Диссертация (Фармакогностическое изучение и стандартизация почек и листьев смородины черной (Ribes Nigrum L.)), страница 4

В литературе приводятся методы определения углеводов влекарственном растительном сырье различными физико-химическими методами. Качественной реакцией на свободные углеводы является реакция Бертрана(с реактивом Фелинга), связанные сахара определяются после гидролиза [79].Состав углеводов определяется методом ТСХ с использованием подвижныхфаз: н-бутанол–пиридин–вода (6:4:3); этилацетат–кислота уксусная –кислотамуравьиная–вода (18:3:1:4); н-бутанол – пиридин - вода (6:4:3); н-бутанол–уксусная кислота–вода (4:1:5) [6, 10, 45, 79].20Для количественного определения полисахаридов используется гравиметрический метод [10, 45, 79], спектрофотометрический метод с применениемраствора пикриновой кислоты [30, 60].При количественном определении свободных сахаров используется методпрямофазной ВЭЖХ, связанных углеводов - метод капиллярного электрофореза.

Нейтральные сахара определяются спектрофотометрически по продуктамвзаимодействия с пикриновой кислотой, и кислые сахара - карбозольным методом [35, 45].Для обнаружения аминокислот используют физические, химические ифизико-химические методы: цветные реакции (чаще всего с нингидрином), метод ТСХ. В настоящее время наиболее информативным является метод с использованием автоматических аминокислотных анализаторов, при использовании в качестве внутреннего стандарта смеси стандартных образцов аминокислот. Метод позволяет устанавливать как качественный, так и количественныйсостав аминокислот ЛРС [2, 22, 31].Дубильные веществаДля качественного определения дубильных веществ по литературнымданным известны следующие качественные реакции: на гидролизуемые вещества: с ацетатом свинца, в результате которой образуется осадок желтого цвета,осаждение дубильных веществ аммония сульфатом; с железо-аммониевымиквасцами - черно-синее окрашивание или осадок; на конденсированные дубильные вещества: осаждение при нагревании с раствором формалина и кислотойхлористоводородной концентрированной - красный творожистый осадок (флабофен); с железо-аммониевыми квасцами - черно-зеленое окрашивание; с 1%раствором ванилина в кислоте хлористоводородной концентрированной - красное, малиновое или розовое окрашивание, с натрия ацетатом в среде кислотыуксусной ледяной при добавлении железо-аммониевых квасцов - черно-зеленоеокрашивание.

Известны также общие реакции на дубильные вещества: с раствором желатина - характерная муть или белый осадок, исчезающий при добавлении избытка желатина; с 1% раствором хинина хлорида - аморфный осадок; с210,1 Н раствором натра едкого окраска раствора постепенно изменяется от желтой до коричневой. [79, 91].Для определения качественного состава дубильных веществ часто используется метод ТСХ. В качестве систем растворителей используют: нбутанол-кислотауксуснаяледяная–водавразличныхсоотношениях-(40:12:28), (4:1:2), (4:1:5); бензол-метанол-кислота уксусная ледяная (48:8:4),(45:8:15).

Выявление зон осуществляют 1% раствором ванилина в кислоте хлористоводородной концентрированной [13, 34, 47]. Tits, M. и сотр. исследованыпроантоцианидины листьев смородины методом ТСХ в подвижной фазе этилацетат-вода-кислота муравьиная-кислота уксусная (70:20:3:2), обнаружение зон– раствором ванилина в метанольном растворе кислоты хлористоводородной.Со стандартными образцами идентифицированы 10 соединений, в том числе: 4мономера (катехин, эпикатехин, галлокатехин, эпигаллокатехин), 4 димера (2основных продельфинидина: галлокатехин-(4a->8)-галлокатехин, галлокатехин(4a->8)-эпигаллокатехин; и 2 минорных: галлокатехин-(4a->8)-катехин, галлокатехин-(4a->6)-галлокатехин); 2 тримера (галлокатехин-(4a->8)- галлокатехин(4a->8)-галлокатехин [158].Способы количественного определения дубильных веществ можно подразделить на следующие основные группы: 1. гравиметрические – основаны наколичественном осаждении дубильных веществ желатином, ионами, тяжелыхметаллов или адсорбцией тольевым порошком.

До 1961 года являлся основнымметодом определения; 2. титриметрические – в основе лежит окислительно –восстановительная реакция с применением калия перманганата (метод ГФ ХIизд.); 3. фотоколориметрические – основаны на реакции с солями железа (II),кислотой фосфорновольфрамовой и др.; 3. методы нефолометрические, спектрофотометриические, рефрактометрия, полярография. 4.

метод ВЭЖХ. Методы первых четырех групп являются достаточно трудоемки, гравиметрия и титриметрия (перманганатометрия) дают завышенные результаты [21].Часто для количественного определения дубильных веществ используется спектрофотометрический метод [7, 21].22Для оценки содержания дубильных веществ также используется методВЭЖХ.

