Диссертация (Разработка твердых лекарственных форм экстракта имбиря лекарственного), страница 8

Флавоноидыобразуют от желтого до оранжево-красного цвета осадки. В реакцию вступаюттолько флавоноиды с о-диоксигруппировкой в кольце В. Из концентрированногораствора флавоноидные вещества нередко выкристаллизовываются. Дают осадкитакжедубильныевещества,являющиесяпроизводнымипирогаллола,истероидные сапонины. [6]К водному раствору прибавляют по каплям раствор основного свинцаацетата, наблюдают окраску осадка. При определении дубильных веществ к 5 млраствора прибавляют 10 мл 10% раствор уксусной кислоты и 5 мл 10% раствораацетата свинца. Наблюдалось появление слабого белого кристаллического осадкабез добавления 10% раствора уксусной кислоты.Так как в СЭИЛ не обнаруживаются флавоноиды и дубильные вещества,возможно в реакцию вступают гингеролы и шогаолы.1. Реакция с реактивом Марки.

К 20 мг сухого экстракта помещают начасовое или предметное стекло и добавляют 3 капли реактива Марки. Пристоянии появляется красное окрашивание (фенольные соединения). [31] Так как вэкстракте не обнаруживаются флавоноиды и дубильные вещества, возможно вреакцию вступают гингеролы и шогаолы. На примере 6-гингерола:к. Н2SO4+-Н2О48к. Н2SO4[O]-Н2О– Н2[O]– Н2Арилметановый краситель(красно-коричневого цвета)Реакция Либермана (реакция нитрозирования). К 20 мг сухого экстрактаимбиря помещают на предметное стекло, смачивают 2-3 каплями 1% растворанатрия нитрита в концентрированной кислоте серной.

Наблюдается окрашивание,изменяющееся при добавлении раствора щелочи (фенольные соединения). [26]:темно-коричневое окрашивание, переходящее в серо-коричневое при добавлениищелочи. Так как в экстракте не обнаруживаются флавоноиды и дубильныевещества, возможно в реакцию вступают гингеролы и шогаолы. На примере 6гингерола:к. Н2SO4+NaNO2к. Н2SO449RИндофенолПо основании реакции пенообразования с 0,1 н NaOH в экстракте былсделан вывод о наличие стероидных сапонинов. В одну пробирку приливают 5мл 0,1 н. НСl, а в другую – 5 мл 0,1 н. NaOH.

Затем в обе пробирки добавляют 1мл раствора СЭИЛ и сильно встряхивают. При наличии в экстрактетритерпеновых сапонинов в обеих пробирках образуется пена, равная по объему истойкости. Если экстракт содержит сапонины стероидной группы, то в щелочнойсреде образуется пена в несколько раз больше по объему и стойкости.

[42]Образовалась стойкая пена в пробирке с 0,1н. NaOH (рис. 3.1). В СЭИЛприсутствуют стероидные сапонины.Рисунок 3.1. Реакция пенообразованияДля идентификации алкалоидов были использованы общие реакцииосаждения с реактивами Вагнера, Драгендорфа, фосфорно-молибденовой и50пикриновой кислотой, в результате которых было обнаружено незначительноепоявление осадков.Для того, чтобы исключить ложноположительную реакцию былапроведенатонкослойнаяхроматографияпоследующейметодике:былииспользованы пластинки Silufol (10×15) и хроматографировали в двух системахрастворителей: хлороформ – этилацетат – раствор аммиака (5 : 4 : 1) и хлороформ– этиловый спирт (9 : 1). Испытуемый раствор: 0,1 г СЭИЛ растворяли в 10 млэтилацетата, перемешивали и затем фильтровали через бумажный фильтр «синяялента».

4 мкл раствора наносили на линию старта, длина пробега фронтарастворителей составила 13 см. После высушивали пластинку и затемопрыскивали её реактивом Драгендорфа. [42, 65]В результате эксперимента в обеих системах на пластинах не былиобнаружены оранжевые пятна, что может свидетельствовать об отсутствииалкалоидов.Идентификацию фенольных соединений (гингеролов и шогаолов)проводили методом ТСХ по методике Европейской Фармакопеи.В Европейской Фармакопее рекомендуют детектировать пластинку принагревании в течение 10 минут при 100-105°С.

