани легкого.Из исследования исключались больные с коморбидными состояниями, прикоторых концентрация провоспалительных белков может повышаться вторично:выраженный атеросклероз аорты, сосудов сердца (инфаркт миокарда в анамнезеили стенокардия напряжения 2-3 функционального класса), головного мозга сишемическими атаками в анамнезе, ожирение 2 и более степени (индекс массытела более 35 кг/м2), сахарный диабет 2 типа, острые инфекционные заболеванияили обострения хронических инфекций, оперативные вмешательства в течениепоследних 2 месяцев и наличие злокачественных новообразований.2.2.

Методы обследования больныхОбследование больных проводилось согласно общепринятым клиниколабораторным методам и включало в себя подробное изучение анамнеза жизни, вт.ч. семейного, и самого заболевания (даты появления первых симптомов, ихдинамики, даты установки диагноза, проводимого лечения и его эффективности),физическое и лабораторное (клинический анализкрови, мочи, исследованиесуточной протеинурии, биохимических показателей крови (общего белка,альбумина, холестерина и других показателей липидного обмена, креатинина,мочевой кислоты, глюкозы и трансаминаз), коагулограмма, иммунологическиепоказатели(впервуюочередь–определение«С»-реактивногобелка,ревматоидного фактора и АНЦА) обследования.

Определение СКФ проводилосьпо клиренсу эндогенного креатинина (проба Реберга-Тареева) и расчетнойформуле CKD-EPI. Все лабораторные методы исследования проводились на базелаборатории Клиники им. Е.М. Тареева, межклинической биохимической ииммунологической лабораторий Первого МГМУ им. И.М. Сеченова и в45лабораториях Научно-исследовательского института ревматологии им. В.А.Насоновой.У 29 из 34 больных ПБ и у 10 из 12 больных другими СПЛ было проведеномолекулярно-генетическое исследование, подтвердившее диагноз. Выявлениемутаций гена MEFV проводилось методом полимеразной цепной реакции.Секвенирование начиналось с 10 экзона, в случае выявления гетерозиготноймутации также анализировали остальные экзоны. Частота генотипов МЕFV уисследованных больных ПБ приведена в таблице 3.Таблица 3Частота генотипов МЕFV у больных ПБ (n=29)ГенотипыЧисло больных (%)M694V/М694V11 (38)M694V/ M680I5 (17)M694V/ V726A5 (17)M694V/неизвестная мутация3 (10)V726A/ M680I1 (3)E148Q /M680I1 (3)E148Q/ E148Q1 (3)M694V/ K695R1 (3)M694V/P369S1 (3)У больных синдромом Макла-Уэллса выявлялись мутации криопирина:pThr438Ile (2 больных), pThr350Met (2), pGly455Trр (1) и pPhe311Leu (1), убольных TRAPS – мутации в гене TNFRSF1A, приводящая к аминокислотнойзамене pHis51Tyr (2), pPro52Arg (1) и pArg121Gln (1) в последовательности белка.У2больныхNOMID/СINCAпримолекулярно-генетическоманализепатологических мутаций генов NLRP3, TNFRSF1A, MVK не выявлено, диагнозбыл установлен клинически.Диагноз амилоидоза, предполагаемый по клинико-лабораторным признакам(развитиепротеинурииилинефротическогосиндрома),подтверждался46морфологически при выявлении конгофильных фибрилл в биоптате почки (у 3больных) или прямой кишки (у 6 больных).

АА-тип амилоидоза устанавливалсяпри иммунохимическом исследовании или путем исключения других типовамилоидоза, в первую очередь AL-амилоидоза. Гистологическое исследованиебиоптатов было проведено на кафедре патологической анатомии Первого МГМУим. И.М. Сеченова д.м.н. профессором В.А. Варшавским.2.3. Специальный метод исследованияСывороточный уровень S100A12 определяли у всех больных, включенных висследование,методомтвердофазовогоиммуноферментногоанализасиспользованием набора фирмы CircuLex (CircuLex S100A12/EN-RAGE ELISAKit). Исследование проводили в лаборатории научно-исследовательского отделанефрологии НИЦ Первого МГМУ им.

И.М. Сеченова. Сыворотку получали изкрови, взятой при проведении планового биохимического анализа, путемцентрифугирования при комнатной температуре в течение 20 минут с частотой3000 оборотов в минуту. Для выполнения отсроченных исследований сывороткузамораживали и хранили в рефрижераторе при температуре -200⁰С. Анализпроводили по предложенной в инструкции методике. Образцы размороженнойсыворотки разводили в 100 раз, затем по 100 мкл разведенной сыворотки вносилив лунки, инкубировали в течение 1 часа при комнатной температуре.