Например, данным методом определено в плодах бархата амурскогосодержание галловой кислоты и галлатонинов [47], в листьях чая определен качественный состав катехинов и установлено количественное содержание [163].СапониныОбщих химических методов определения сапонинов не существует, таккак структура сапонинов очень разнообразна.

Из водных растворов сапониныосаждаются гидроксидом бария и магния, солями меди и ацетатом свинца. Стероидные сапонины дают реакцию Либермана-Бурхарда. Большинство сапонинов вызывает гемолиз эритроцитов крови [91].Метод ТСХ в настоящее время является наиболее универсальным дляпредврительного изучения состава БАВ, в том числе сапонинов. В литературеописаны методики определения групп сапонинов с использованием различныхподвижных фаз и проявляющих реактивов. Например, аралозиды в корнях аралии разделяли в системе растворителей: безводный хлороформ-метанол-вода(61:32:7), зоны адсорбции проявляли 20% раствором серной кислоты [80].

Дляопределения тритерпеновых сапонинов используют системы растворителей: 1.этилацетат-метанол-диэтиламин (70:20:1), зоны адсорбции выявляют растворомванилина; 2. уксусная кислота ледяная–вода–н-бутанол (10:40:50), зоны адсорбции выявляют в УФ – свете при длине волны 254 нм; 3. н-бутанол–уксусная кислота ледяная–вода (50:40:10), детектирующий реагент 10% растворсерной кислоты в 40% этаноле [79, 104].Для количественного определения тритерпеновых сапонинов применяются гравиметрические, титриметрические [91], фотометрические и спектрофотометрические методы.

Для спектрофотометрического определения сапониновиспользуется реакция тритерпеноидов с концентрированной серной кислотой[29, 79, 80].Аскорбиновая кислотаДля определения аскорбиновой кислоты широко используется титриметрический метод. В качестве титранта используются различные титранты, каж-23дый из которых имеет свои особенности и недостатки.

Например, 2,6 –дихлорфенолиндофенолят натрия в зависимости от сопутствующих веществ всырье может давать, как завышенные, та и заниженные результаты [1, 104],данный метод предложен в основу количественного определения аскорбиновойкислоты в плодах шиповника, включенный в ГФ СССР XI изд. [16]. Используется также метод йодометрического титрования [16], однако йод в кислой средевосстанавливает кроме аскорбиновой кислоты танины, эфирные масла, пектины, жиры и др. и, следовательно, не может быть использован для анализа аскорбиновой кислоты в сырье и фитопрепаратах. Для определения аскорбиновойкислоты используется методы потенциометрического [33, 142, 162] и амперометрического титрования [81].Метод ВЭЖХ используется при стандартизации содержания аскорбиновой кислоты в ЛРС и препаратах [8, 15, 150].ФлавоноидыОсновным классом БАВ почек и листьев черной смородины являютсяфлавоноиды.

Исследованию данного класса соединений в сырье смородины посвящено наибольшее количество публикаций.Для качественного обнаружения флавоноидов в ЛРС в литературе приводятся несколько качественных реакций. Специфической реакцией на флавоноиды является цианидиновая проба с концентрированной хлористоводороднойкислотой и металлическим магнием или цинком образуют красное окрашивание. Реакция очень чувствительна, основана на восстановлении карбонильнойгруппы с образованием антоцианидина [78, 91]. Флавоноиды образуют с основным ацетатом свинца соли или комплексы, окрашенные в ярко-желтый цвет,при этом обнаруживаются соединения, содержащие о-диоксигруппировку. Наличие данной группировки дает окрашивание с алюминием, цирконием, чтоиспользуется при исследовании флавоноидных соединений методом хроматографии на бумаге и в тонком слое сорбента ТСХ.

С реактивом Вильюна (борнаяи лимонная кислоты в безводном ацетате) флавоноиды образуются комплексы,имеющие желтую окраску [78].24Для анализа флавоноидов широко используют методы ТСХ, при этомприменяют различные системы растворителей: н-бутаная–уксусная кислота–вода (4:1:5); 2% уксусная кислота; 15% уксусная кислота; хлороформ-метанол(9:1); кислота уксусная ледяная-кислота муравьиная безводная-вода-этилацетат(11: 11: 27: 100) [23, 148].

В работе Koeppen B.H. приведено исследование флавоноидов в плодах черной смородины методом ТСХ [129].Для количественного определения флавоноидов в последние годы предпочтение отдается спектрофотометрическому методу анализа. Определениесуммы флавоноидов проводится после реакций комплексообразования с такимиреагентами как: соли циркония [86, 90], цинк-уранил-ацетат, алюминия хлорид[36, 93]. Спектрофотометрический метод по реакции комплексообразования салюминия хлоридом используется широко для анализа флавоноидов в сырье ифитопрепаратах [90], в том числе для анализа в сырье смородины черной - листьях [148] и плодах [106].Основным методом исследования качественного и количественного состава флавоноидов смородины в настоящее время является метод ВЭЖХ. [102,106, 143, 152].Сырье и настойка гомеопатическая матричная (НГМ) смородины чернойописаны в Фармакопее Франции [148].