Диссертация (Влияние состава рациона на микробиологические показатели желудочно-кишечного тракта цыплят-бройлеров при скармливании препаратов Стафак-110 и Целлобактерин-Т), страница 7

При этом основнымимикроорганизмами, высеваемыми из слепых кишок взрослых цыплят, являлись34грамположительные кокки, Bacteriodaceae, Clostridium spp. и Bifidobacteriumspp. Меньше всего в кишечнике идентифицировали E.coli, Salmonella иKlebsiella spp.(Yang et al., 2009; Vila, 2010).Hassanein, Soliman (2010) обнаружили, что пробиотические культурыгриба Saccharomyces cerevisiae в 0,4% концентрации способствовали снижениюв кишечнике цыплят штаммов Escherichia coli, Klebsiella spp., Staphylococcusspp., Micrococcus spp., Campylobacter spp.

и Clostridium perfringens. Также былопоказано, что пробиотические культуры Bacillus licheniformis и Bacillus subtilisувеличивали у35-дневных цыплят количество бифидобактерий в слепойкишке до 107-108 КОЕ/г, а лактобактерий – до 107 КОЕ/г (Просвирина и др.,2005).CSUetal.(2003)показали,чтодобавлениеврационцыплятам-бройлерампребиотиковнаосновефруктооолигосахаридов (ФОС) способствовалоувеличению содержания в кишечнике Bifidobacterium spp., Lactobacillus spp. иEubacterium spp.,в то время как количество Clostridium perfringens и Escherichiacoli снижалось.

Тем не менее, ФОС не оказывали влияния на морфологиюкишечника птиц, однако уровень молочной кислоты в подвздошной кишкеповышался (Van Immerseel et al.,2007; Williams et al., 2008).Spring et al. (2000) опубликовали данные о том, что пребиотики на основеманнанолигосахаридов (МОС) существенно снижали количество Salmonellatyphimurium в слепой кишке после экспериментального заражения цыплятбройлеров культурой данного патогена (Fеrnandez et al., 2002). ВключениеМОС в рацион способствовало росту полезных бактерий Lactobacillus spp.,Bifidobacterium spp.

и снижению общего количества колиформ и Clostridiumperfringens в слепой кишке цыплят-бройлеров (Rehman et al., 2009).Существуют данные, что пребиотики на основе изомальтоолигосахаридов(ИМО) стимулировали рост Lactobacillus johnsoni, Bifidobacterium spp., а такжеснижали популяцию патогенов рода Salmonella в толстом кишечнике птиц35(Chung, Day, 2004). Было также обнаружено, что кормовая лактоза вконцентрации 2,5-4,5% способствовала снижению популяции Enterococcus spp.,Lactobacillus spp.,Clostridium spp.

и колиформ, а также снижала колонизациюSalmonella spp. у цыплят-бройлеров в первую неделю жизни (МсReynolds et al.,2007; Rehman et al., 2009).Сообщалось, что лактулоза и инулин в кормлении бройлеров оказывалиположительноевлияниенаBifidobacteriumspp.,снижаяпопуляциюпотенциальных патогенов (Escherichia coli, Clostridium perfringens) в толстомкишечнике. Однако никакого влияния на колонизацию Salmonella spp. отмеченоне было (Bailey et al.,1991; Yurizial, Chen, 2003). Инулин практически неоказывал никакого влияния на зоотехнические показания бройлеров, а ввысоких дозах способствовал снижению переваримости питательных веществ вкишечнике (Wang, Gibson, 1993; Chambers et al., 1997).Bailey et al. (1991) показали, что комбинация фруктооолигосахаридов(ФОС)имикрофлорыконкурентоспособногоисключениябылаболееэффективной при сокращении колонизации сальмонеллой, чем два препарата вотдельности.

Аналогичный опыт показал, что у цыплят, получавших с кормомсимбиотик, в кишечнике было выше общее число бактерий, бифидобактерий,лактобацилл и кишечной палочки, а также значительно снижена колонизацияпатогенами (Fukata et al., 1999; Schrezenmeir, De Vreze, 2001).2.1.3.3. Сведения о микрофлоре желудочно-кишечного тракта птиц,полученные при использовании молекулярно-генетических методовДонедавнеговременимикрофлораисследоваласьтолькокультуральными методами и микробная экология зависела в основном отметодов, требующих роста микроорганизмов на селективных средах.

Вдополнение к продолжительному по времени и трудоемкости, использованиеселективных сред было специфично для разных видов бактерий, чтонакладывало погрешность в измерениях. Также данные методы не всегда36подходили для чувствительных к кислороду анаэробов, многие из которыхочень трудно изолировать и поддерживать (Langendijk et al., 1995).Исследования состава микрофлоры цыплят-бройлеров датированы восновном 1980-90-ми годами. Сложность таких исследований состояла в том,что строгие анаэробные условия должны были сохраняться во время выделенияи биохимического дифференцирования бактерий.

Доказано то, что толькооколо 50% бактерий слепых кишок бройлеров были способны расти в культуре(Barnes et al., 1979; Miller et al., 1986).Новое развитие методов ПЦР позволилобыстрому и специфичномуобнаружению широкого ряда бактерий и должно стать ключевой процедуройдля идентификации микроорганизмов. Секвенирование гена 16S рРНК будетслужить важным инструментом для определения филогенетических отношениймежду бактериями (Patel, 2001). Методы исследования рибосомальной РНК иДНК - молекулярные методы позволяют идентифицировать различныебактериальные популяции в полученных образцах для культивирования.

