Диссертация (Определение лекарственных средств неорганической природы методом капиллярного электрофореза), страница 7

Объекты исследования.№1Наименование«Натрия хлорид», раствор дляинфузий изотонический 0,9%ПроизводительОАО «Биохимик»2«Гемодез-8000»ОАО «Биосинтез», 703133«Гемодез-8000»ОАО «Биосинтез», 1505134«Гемодез-Н»5СодержащиесякатионыНатрийНатрий, калий,кальций, магнийНатрий, калий,кальций, магнийФГУБ «Курская биофабрика –Натрий, калий,фирма БИОК»кальций, магний«Дисоль»ОАО «Биохимик», 411212натрий6«Дисоль»ОАО «Биохимик», 190612натрий7«Трисоль»ОАО «Биохимик», серия 220410Калий, натрий8«Трисоль»ОАО «Мосфарм» серия 0020212Калий, натрий9«Рингер»ОАО «Биохимик», 160410калий, натрий, кальций10«Раствор Рингера»ООО «Хемофарм А.Д.», А202036калий, натрий кальций11«Рингера раствор»ОАО «Красфарма», 130413калий, натрий кальций12«Мафусол»ОАО «Биосинтез», 40511натрий, калий, магний13«Мафусол»ОАО «Биосинтез», 60412натрий, калий, магний14«Квинтасоль»ОАО «Биосинтез», 3091115«Раствор Хартмана»ООО «Хемофарм А.Д.», 1900126калий, натрий, кальций16«Раствор Хартмана»ООО «Хемофарм А.Д.», А102761калий, натрий, кальций17«Раствор Хартмана»ООО «Хемофарм А.Д.», A202036калий, натрий, кальций18«Раствор Хартмана»ООО «Хемофарм А.Д.», А202183калий, натрий, кальций19«Рингер»ОАО «Биохимик», 20213натрий, калий, кальцийнатрий, калий,кальций, магний4720«Хлосоль»ОАО «Биохимик»натрий, калий19«Аспаркам»ОАО «Луганский химзавод»Калий, магний20«Магне В6»«Санофи Винтроп Индустрия»,Магний21«Лозап»22«Диклофенак»ООО «Хемофарм»Натрий23«Цефазолин»ОАО «Биохимик»Натрий24«Амоксиклав»«Лек д.д.», СловенияКалий, натрий, магний25«Магнерот»«Вёрваг Фарма Гмбх и Ко.

КГ»,Магний, натрийФранция«Зентива а.с.»СловацкаяРеспубликаГермания«Магния Сульфат», раствор26для внутривенного ивнутримышечного введенияКалий, натрий, магнийМагнийОАО «Биохимик»250 мг/мл«Анальгин», раствор для27внутривенного ивнутримышечного введения500 мг/мл28Республика БеларусьРУП «Белмедпрепараты»,глазныеРеспублика Беларусьприготовления раствора дляприема внутрьНатриймедицинских препаратов»,«Сульфацил-натрий», капли«Регидрон», порошок для29РУП «Борисовский завод«Орион корпорейшн»,НатрийКалий, натрийФинляндия«Байер Консьюмер Кэр АГ»,Кальций, магний30«Ренни»31БАД «Цитрокальцевит»ООО «Промавтоматика», 87320кальций32БАД «Пиковит плюс»АО «КРКА»кальций33БАД «Алфавит тинейджер»,табл. №1ШвейцарияООО «Внешторг Фарма»БАД «Наше решение. Детский34витаминно-минеральныйкальцийкальцийООО «Руспапс»комплекс»35БАД «Остеохард»ООО «А-Диал»кальций482.2 Оборудование.Аналитическое оборудование:Система капиллярного электрофореза Agilent 3D-CE (США) сдиодноматричнымдетекторомикварцевымкапилляромAgilentLэфф/Lобщ=56/64 см, ID=50 мкм, оснащенная компьютером с установленнойпрограммой «3D-CE Chemstation Rev.

