Автореферат (Персонифицированная ранняя диагностика и стратификация рисков прогрессирования туберкулезной инфекции у детей), страница 6

Кроме того,определена высокая вероятность (59,38%; 95% ДИ от 42,23 до 74,62%) формированиянизкой результативности вакцинации БЦЖ (БЦЖ-М) (F4,946; р = 0,004) у детей сгетерозиготным генотипом изучаемого полиморфизма. В свою очередь низкаярезультативностьвакцинацииудетейможетбытькосвеннымпризнаком,свидетельствующим о гетерозиготном генотипе полиморфного варианта T-1488C генаIFNG.При развитии ТБ мы установили, что ведущими факторами в реализациивысокого риска при гетерозиготном генотипе полиморфного варианта T-1488C генаIFNG являлись низкий достаток (F31,994; р = 0,0000), курение в семье (F5,193; р = 0,003)и отсутствие грудного вскармливания (F6,965; р=0,0004). Данные факторы риска можноотнести к внешним факторам, влияющим на эпигенетические модификации генома. Внастоящее время эпигенетическим процессам придают большое значение [G.

Kelsey etal., 2017; C. D. Heijden et al., 2017], так как, не затрагивая содержание наследственнойинформации, они играют большую роль в экспрессии генов [G. Kelsey et al., 2017;C. D. Heijden et al., 2017]. Считается, что генетические и эпигенетические модификации,в том числе при развитии туберкулеза, могут зависеть от экологических (в частности, оттабачного дыма [S. Prasad et al., 2017]) и диетических факторов [I. Romieu et al., 2002;A.

Marcos et al., 2003]. В настоящее время именно эпигенетические процессыопределяют комплексные отношения между генетикой, окружающей средой, образомжизни и заболеваниями [M. M. Esterhuyse et al., 2015]. Полученные нами результаты пооценке значимости полиморфизма гена IFNG для туберкулезной инфекции позволилиустановить, что гетерозиготный генотип полиморфного варианта T-1488C гена IFNGопределялся и у части детей с ЛТИ (40,3%), поэтому отсутствие факторов риска25заболевания, влияющих на эпигенетические процессы, могут объяснить факт отсутствияТБ у данной группы пациентов.Учитывая, что в наших исследованиях был установлен недостаточный защитныйуровень ИФН- при развитии ТБ у детей, мы предположили возможный вклад впатогенез заболевания однонуклеотидной замены гена IFNG.

Тем более что ранее былаустановлена [Д. С. Ожегова, 2009] взаимосвязь полиморфизма T-1488C гена IFNG суровнем экспрессии гена IFNG, но не изучалась связь с уровнем продукциисоответствующего цитокина (при индукции антигенами МБТ).С целью выявления связи генотипов полиморфного варианта Т-1488C гена IFNG суровнем продукции ИФН- после стимуляции специфическими антигенами (CFP32B,Rv2660c, ESAT6, 85a, ESAT6-CFP10) было проведено дополнительное исследование. Врезультате впервые было определено, что полиморфизм гена IFNG (Т-1488C)ассоциирован с различной выраженностью иммунного ответа против отдельных МБТантигенов (табл. 1).Таблица 1 – Уровень продукции индуцированного ИФН- (пг/мл) специфическимиантигенами в зависимости от генотипов полиморфного варианта T-1488C гена IFNG приТБ, ME (Q25%:Q75%)Специфическиеантигеныгруппа «ТБ», N=81генотипТС,n=42ТТ и СС,n=39ППД-Л1001,6 (698:1200)1380,7 (741,5:1294,5)CFP32B69,8 (10,2:68)95,8 (21:122,5)Rv2660c102,6 (12,2:83)149,6 (37,5:195,5)101,5 (10,9:57,4)112,8 (26:173)65 (0,2:40)90,3 (6,5:101)440,4 (139:761)549,5 (187:1133)ESAT685аESAT6-CFP10КритерийМанна-Уитни(U), рU = 703,5;р = 0,275U = 554,5;р = 0,018U = 513;р = 0,006U = 523,5;р = 0,005U = 549,5;р = 0,016U = 768;р = 0,630Анализ результатов исследования, представленный в таблице 1, показал, что приразвитии ТБ определена связь между генотипом полиморфного варианта гена IFNG (T1488C) и уровнем индуцированного ИФН-.

Установлено, что уровень индуцированного26ИФН- (на антигены: CFP32B, Rv2660c, ESAT6, 85a) значимо снижался пригетерозиготном генотипе полиморфного варианта T-1488C гена IFNG.Проведенный кластерный анализ показателей у детей, больных ТБ и с ЛТИ,позволил в зависимости от генотипов полиморфного варианта T-1488C гена IFNG иуровня продукции ИФН- (по и.с.) выделить 3 группы (кластера) (рис.