Послеотмывания лунок вносили анти-S100A12 антитела и инкубировали в течение 1часа при комнатной температуре, после чего добавляли по 100 мкл субстратреагента и стоп-раствора и проводили измерение абсорбции при длине волны450 нм.2.4. Принципы выделения подгрупп больных по активности заболеванияНа основании проведенного клинико-лабораторного обследования взависимости от фазы активности или ремиссии заболевания пациенты каждойгруппы подразделялись на 2 подгруппы.47Признаками активности ПБ считали развитие приступа в периодобследования или высокую частоту приступов (ежемесячно и чаще) передвключением в исследование при множественной локализации серозитов.Активность ПБ мы расценивали как высокую у больных с сохраняющимисяприступами ПБ (до 3-6 в год), несмотря на проводимое лечение.

Ремиссию ПБконстатировали у больных, регулярно принимающих колхицин с клиническимэффектом, когда приступы не развивались в течение 3 и более месяцев.Для больных ПБ определяли также тяжесть заболевания по критериямE.Pras, 1998 г. (критерии Тель Хашомер, таблица 4, [232]) и по критериямА. Mor, 2005 г. (модифицированные критерии Тель Хашомер, таблица 5, [193]).Таблица 4Критерии тяжести ПБ по E. Pras и соавт., 1998.ПараметрыВозраст начала болезни, в годахЧисло приступов в месяцПроявление>3121-3111-206-10<6<1Баллы0123411-22>23Артритострый2деструктивный3Рожеподобная эритемаесть2Амилоидозесть3Доза колхицина, граммы111,5223>24Легкому течению ПБ соответствует 3-5 баллов, среднетяжелому – 68 баллов, тяжелому – 9 и более баллов48Таблица 5Критерии оценки тяжести ПБ по A.

Mor и соавт., 2005ПодгруппыБольные, непринимающиеколхицин илипринимающие егобез эффектаТяжестьтяжелаяумереннаялегкаяБольные,принимающиеколхицин склиническимэффектомтяжелаяумереннаялегкаяЧисло признаков2 и болееПризнаки1. ≥2 приступа в месяц2. сочетание болейразличной локализации в>25% приступов3. боли, возникающие вовремя приступов,локализованы более чем в 2областях1 и более1. 18-24 приступов в год2. в большинстве случаевприступ длится более 4сутокНет признаков, характерных для тяжелой иумеренной степеней тяжести3 и более1. сочетание болейразличной локализации в2>25% приступов0-12. боли, возникающие вовремя приступов,локализованы более чем в 2областях3. суточная доза колхицина≥2 мг4.

возникновение ≥2торакальных приступов вовремя курса лечения5. возникновение ≥2рожеподобных эритем вовремя курса лечения6. начало болезни в возрастеменее 10 летАктивность других изучаемых нами семейных периодических лихорадок –криопиринопатий и TRAPS, в виду отсутствия общепринятых критериев,оценивали по наличию основных клинических симптомов заболевания: лихорадкаболее 38⁰С, абдоминалгии, тошнота и рвота, диарея, отечность суставов,воспаление глаз, головная боль, боль в конечностях и кожная сыпь.

Висследовании рабочей группы EUROFEVER показано, что именно эти признакидостоверно свидетельствуют о высокой активности семейных периодическихлихорадок [183].49АктивностьРАоценивалипоиндексуDAS28–сложномуинтегрированному показателю, рассчитываемому по формуле:DAS28 = 0,56*√(tj28) + 0,28*√(sw28) + 0,70*Ln(ESR) + 0,014*VAS,где tj – число болезненных суставов; sw – число воспаленных суставов; ESR –скорость оседания эритроцитров по методу Вестергрена; VAS – общая оценкасостояния своего здоровья больным по 10 мм визуально-аналоговой шкале.Значение DAS28 менее 3,2 соответствовало ремиссии заболевания, более 3,2 – егоактивности [233].Для расчета клинической активности АНЦА-ассоциированных васкулитовиспользовалиБирмингемскийиндексактивностиваскулита(BirminghamVasculitis Activity Score 3.0, BVAS) (табл.

6 [234,235]). Значение индекса более 2баллов позволяло диагностировать активность васкулита, 0-1 балл ремиссию.его50Таблица 6Бирмингемский индекс активности васкулита [234,235]ПроявленияБаллI. Системные проявления:Миалгии/ артралгии/артритЛихорадка (<38,5°C)Лихорадка (>38,5°C)Потеря массы тела(<2 кг)Потеря массы тела(>2 кг)IV. ЛОР-органы:1СинуситВыделения/заложенность носаНосовоекровотечениеКровяные корочки вносуВыделения из ушейСредний отит4Глухота6Охриплость/ларингитСтеноз гортани21223ПроявленияБалл ПроявленияБаллII. Кожные покровы:III.