B.04.03 (16)». Диапазон напряжений:от 0 до + 30 кВ, величина тока: от 0 до 300 мкА, величина мощности: от 0 до6Вт, гидродинамическое и электрокинетическоевведение образца,внутренний диаметр капилляров: 50, 75 и 100 мкм, детектор типафотодиодная матрица (режим сканирования в диапазоне от 190 до 600 нм),продолжительность периода сканирования: 0,1 сек, термостатированиекапилляра на 25ºС.;Весы аналитические AND GH-120;рН-метр Sartorius PB-11 с диапазоном измерений -1,99 …+ 19,99В;Вспомогательное оборудование:УЗ – ванна CT BRAND CT-400 D с частотой ультразвука 43-45 кГц,рабочее время сессии 99 с, мощность 90 Вт;Дистиллятор ДЭ-10Баня водяная лабораторная с электрическим подогревом;Аппарат для получения деионизированной воды «Milli-Q»Центрифуга Eppendorf 5418 (Германия) с относительной силойцентрифугирования (RCF) не менее 4000;Шейкер Biosan OS-10 (Biosan, Латвия) с рабочим диапазоном оборотов50-350 об./мин и таймером от 1 мин.

до 96 ч.;2.3 Реактивы и расходные материалы.Реактивы:Вода, очищенная на системе Milli-Q (сопротивление 18,2 МОм);Дистиллированная вода (ГОСТ 6709);49Калий хлористый, квалификация «ч.д.а.» (массовая доля калияхлористого в прокаленном не менее 99,8 %, ГОСТ 4234-77);Натрий хлористый, квалификация «ч.д.а.» (массовая доля натрияхлористого в прокаленном не менее 99,9 %, ГОСТ 4233-77);Кальций хлористый безводный, квалификация «ч.д.а.» (массовая долякальция хлористого в пересчете на безводный не менее 99,8 %, ТУ 6-09-471181);Магний хлористый шестиводный, квалификация «ч.д.а.» (содержаниеосновного вещества не менее 99,9 %, ГОСТ 4209-77);Аммонийуксуснокислый,квалификация«ч.д.а.»(содержаниеосновного вещества не менее 98 %, ГОСТ 3117-78);Лития ацетат двухводный, получен от компании “Sigma-Aldrich”(лития ацетата не менее 63%, каталожный номер: L6883);Натрий сернокислый безводный, квалификация «ч.д.а.» (массовая доляосновного вещества, %, не менее 99,9 %, ГОСТ 4166-76);Натрий фосфорнокислый 1-замещенный, 2-водный, квалификация«ч.д.а.» (массовая доля вещества 100-103 %, ГОСТ 200-76);Диангидрид пиромеллитовый, получен от компании «Sigma-Aldrich»(не менее 97% вещества, каталожный номер: 412287);Трис(гидроксиметил)аминометан,полученоткомпании«Sigma-Aldrich» (не менее 99,9% вещества, каталожный номер: T6791);Триэтаноламин, квалификация «ч» (не менее 99,9% вещества, ТУ 6-092448-91);Имидазол, получен от компании «Sigma-Aldrich» (не менее 99,5%вещества, каталожный номер: 56750);Натрия гидроокись, квалификация «ч.д.а.» (не менее 98,7% вещества,ГОСТ 4328-77);Кислота уксусная (ледяная), квалификации «х.ч.» (не менее 99,8%вещества, ГОСТ 61-75);50Кислота муравьиная, получена от компании «Acros organics» (не менее99,0 % вещества);Метанол, квалификации «х.ч.» (не менее 99,5% вещества, ГОСТ 6995);Спирт этиловый ректификованный технический высшего сорта поГОСТ 18300.51Глава 3.