2).5стандартизованные показатели43210-1-2-312345678Кластер 1Кластер 2Кластер 3признаки*Рисунок 2 – Кластерный анализ по стандартизованным показателям уровняИФН- индуцированного специфическими антигенами (и.с.) в зависимости от генотиповполиморфного варианта гена IFNG (T-1488C) у детей групп «ТБ» и «ЛТИ»Примечание: *1 – группы (ТБ-3; ЛТИ-2); 2 – ИФН- ППД-Л, и.с.; 3 – ИФН- CFP32B,и.с.; 4 – ИФН- Rv2660c , и.с.; 5 – ИФН- ESAT6, и.с.; 6 – ИФН- 85a, и.с.; 7 – ИФН-ЕSAT6-CFP10, и.с.; 8 – INFG_T(-1488)C (1-ТС, 2-ТТ, 3-СС)Первый и третий кластеры формировали признаки, которые характеризовалиситуацию при развитии ТБ у детей. Первый вариант был связан с гомозиготнымгенотипом по аллелю С полиморфного варианта гена IFNG (T-1488C) и снижениемуровня продукции ИФН- на стимуляцию белками ранней стадии туберкулезнойинфекции (CFP32B, Rv2660c, ESAT6, 85a) при сохранении более выраженного ответа нагибридный белок, чем в третьем кластере.

Третий вариант был связан с гетерозиготнымгенотипом полиморфного варианта гена IFNG (T-1488C) и снижением ответа на белкиранней стадии туберкулезной инфекции при сохранении менее выраженного ответа на27ЕSAT6-CFP10, что позволило также подтвердить ассоциацию гетерозиготного генотипас низкой продукцией цитокина и высоким риском ТБ.Второй кластер формировали признаки, которые характеризовали ситуацию приразвитии ЛТИ, для нее было характерно наличие гомозиготного генотипа по аллелю Тполиморфного варианта гена IFNG (T-1488C) и высокого уровня продукции ИФН- настимуляцию белками ранней стадии туберкулезной инфекции при низком ответе нагибридный белок, что свидетельствовало о протективной роли генотипа ТТ приполиморфизме гена IFNG (T-1488C), а выраженные реакции на специфические антигены– о формировании адекватного противотуберкулезного иммунитета.Таким образом, нами впервые определена связь гетерозиготного генотипа приполиморфизме гена IFNG (Т-1488C) со снижением продукции индуцированногоотдельными МБТ-антигенами ИФН- и развитием ТБ, а наличие гомозиготногогенотипа по аллелю Т полиморфного варианта гена IFNG (T-1488C) – с высокимуровнем продукции ИФН- после специфической стимуляции и формированиемпротивотуберкулезного иммунитета.Полученные результаты позволили нам утверждать, что выделен еще одингенетический маркер (фактор риска – полиморфизм – 1488C/T гена IFNG) развития ипрогрессирования ТБ у детей с ЛТИ, реализующийся при наличии социальных имедико-биологических факторов риска, в первую очередь таких как курение в семье,низкий достаток в семье и отсутствие грудного вскармливания.Учитывая роль хемотаксического для макрофагов белка 1 (МСР1) [C.

C. Shu et al.,2013] и иммунного ответа, опосредованного Th2 типа [O. Schreiber et al., 2008], мыпосчитали необходимым оценить роль гена МСР1 в прогрессировании туберкулезногопроцесса, в качестве дополнительного генетического фактора риска.

Для этого былвыбран полиморфный вариант С-2508Т гена МСР1, учитывая, что ранее были попыткиоценить роль гена МСР1 и его полиморфизм в восприимчивости к ТБ [A. Alcaïs et al.,2005; Д. С. Ожегова, 2009]. Так, мы установили, что гетерозиготный генотип изучаемогополиморфизма гена МСР1 связан с прогрессированием заболевания, при этомвероятность его прогрессирования составила 76,54% (95% ДИ от 66,17 до 84,51%).Полученные нами результаты позволили говорить о ТБ как о гетерогенномхроническом заболевании, тем самым подчеркивая участие многих, в том числегенетических, факторов в его развитии (рис. 3).28Полиморфизм гена гамма-интерферона (IFNG T-1488C)Гомозиготный генотип (ТТ)Гетерозиготный генотип (ТС)M. tuberculosisМедико-биологическиефакторы рискаСоциальные факторырискаАктивация клеточногоиммунитетаДисбаланс клеточногоиммунитетаВысокий уровеньиндуцированного ИФН-γ (наантигены ранней стадиитуберкулезной инфекции)Снижение уровняиндуцированного ИФН-γ (наантигены ранней стадиитуберкулезной инфекции)положительная реакцияна ЕSAT6-CFP10ЛТИТБРисунок 3 – Схема патогенеза прогрессирования туберкулезной инфекцииИзвестно, что до возникновения заболевания длительное время туберкулезнаяинфекция протекает бессимптомно и ее можно выявить только с помощьюиммунологического анализа [M.