Этаметодология первоначально применялась для определения бактериальнойпопуляции ободочной кишки и фекалий человека (Wang et al., 1996; Franks etal., 1998), рубца жвачных и слепой кишки птиц (Nelson et al., 1998).Использование молекулярных методик имеет несколько преимуществ посравнению с классическими культуральными методами для подсчета бактерий,и не вводит погрешность от традиционных методов. Дело в том, что до 99%бактерий на многих средах не растет при искусственных условиях. Этообусловлено тем, что требования роста большинства бактерий все ещенеизвестны и не могут быть воспроизведены при лабораторных условиях(Amann et al., 1995; Hanson, Hanson, 1996).С помощью нового метода ПЦР в реальном времени в желудочнокишечном тракте цыплят-бройлеров, выращенных на растительном рационе,были обнаружены микроорганизмы следующих групп: Clostridium leptum,37Clostridiumcoccoides,Bacterioides,Bifidobacterium,Enterobacteriaceae,Lactobacillus, Clostridium perfringens, Enterococcus, Veillonella, Atopobium,Campylobacter.Отмечено, что в возрасте 7 суток доминировало семействоEnterobacteriaceae, в то время как в возрасте 14 суток – количество облигатныханаэробов.

В промежутке между 14-м и 21-м днем увеличивалось количествоCampylobacter spp. (Wise, Siragusa, 2007).Оказалось, что общее количество разновидностей, представляющихмикрофлору желудочно-кишечного тракта цыплят приблизительно равнялось640 видам из 140 родов, и лишь 10% из данных микроорганизмов возможнокультивировать в лабораторных условиях (Zdunczik et al., 2015).Используяметод, основанный на выделении 16SрРНК, у цыплят в первую неделю жизни вкишечнике были выделены Lactobacillus и Bifidobacterium. Относительнаяпропорция Lactobacillus в слепой кишке была равна 25% относительно другихродов бактерий.

Были обнаружены высокие пропорции Salmonella (до 40%), аCampylobacter присутствовал лишь в незначительном количестве (менее 2%). Внескольких отделах тонкого кишечника были обнаружены клостридии. Свозрастом наблюдалась тенденция к увеличению содержания бактерий родовLactobacillus и Bifidobacteria (до 40%), Salmonella снижалась до 10%,Campylobacter присутствовал только в следовых количествах. В 25-дневномвозрасте более 50% в слепых кишках составляли Lactobacillus и Bifidobacteria(Amit-Romach et al., 2004).При использовании современных методов, в содержимом слепых кишокцыплят-бройлеров было выявлено более 40 различных типов анаэробныхграмотрицательных и грамположительных неспорообразующих родов, включаянесколько разновидностей клостридий. Также некультуральный анализ выявилболее 100 родов бактерий, принадлежащих к неклассифицированным видам(Barnes et al., 1979; Apajalahti et al., 2004).

Случайное клонирование исеквенирование гена 16S рРНК, полученного из слепых кишок цыплят,показало, что более 75% последовательностей принадлежат родам Eubacteria38spp.иClostridiumspp.На10%последовательностейприходилисьразновидности Clostridium IV группы, синтезирующие масляную кислоту, атакжеFaecalibacteriumprausniti.ГруппаAtopobiumсоставляла3,6%,Bacterioides – 1,9%, Actinomyces – 1,3%, Pseudomonas – 0,7%, остальные группыбыли представлены некультивируемыми бактериями (Xiang et al., 2002;Bjerrum, 2005).Данные секвенирования гена 16S рРНК свидетельствуют о том, что усуточных цыплят в микрофлоре слепых кишок доминирующими являютсяLactobacterium acidоphillus, Clostridium saccharolyticum, Clostridium nexile,Ruminococcus gnavus, Enterococcus faecium, E.

coli, а также некультивируемыебактерии. Отмечено, что у взрослых цыплят-бройлеров выделяли такжеRuminococcus lactaris, Eubacterium uniforme, Pseudomonas aeruginosa (Qui et al.,2001). У бройлеров, выращенных на пшеничном рационе, экспериментальнозараженных устойчивым к рифампицину штаммом бактерий S. typhimurium,патогены были обнаружены во всех отделах желудочно-кишечного тракта, в товремя как рН содержимого железистого желудка снижалось, при этомколичество Clostridium perfringens было значительно ниже по сравнению сконтрольной группой, что говорит о том, что железистый желудок служитбарьером на пути инфекции (Bjerrum et al., 2005).Данные канадских ученых (Gong et al., 2002) свидетельствуют о том, чтоLactobacillus и Enterococcus были основными преобладающими видамисодержимого подвздошной кишки цыплят-бройлеров, в то время какEnterococcus ceacorum и Fusobacterium prausnitzii, Ruminococcus и Clostridiaбыли основными преобладающими группами в слизистой оболочке слепойкишки.

У цыплят кросса «Росс 308», выращенных на рационе с 30%-мсодержанием продуктов кукурузы, в подвздошной кишке и слепых отросткахбыло ниже содержание колиформ и лактозо-негативных бактерий (Ranjitkar,Engbеrg, 2014).39По данным австралийских ученых (Torok et al., 2009),цыплята-бройлерыпоедают более 4% своего рациона с подстилки. Отмечалось, что составмикрофлоры у цыплят кросса «Кобб 500» значительно отличался междугруппами с различным материалом подстилки. Так, у цыплят, выращенных насоломенной подстилке по сравнению с древесными опилками, в содержимомслепого кишечника было выявлено больше аэробных бактерий.