Оптимизация условий разделения и детектированияметодом капиллярного электрофореза.3.1 Подбор условий разделения и детектирования катионов.Приготовлениерабочегобуферногорастворапроводилосьпоследующей схеме: навеску имидазола, в зависимости от задачи, с точностьюдо 1 мг и навеску 18-краун-6 эфира помещали в мерную колбу вместимостью100 мл, прибавляли около 60 мл воды деионизированной, перемешивали дополного растворения, доводили раствор до необходимого значения pH,титруя кислотой муравьиной, затем доводили водой до метки.Для оценки времен миграции и разделения использовался раствор,содержавший по 0,05 % катионов калия, натрия, магния и кальция, которыйготовился следующим образом:В качестве внутреннего стандарта использовались катионы лития.Стандартный раствор готовился следующим образом: точную навеску литияацетата двухводного около 734 мг, помещали в мерную колбу вместимостью100 мл, прибавляли около 60 мл воды деионизированной, перемешивали дополного растворения, доводили водой до метки.Для подготовки капилляра к анализу проводились следующиепроцедуры:-приподготовкеновогокапилляра-промываниеводойдеионизированной в течение 5 минут, промывание 1 М раствором натриягидроксида в течение 10 минут, промывание водой деионизированной втечение 5 минут, промывание 0,1 М раствором кислоты хлороводородной втечение 5 минут, промывание водой в течение 5 минут, промываниеметанолом в течение 5 минут, промывание водой деионизированной втечение 10 минут, при необходимости проводилось кондиционированиенапряжением 25 кВ капилляра, заполненного рабочим буферным раствором;52- при подготовке капилляра, находящегося в использовании, перед ипосле анализов - промывание в течение 5 минут водой деионизированной,промывание в течение 5 минут 0,1 М раствором натрия гидроксида, затемводой деионизированной в течение 5 минут;-междуанализамикапиллярпромывалсярабочимбуфернымраствором в течение 5 минут.При необходимости длительного хранения капилляра он заполнялсяметанолом и продувался воздухом.3.1.1 Подбор концентрации контрастного вещества.На основании литературных данных в качестве контрастного веществабылорешеноконцентрациииспользоватьимидазолаимидазол.описаннаяДлявыявлениявышесмесьоптимальнойкатионовбылапроанализирована с использованием рабочих буферных растворов сконцентрацией имидазола 5, 10, 15, 20, 25, 30, 40 ммоль/л.

Полученныеэлектрофореграммыоптимальныхпредставленыусловийразделениянарисункепроведена3.Дляоценкаопределениязависимостейотносительных величин времен миграции, кажущегося числа теоретическихтарелок и соотношения сигнал/шум от концентрации имидазола. Полученныерезультаты представлены на рисунках 4, 5 и 6.53Рисунок 3. Зависимость электрофоретического поведения исследуемыхкатионов от концентрации имидазола.tв-ва/tстанд0,90,850,80,75K0,7Ca0,65NaMg0,60,550,5010203040ммоль/дм3Рисунок 4.

Зависимость относительных величин времен миграции (tвва/tстанд., ось ординат) от концентрации имидазола (ммоль/л, ось абсцисс).Использовались средние значения трех определений для каждого типабуфера.Оценка зависимости относительных величин времен миграции (далееОВМ) от концентрации имидазола (рис. 4) показала, что изменениеконцентрации имидазола не оказывает существенного влияния на ОВМ54ионов кальция и магния, однако с ростом концентрации имидазолапроисходит снижение ОВМ ионов калия и натрия.кЧТТ500000450000400000350000300000кЧТТ K250000кЧТТ Na200000кЧТТ Ca150000кЧТТ Mg100000500000010203040ммоль/дм3Рисунок 5. Зависимость кажущегося числа теоретических тарелок(кЧТТ) (ось ординат) от концентрации имидазола (ммоль/л, ось абсцисс).Использовались средние значения трех определений для каждого типабуфера.На рисунке 5 видно, что наиболее выражено влияние концентрацииимидазола на кЧТТ ионов магния в диапазоне 10-20 ммоль/л (увеличениеболее чем на 200%), для других катионов с каждым увеличениемконцентрации имидазола на 10 ммоль/л, кЧТТ увеличивалось на 30-50%.сигнал/шум250Соотношение сигналак шуму для катионовкалия200Соотношение сигналак шуму для катионовкальция150Соотношение сигналак шуму для катионовнатрия10050Соотношение сигналак шуму для катионовмагния0010203040ммоль/дм3Рисунок 6.

Зависимость соотношения сигнал/шум (ось ординат) отконцентрации имидазола (ммоль/л, ось абсцисс). Использовалисьсредние значения трех определений для каждого типа буфера.55Из рисунка 6 можно сделать вывод о том, что при концентрации 15ммоль/л происходит значительное увеличение сигнала для катионов магния,для всех ионов происходит значительное увеличение шума при превышенииконцентрации имидазола 20 ммоль/л.По полученным результатам видно, что оптимальной являетсяконцентрация имидазола 15-20 ммоль/л.