При проведении испытаниязамечено, что нагревание не требуется. [63]Наблюдаемый результат: на хроматограмме раствора сравнения отмеченодве зоны: интенсивно красная с Rf около 0,7 резорцина и светло-фиолетовая зонас Rf около 0,85 цитраля. На хроматограмме испытуемого раствора: ниже уровняпятна резорцина фиолетовая полоса с Rf около 0,46 и тонкая фиолетовая полоса сRf около 0,15 (гингеролы);в середине между пятнами резорцина и цитралятемно-фиолетовая полоса с Rf около 0.78 (шогаолы) (рис. 3.2).При нанесении на пластинку исследуемого раствора в количестве 4 мкл,пятно, характерное для гингерола (Rf около 0,46), при детектированииокрашивается в зеленый цвет, а затем со временем цвет переходит в синий.

Пятношогаола (Rf около 0.78) имеет интенсивно синее окрашивание. Пятно гингероловс Rf около 0,15 при такой концентрации не детектируется.51Рисунок 3.2. Схема хроматограммы ТСХ по методике ЕвропейскойФармакопеи. 1 – раствор сравнения: резорцин (б) и цитраль (а); 2 – раствор сухогоэкстракта имбиря лекарственного – шогаолы (в), гингеролы (г, д).На хроматограмме раствора сравнения идентифицированы две зоны:интенсивно красная (резорцин) исветло-фиолетовая зона (цитраль). Нахроматограмме испытуемого раствора ниже уровня пятна резорцина наблюдаетсяфиолетовая полоса и тонкая фиолетовая полоса, что в соответствии сЕвропейской Фармакопеи характерно для гингеролов.

В середине между пятнамирезорцина и цитраля наблюдается темно-фиолетовая полоса, соответствующаяшогаолам (рис. 3.2). Значения Rf, рассчитанные для каждого пятна, являютсясредними из 5 хроматограмм.3.2 Изучение растворимости субстанции сухого экстракта имбиряРастворимость субстанции сухого экстракта имбиря изучали в соответствиис ОФС «Растворимость» ГФ XIII изд.Таблица 3.1. Растворимость субстанции сухого экстракта имбиря вразличных растворителяхРастворительРастворимость по ГФВода очищеннаяМало растворим52Фосфатный буферный раствор pH 7,5Мало растворимРаствор хлористоводородной кислоты Очень мало растворимpH 1,0Этиловый спирт 20%Очень мало растворимЭтиловый спирт 50%Мало растворимЭтиловый спирт 95%Мало растворимИзопропиловый спиртМало растворимИзопропиловый спирт 40%Мало растворимРастворимость субстанции оказывает значительное влияние на выбортехнологии получения и методов анализа лекарственного препарата, например, наспособгранулирования,выборгранулирующейжидкости,выборсредрастворения для анализа лекарственной формы и тд.3.3.

Изучение технологических характеристик сухого экстракта имбиряТехнологическиехарактеристикисубстанцииоказываютрешающеезначение на выбор вида твердой лекарственной формы и её технологиюполучения.Сухой экстракт имбиря лекарственного производства Naturex S.A.(Франция) представляет собой мелкий аморфный порошок (рис. 3.3).

Частицыпорошка легкие, пылят.Рис. 3.3. Внешний вид субстанции сухого экстракта имбиря.53Оценивая форму и размер частиц порошка, можно предварительно судитьо технологических характеристиках субстанции [18, 19]. На рисунке 3.4.представлена фотография частиц, сделанная при увеличении в 40 раз.Рис. 3.4. Фотографиичастиц субстанции сухого экстракта имбиря,полученные методом оптической микроскопии при увеличении в 40 раз.Как видно из рисунка, сухой экстракт имбиря представляет собойотдельные частицы и агрегаты-равносторонние, объемные, сферичечкиеаморфной структуры, размером в диапазоне 4,71 – 142 мкм [10]. По этим даннымможно судить, что данная субстанция будет обладать неудовлетворительнымитехнологическими характеристиками, что было подтверждено дальнейшимиисследованиями.Экстракт имбиря, как видно из таблицы 3.2, имеет плохую сыпучесть, чтовероятно связано с высокой когезией частиц, угол естественного откоса экстрактасоставил 62,0°.

Оценить сыпучесть порошка по скорости истечения из воронки непредставляется возможным из-за зависания порошков в воронке тестера.Насыпная плотность экстракта до уплотнения составила 0,36 г/см3, послеуплотнения - 0,43 г/см3. О плохих технологических характеристиках такжесвидетельствуют рассчитанные индексы Hausner и Carr, которые составили 1,19 и16,28 соответственно. Коэффициент сжатия экстракта равен 2,7, прессуемость 0,058 г/мм. Краевой угол смачивания составляет 40°, что говорит о том, чтовозможно использовать воду очищенную в качестве гранулирующего агента, таккак субстанция смачивается этим растворителем.54Таблица 3.2.Технологические характеристики сухого экстракта имбиря.ПоказательРезультат определенияВнешний видКраевойуголМелкий аморфный порошоксмачиванияводойочищенной40±3,0°Влагосодержание, %4,49±2,4%Сыпучестьне сыпетсяУгол естественного откоса,⁰62±3,0%Насыпная плотность до уплотнения, г/см3 0,36±2,3%Насыпная плотность после уплотнения, 0,43±2,0%г/см3Коэффициент сжатия2,7Прессуемость, г/мм0,058Hausner Ratio1,19Carr Index, %16,28Определение влагосодержания и гигроскопичности:На сыпучесть и прессуемость экстракта также влияет его влагосодержание,которое составило 4,49±0,251%.

Показания соответствуют норме, так как длясухих экстрактов влагосодержание должно быть не более 5%. [10]Гигроскопичностьпорошкаизучаливпритемпературе25°Сотносительной влажности 25%. Результаты анализа отражены на графике 3.5.55иВлагосодержание, %6543210051015202530Время, чРисунок 3.5. Зависимость влагосодержания субстанции сухого экстракта имбирялекарственного от времени при температуре 25°С и относительной влажности25%.Результаты опыта показали, что экстракт насыщается влагой воздуха втечение 1 часа до 5,273%. Через сутки влагосодержание экстракта не превысило4,976%, что свидетельствует о достижении экстрактом предела насыщения.Вследствие плохойсыпучестиэкстракта дляразработкитвердыхлекарственных форм на его основе необходимо включение вспомогательныхвеществ, улучшающих технологические свойства порошковой массы, и/илииспользование метода гранулирования как дополнительной технологическойстадии.3.4.

Разработка методик качественного и количественного анализа сухогоэкстракта имбиря3.4.1. Для качественного анализа сухого экстракта имбиря возможноприменение методики определения фенольных соединений методом ТСХ поЕвропейской фармакопее, описанной в разделе 3.1.563.4.2.Идентификацияфенольныхсоединенийметодомспектрофотометрии в ультрафиолетовой и видимой области спектраДля качественного и количественного анализа сухого экстракта имбиряисследовали возможность применения метода прямой спектрофотометриии вводных растворах. С этой целью были изучены спектральные характеристикисухого экстракта имбиря в следующих растворителях: вода очищенная; 0,1 Нраствор хлористоводородной кислоты; фосфатный буферный раствор до рН 7,5;50% спирт этиловый, 95% спирт этиловый, 20% спирт изопропиловый, 40% спиртизопропиловый.Рисунок 3.6.

Спектр поглощения 0,02% раствора сухого экстракта имбиряв воде очищенной.Рисунок 3.7. Спектр поглощения 0,02% раствора сухого экстракта имбиряв 0,1 н НСl.57Рисунок 3.8. Спектр поглощения 0,02% раствора сухого экстракта имбиряв фосфатном буферном растворе рН 7,5.Рисунок 3.9. Спектр поглощения 0,02% раствора сухого экстракта имбиряв 50% этиловом спирте.Рисунок 3.10.